不同粒徑大小的甘露糖修飾聚合物膠束制備及其靶向藥物輸送應(yīng)用

汪家偉 ，張 權(quán) ，2，葉 舟 ，崔晨宇 ，尹 健 *，2

（1.江南大學(xué) 生物工程學(xué)院，江蘇 無(wú)錫 214122；2.江南大學(xué) 糖化學(xué)與生物技術(shù)教育部重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，江蘇 無(wú)錫214122）

癌癥是目前人類面臨的最大健康難題，據(jù)世界衛(wèi)生組織（WHO）預(yù)計(jì)，2030年全世界將會(huì)有約1 200萬(wàn)人死于癌癥。在近五十年的癌癥治療史上，化療已然成為最有效的手段之一，在臨床研究中涌現(xiàn)出了500多種抗癌藥物，但是癌癥的死亡率仍然高達(dá)20.2%。其中，主要原因在于抗癌藥物的毒副作用以及癌細(xì)胞的多藥耐藥性[1-2]。因此，如何提高藥物的療效并減少毒副作用，以及克服癌細(xì)胞的耐藥性一直是研究者亟需解決的問(wèn)題。近年來(lái)，科研人員將飛速發(fā)展的納米技術(shù)與傳統(tǒng)化療創(chuàng)造性的結(jié)合，設(shè)計(jì)出了新型的靶向給藥系統(tǒng)，為癌癥的治愈帶來(lái)了光明的前景。目前，用于新型靶向給藥輸送的納米載體種類繁多，應(yīng)用較為廣泛的主要有聚合物膠束[3-4]、脂質(zhì)體[5]、樹(shù)枝狀大分子[6]和介孔硅納米粒子[7-8]等。

利用聚合物膠束為藥物載體輸送抗癌藥物，以提高藥物的靶向性和克服癌細(xì)胞的耐藥性已經(jīng)引起了廣大科研工作者的關(guān)注[9-10]。聚合物膠束主要通過(guò)兩親性分子的自組裝而得到，形成親水外殼和疏水空腔的結(jié)構(gòu)，其疏水空腔為難溶性藥物提供了一個(gè)良好的載藥環(huán)境。在體內(nèi)，聚合物膠束具有良好的穩(wěn)定性和生物相容性，并能通過(guò)增強(qiáng)滲透與滯留（EPR）效應(yīng)實(shí)現(xiàn)腫瘤的被動(dòng)靶向，提高疏水藥物的生物利用度。載藥聚合物膠束通過(guò)EPR效應(yīng)到達(dá)腫瘤區(qū)域的過(guò)程中，為了不被體內(nèi)的免疫系統(tǒng)所識(shí)別而被快速清除，延長(zhǎng)載藥膠束在血液中的長(zhǎng)時(shí)間循環(huán)，其中，膠束尺寸至關(guān)重要。一般腫瘤血管的孔洞直徑小于400 nm，體內(nèi)的腎臟會(huì)清除10 nm以下及肝臟會(huì)清除100 nm以上的納米顆粒，所以制備聚合物膠束直徑的合適尺寸為10～100 nm。另外，針對(duì)不同腫瘤，不同尺寸的載藥膠束穿透能力差別很大，從而對(duì)治療效果造成很大影響[11]。因此，制備粒徑可調(diào)控的聚合物膠束有助于最大限度地發(fā)揮納米載體的EPR效應(yīng)，從而提高藥物載體對(duì)腫瘤組織的被動(dòng)靶向功能。

