血清TXNIP、Trx、PKCβ1水平與2型糖尿病患者頸動脈內中膜厚度的相關性分析

王海麗，王洪，白顯樹，薄飛，杜薇，李鳳娟

（承德市中心醫(yī)院 超聲診斷科，河北 承德 067000）

2型 糖 尿?。╰ype 2 diabetes mellitus,T2DM）患者多伴有血管病變，且相較于健康同齡人，T2DM患者更易發(fā)生動脈粥樣硬化[1]。由于T2DM患者頸動脈內中膜厚度（intima-media thickness,IMT）增厚是動脈粥樣硬化的早期病理改變基礎[2]。有研究發(fā)現，硫氧還蛋白相互作用蛋白（thioredoxin interacting protein,TXNIP）和硫氧還蛋白（Thioredoxin,Trx）參與機體氧化應激反應，誘發(fā)內皮血管損傷及病變，加速動脈粥樣斑塊的形成[3]。此外，血小板過度活化是發(fā)生血管相關并發(fā)癥的重要環(huán)節(jié)，而蛋白激酶Cβ1（protein kinase Cβ1,PKCβ1）可誘導血小板聚集及活化，是糖尿病血管病變的重要效應分子[4]。但是上述研究重點關注于血管損傷及病變，對于這類蛋白是否影響頸動脈IMT值，尚缺乏大量臨床報道。本研究旨在探討T2DM患者血清中TXNIP、Trx及PKCβ1表達水平是否是影響頸動脈IMT的危險因素，其相互之間是否存在相關性，從而為早期診斷及干預頸動脈IMT增厚提供臨床依據。

1 資料與方法

1.1 一般資料

選取2015年4月—2017年5月承德市中心醫(yī)院就診的114例T2DM作為觀察組。