在聚合物膠束表面引入對(duì)癌細(xì)胞具有特異性識(shí)別作用的功能配體，如葉酸[12]、促黃體生成素釋放激素[13]、多肽[14]、抗體[15]等，通過(guò)配體-受體介導(dǎo)的內(nèi)吞作用可以有效提高癌細(xì)胞對(duì)于載藥膠束的攝取。近年來(lái)，利用某些腫瘤細(xì)胞表面存在著高表達(dá)的甘露糖受體，在納米載體表面修飾上甘露糖分子，通過(guò)受體與甘露糖分子的特異性識(shí)別，以實(shí)現(xiàn)抗癌藥物的靶向輸送，已經(jīng)得到證明[16-17]。但是，在兩親性聚合物膠束上引入甘露糖分子，以實(shí)現(xiàn)癌細(xì)胞的靶向藥物輸送的研究卻鮮有報(bào)道。

本文作者通過(guò)原子轉(zhuǎn)移自由基聚合（ATRP）以及"click"反應(yīng)合成了具有不同嵌段比的甘露糖修飾的兩親性聚合物，采用核磁共振氫譜（1H-NMR）、透射電鏡（TEM）、動(dòng)態(tài)光散射（DLS）等表征手段，確認(rèn)分子結(jié)構(gòu)并考察不同嵌段比聚合物形成膠束的形貌和粒徑變化情況。同時(shí)，以阿霉素為模型藥物，通過(guò)細(xì)胞實(shí)驗(yàn)研究甘露糖修飾的載藥膠束對(duì)人乳腺癌細(xì)胞MDA-MB-231的抑制作用，并考察其對(duì)正常細(xì)胞HEK293的毒性。

1 材料與方法

1.1 主要試劑

丙烯酸（分析純）、2，2-二甲基-1，3-二氧戊烷-4-甲醇（Solketal，99%）、1，1，4，7，7-五甲基-二乙烯基三胺 （PMDETA，99%）、甲基丙烯酸縮水甘油酯（GMA，97%）、 三氟甲磺酸三甲基硅酯（TMSOTf，99%）、2，2'-聯(lián)吡啶 （Bpy，99%）、 苯甲酰氯 （分析純）、（+）-L-抗壞血酸鈉（99%）、五水硫酸銅（98%）、2-溴丙酸甲酯（MBrP，99%）均于百靈威科技有限公司購(gòu)買；D-甘露糖（D-Mannose，分析純）、鹽酸阿霉素（DOX·HCl，99%）分別購(gòu)于國(guó)藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司與北京華奉聯(lián)博科技有限公司。

1.2 主要儀器

AVANCE 400M型核磁共振儀，德國(guó)Bruker公司；Nexus 470紅外光譜儀，美國(guó)Nicolet公司；Nano ZS動(dòng)態(tài)光散射儀（DLS），英國(guó) Malvern公司；JEM-2 100透射電子顯微鏡（TEM），日本電子株式會(huì)社；激光共聚焦顯微鏡（CLSM），日本尼康株式會(huì)社。

1.3 PSA-b-PGMA-Mannose聚合物膠束的制備合成

1.3.1 炔丙基-α-D-吡喃甘露糖的合成按照文獻(xiàn)[18]制備炔丙基-α-D-吡喃甘露糖。

1.3.2 單體甲基丙烯酸丙酮縮甘油酯（SA）的合成按照文獻(xiàn) [19]制備單體甲基丙烯酸丙酮縮甘油酯（SA）。

1.3.3 PSA-b-PGMA-Mannose的合成 將3.4 g單體SA溶解于1.7 mL的環(huán)己酮中，通入氬氣15 min，以保證瓶?jī)?nèi)的無(wú)氧環(huán)境，依次加入130.4 mg CuBr、189.6 μL PMDETA，密封燒瓶，在氬氣的保護(hù)下，向瓶中注入101.2 μL的引發(fā)劑MBrP，在90℃油浴下反應(yīng)13 h。反應(yīng)結(jié)束后，向瓶中加入THF10 mL以終止反應(yīng)，并置于空氣中攪拌1 h。將瓶?jī)?nèi)混合液通過(guò)中性氧化鋁柱，收集所得淺色液體，旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)除去溶劑，將瓶?jī)?nèi)粘稠液體逐滴加于正己烷中沉淀，反復(fù)三次，將所得沉淀干燥即可得聚甲基丙烯酸縮丙酮甘油酯（PSA）。

將2 g的PSA溶解于1.4 mL的二甲亞砜中，通入氬氣15 min，以保證瓶?jī)?nèi)的無(wú)氧環(huán)境，依次加入56.4 mg CuBr，2.8 g GMA 和 83 μL PMDETA， 密封燒瓶，在氬氣的保護(hù)下，40℃油浴下反應(yīng)3 h。反應(yīng)結(jié)束后，向瓶中加入THF 10 mL以終止反應(yīng)，并置于空氣中攪拌1 h。將瓶?jī)?nèi)混合液通過(guò)中性氧化鋁柱，收集所得液體，旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)除去溶劑，將瓶?jī)?nèi)粘稠液體逐滴加于正己烷中沉淀，反復(fù)三次，將所得沉淀干燥即可得產(chǎn)物PSA-b-PGMA。保持PSA當(dāng)量不變，調(diào)節(jié)反應(yīng)中單體GMA的當(dāng)量，即n（PSA）∶n（GMA）=1∶50，1∶90，1∶120，1∶150 合成具有不同嵌段比的聚合物。

將200 mg PSA-b-PGMA溶解于4.5 mL N，N’-二甲基甲酰胺中，依次加入46.8 mg疊氮化鈉和38 mg氯化銨，在50℃油浴下反應(yīng)12 h。反應(yīng)結(jié)束，將瓶?jī)?nèi)溶液過(guò)濾，旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)除去溶劑，將瓶?jī)?nèi)粘稠液體加入水中沉淀，反復(fù)三次，將所得沉淀干燥即得產(chǎn)物PSA-b-PGMA-N3。

取燒瓶1，稱取50 mg PSA-b-PGMA-N3加入其中，再加入2 mL DMF進(jìn)行溶解，通入15 min氬氣。另取燒瓶2，依次將44 mg炔丙基-α-D-吡喃甘露糖、50 mg五水硫酸銅晶體以及86 mg（+）-L-抗壞血酸鈉加入其中，用1.5 mL蒸餾水進(jìn)行溶解，向瓶?jī)?nèi)通入15 min氬氣。充分溶解后，將燒瓶2內(nèi)水溶液緩慢滴加到燒瓶1中，攪拌，繼續(xù)通入氬氣10 min，密封燒瓶，在油浴70℃反應(yīng)2 d。過(guò)濾反應(yīng)液，在透析袋（MW10000）中透析3 d，每4 h換一次水，冷凍干燥透析袋內(nèi)溶液，得到目標(biāo)產(chǎn)物PSA-b-PGMA-Mannose。

1.4 載藥聚合物膠束的制備

將50 mg鹽酸阿霉素和3當(dāng)量的三乙胺溶解在10 mL蒸餾水中，室溫下攪拌4 h，期間嚴(yán)格避光，用二氯甲烷進(jìn)行萃?。?0mL×3），旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)除去溶劑，真空干燥12 h后即得脫鹽后的阿霉素（DOX）。取4 mg脫鹽DOX溶解在4 mL DMSO中，靜置后經(jīng)0.45 μm濾膜過(guò)濾待用。另將PSA-b-PGMA-Mannose溶解在5 mL DMSO中，并用0.45 μm濾膜過(guò)濾待用。

分別取適量上述待用溶液混合攪拌，并逐滴加入磷酸鹽緩沖液（PBS，pH 7.4）8 mL，攪拌 1 h。 隨后將混合液移至透析袋（MW10000）中，在同樣的PBS體系中透析3 d，每隔4 h換一次水，最后將透析袋內(nèi)溶液冷凍干燥3 d，即得到負(fù)載阿霉素的聚合物膠束（DOX@PSA-b-PGMA-Mannose）。

1.5 載藥膠束的細(xì)胞內(nèi)吞

將對(duì)數(shù)期生長(zhǎng)的MDA-MB-231和HEK293兩種細(xì)胞分別在培養(yǎng)皿中接種，貼壁后，加入40 μg/mL的DOX@PSA-b-PGMA-Mannose溶液再培養(yǎng)，一天后，移去培養(yǎng)液，并用PBS溶液清洗2次。然后，進(jìn)行細(xì)胞的固定染色，具體操作：用1 mL 4.0%甲醛溶液固定細(xì)胞20 min。再用染料DAPI染色細(xì)胞核20 min[20]。在激光共聚焦顯微鏡下觀察DOX@PSA-b-PGMAMannose載藥膠束在兩種細(xì)胞內(nèi)部的分布情況，設(shè)置405/561為激發(fā)波長(zhǎng)，發(fā)射波長(zhǎng)則設(shè)置為417-477/570-1 000。

對(duì)MDA-MB-231的甘露糖封堵試驗(yàn)，即提前將5 mg/mL濃度的甘露糖水溶液與細(xì)胞共同培養(yǎng)4 h，然后再加入載藥膠束共同培養(yǎng)，接下來(lái)的操作與上述一樣。

1.6 細(xì)胞毒性評(píng)價(jià)

采用MTT法考察DOX@PSA-b-PGMAMannose載藥膠束對(duì)的MDA-MB-231和HEK293兩種細(xì)胞的細(xì)胞毒性[21]。將兩種細(xì)胞以10000/孔接種在96孔板中，培養(yǎng)一段時(shí)間后，將載藥膠束DOX@PSA-b-PGMA-Mannose或原藥DOX的血清培養(yǎng)基加入孔板中共培養(yǎng)，兩天后，移去孔中培養(yǎng)液，并以PBS清洗2次，然后，將100 μL MTT溶液（1 mg/mL）更換為 100 μL DMSO，搖床震蕩 15 min。在酶標(biāo)儀上測(cè)定波長(zhǎng)490 nm處的吸光度值（OD）。

2 結(jié)果與分析

2.1 兩親性嵌段聚合物PSA-b-PGMA-Mannose的合成

兩親性嵌段聚合物PSA-b-PGMA-Mannose的合成示意圖，如圖1所示。以MBrP引發(fā)SA聚合，得到聚合物PSA；再以聚合物PSA引發(fā)不同反應(yīng)當(dāng)量的GMA聚合，得到不同嵌段比例的聚合物PSA-b-PGMA，通過(guò)核磁氫譜計(jì)算得到的聚合物分別為PSA30-b-PGMA23，PSA30-b-PGMA45，PSA30-b-PGMA90，PSA30-b-PGMA115，其中 PSA30-b-PGMA45核磁氫譜見(jiàn)圖2（a）。合成的PSA-b-PGMA中存在的環(huán)氧基團(tuán)易和疊氮化鈉進(jìn)行開(kāi)環(huán)反應(yīng)，從而在聚合物上引入疊氮基團(tuán)，得到PSA-b-PGMA-N3。利用“click”反應(yīng)，在疊氮基修飾的兩嵌段聚合物上成功引入甘露糖分子，即得到PSA-b-PGMA-Mannose，核磁結(jié)果如圖2（b），其中，在8.17 ppm處出現(xiàn)了三氮唑氫的特征峰，標(biāo)志著“click”反應(yīng)的成功。

圖1 兩親性嵌段聚合物PSA-b-PGMA-Mannose的合成示意圖Fig.1 Synthetic route of the PSA-b-PGMA-Mannose

2.2 嵌段聚合物的紅外光譜分析

依次分別將聚合物PSA30-b-PGMA23、PSA30-b-PGMA23-N3以及PSA30-b-PGMA23-Mannose干燥粉末1 mg和無(wú)水溴化鉀100 mg混合，充分研磨后壓片，在4 000～400 cm-1進(jìn)行掃描[22]，結(jié)果如圖3所示?？梢钥吹皆? 720 cm-1處PSA30-b-PGMA23光譜有較強(qiáng)的C=O峰；當(dāng)引入疊氮基團(tuán)后，圖3中B曲線中，在2 106 cm-1處出現(xiàn)了疊氮基團(tuán)特征峰；而當(dāng)PSA30-b-PGMA23-N3與炔丙基-α-D-吡喃甘露糖反應(yīng)后，疊氮基團(tuán)特征峰的消失，驗(yàn)證了“click”反應(yīng)的發(fā)生以及甘露糖的成功修飾（圖3中C曲線）。

圖2 嵌段聚合物的核磁共振1HNMR譜圖Fig.2 1HNMR spectra of the polymers

2.3 不同嵌段聚合物膠束的TEM與DLS表征

通過(guò)DLS測(cè)定不同嵌段比例膠束的流體力學(xué)直徑，并且觀察它們粒徑之間的變化趨勢(shì)，結(jié)果見(jiàn)圖4。實(shí)驗(yàn)結(jié)果發(fā)現(xiàn)，4種不同嵌段比的膠束平均粒徑分別為255，105，78，24 nm?？梢园l(fā)現(xiàn)隨著親水嵌段的比例增大，膠束的粒徑減小。選取空白膠束PSA30-b-PGAM115-Mannose，當(dāng)其負(fù)載DOX后，平均流體力學(xué)直徑由24 nm增大為97 nm（圖5）。

圖3 嵌段聚合物的紅外光譜Fig.3 FT-IR spectra of the polymers

通過(guò)TEM觀察不同嵌段比例膠束的形貌，結(jié)果見(jiàn)圖6，實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明膠束呈球形，粒徑分散均勻，分散性較好，而且和DLS測(cè)定的結(jié)果相似，隨著親水嵌段比例的增大，電鏡圖中的膠束粒徑越來(lái)越小。根據(jù)文獻(xiàn)[11]，通常聚合物膠束粒徑在50～100 nm之間時(shí)，其在體內(nèi)具有顯著的EPR效應(yīng)，有利于在腫瘤部位的富集。故接下來(lái)的體外藥物釋放和細(xì)胞水平實(shí)驗(yàn)，選取平均粒徑為78 nm的PSA30-b-PGMA90-Mannose作為藥物載體進(jìn)行評(píng)價(jià)。

圖4 空白膠束在水溶液中的流體力學(xué)直徑分布Fig.4 Diameter and distribution of the blank micelles

2.4 體外藥物釋放研究

通過(guò)分光光度計(jì)法可測(cè)得，載藥膠束DOX@PSA30-b-PGMA90-Mannose的載藥量為11%，包封率為22%。根據(jù)文獻(xiàn)報(bào)道，腫瘤組織微環(huán)境的pH值比正常組織低，當(dāng)載藥膠束在血液（pH 7.4）循環(huán)時(shí)釋放藥物量較低，而在腫瘤處快速釋放大量藥物，可以使藥物選擇性地在腫瘤組織發(fā)揮藥效，并減輕對(duì)正常組織的毒副作用。因此，本文選擇了pH 7.4和pH 3.5兩種釋放介質(zhì)以探究我們?cè)O(shè)計(jì)的聚合物膠束是否具有pH敏感性和緩釋性能。取載藥膠束DOX@PSA30-b-PGMA90-Mannose 1 mL，轉(zhuǎn)移至透析管中，在 37℃，25 mL的pH 7.4和pH 3.5緩沖液中分別測(cè)定DOX的藥物體外釋放，實(shí)驗(yàn)全程避光。將燒杯置于恒溫震蕩培養(yǎng)箱中，設(shè)置恒定溫度為37℃，振蕩頻率為100 r/min。每隔一段時(shí)間吸取1 mL釋放介質(zhì)，平行實(shí)驗(yàn)3次，計(jì)算累積藥物釋放率，同時(shí)補(bǔ)加相同體積的介質(zhì)。實(shí)驗(yàn)結(jié)果如圖7所示，在pH 3.5的介質(zhì)中，藥物釋放速度以及累計(jì)釋放率均高于在pH 7.4介質(zhì)中的釋放。在pH 3.5的介質(zhì)中，48 h累積釋放率可達(dá)到74.6%。實(shí)驗(yàn)結(jié)果說(shuō)明，作者設(shè)計(jì)的聚合物膠束顯示出了較好的pH敏感性和藥物緩釋性能，能夠很好地響應(yīng)腫瘤組織的微環(huán)境而釋放藥物，從而減少對(duì)正常組織的毒副作用并增強(qiáng)治療效果。

圖5 空白膠束PSA30-b-PGAM115-Mannose載藥前后在水溶液中的流體力學(xué)直徑分布Fig.5 Diameter and distribution of the micelles

圖6 空白膠束的透射電鏡照片F(xiàn)ig.6 TEM images of the blank micelles

圖7 負(fù)載阿霉素的載藥膠束分別在pH 7.4和pH 3.5條件下的藥物釋放情況Fig.7 DOX release profile from DOX@PSA30-b-PGMA90-Mannose at pH 7.4 and pH 3.5，respectively

2.5 載藥聚合物膠束細(xì)胞內(nèi)吞及攝取研究

選取載藥膠束DOX@PSA30-b-PGMA90-Mannose，通過(guò)激光共聚焦顯微鏡考察甘露糖受體介導(dǎo)的細(xì)胞內(nèi)吞作用，其結(jié)果見(jiàn)圖8。分別以MDAMB-231癌細(xì)胞和HEK293正常細(xì)胞為細(xì)胞模型，其中僅癌細(xì)胞表面具有高表達(dá)的甘露糖受體，將載藥膠束DOX@PSA30-b-PGMA90-Mannose與細(xì)胞分別進(jìn)行培養(yǎng)；另外，將MDA-MB-231癌細(xì)胞提前進(jìn)行甘露糖封堵，再與載藥膠束DOX@PSA30-b-PGMA90-Mannose進(jìn)行培養(yǎng)。在圖8（a）中可以看到，在癌細(xì)胞MDA-MB-231內(nèi)出現(xiàn)較高強(qiáng)度的由DOX發(fā)出的紅色熒光，該現(xiàn)象可以說(shuō)明載藥膠束DOX@PSA30-b-PGMA90-Mannose已被癌細(xì)胞大量攝取。而由圖8（b）可知，經(jīng)過(guò)甘露糖封堵的MDA-MB-231癌細(xì)胞，由于MDA-MB-231細(xì)胞表面的甘露糖受體提前與甘露糖結(jié)合，所以再跟載藥膠束進(jìn)行培養(yǎng)的時(shí)候，癌細(xì)胞表面幾乎沒(méi)有未被甘露糖封堵的甘露糖受體，所以攝取載藥膠束的能力極差，和未封堵的癌細(xì)胞有非常明顯的差異。由圖8（c）對(duì)于甘露糖受體低表達(dá)的HEK293細(xì)胞，細(xì)胞內(nèi)紅色熒光強(qiáng)度同樣很低，說(shuō)明幾乎沒(méi)有載藥膠束被攝入HEK293細(xì)胞內(nèi)。上述實(shí)驗(yàn)結(jié)果說(shuō)明，我們所制備的甘露糖修飾的膠束具有良好的靶向性，可以被癌細(xì)胞表面的甘露糖受體特異性識(shí)別，通過(guò)內(nèi)吞進(jìn)入癌細(xì)胞內(nèi)，然后藥物釋放發(fā)揮藥效，抑制癌細(xì)胞的生長(zhǎng)；同時(shí)減少了載藥膠束被正常細(xì)胞識(shí)別內(nèi)吞，從而降低抗癌藥物的毒副作用。

圖8 MDA-MB-231細(xì)胞，甘露糖封堵的MDA-MB-231細(xì)胞和HEK-293細(xì)胞分別對(duì)DOX@PSA30-b-PGMA90-Mannose的攝取情況Fig.8 Celluar uptake of DOX@PSA30-b-PGMA90-Mannose

2.6 空白膠束和載藥膠束的細(xì)胞毒性評(píng)價(jià)

選取空白膠束 PSA30-b-PGMA90-Mannose，實(shí)驗(yàn)采用MTT法考察其對(duì)兩種細(xì)胞的毒性。配制5種濃度的空白膠束：0，25，50，100，200，500 μg/mL，分別與兩種細(xì)胞培養(yǎng)兩天，統(tǒng)計(jì)細(xì)胞存活率，結(jié)果如圖9所示。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，當(dāng)空白膠束濃度增加到500 μg/mL時(shí)，兩種細(xì)胞存活率依然高達(dá)80%～90%，證明該空白膠束具有較好的生物相容性。

同樣采用MTT法評(píng)價(jià)載藥膠束DOX@PSA30-b-PGMA90-Mannose對(duì)兩種細(xì)胞的細(xì)胞毒性情況，并以等量的DOX作為對(duì)比，結(jié)果如圖10。由圖10（a）所示，對(duì)于癌細(xì)胞，載藥膠束DOX@PSA30-b-PGMA90-Mannose具有比DOX更強(qiáng)的細(xì)胞毒性；而由圖10（b）可知，對(duì)于正常細(xì)胞，載藥膠束具有比DOX較低的細(xì)胞毒性。這是因?yàn)楦事短切揎椀妮d藥膠束能夠特異性識(shí)別癌細(xì)胞表面高表達(dá)的甘露糖受體，并被內(nèi)吞進(jìn)入癌細(xì)胞；而低表達(dá)甘露糖受體的HEK293細(xì)胞無(wú)法識(shí)別甘露糖修飾的載藥膠束，所以內(nèi)吞攝取載藥膠束的能力很低。

圖9 空白膠束對(duì)MDA-MB-231以及HEK293的細(xì)胞毒性Fig.9 Cytotoxicity of PSA30-b-PGMA90-Mannose against MDA-MB-231and HEK-293 cells

圖10 載藥膠束對(duì)MDA-MB-231和HEK-293的細(xì)胞毒性Fig.10 Cytotoxicity of DOX@PSA30-b-PGMA90-Mannose against MDA-MB-231 and HEK-293cells

3 結(jié) 語(yǔ)

本論文合成了不同親疏水嵌段比例的聚合物PSA-b-PGMA-Mannose，并利用這些嵌段聚合物制備膠束，研究膠束的形貌及粒徑變化情況，發(fā)現(xiàn)隨著親水嵌段的比例增加，膠束的流體力學(xué)直徑變小。選取膠束PSA30-b-PGMA90-Mannose，以阿霉素DOX作為疏水藥物，利用嵌段聚合物的疏水鏈段所形成的空腔包裹藥物DOX制備了載藥聚合物膠束DOX@PSA30-b-PGMA90-Mannose。研究其體外藥物釋放情況，并考察其對(duì)乳腺癌細(xì)胞MDA-MB-231的抑制效果。結(jié)果顯示，載藥膠束能夠被甘露糖受體特異性識(shí)別而內(nèi)吞進(jìn)入細(xì)胞內(nèi)，并釋放藥物。本文制備的載藥膠束對(duì)癌細(xì)胞，具有比原藥DOX更高的細(xì)胞毒性，而毒副作用較低。因此，我們制備的聚合物膠束作為一種新型藥物載體有望應(yīng)用于靶向治療癌癥。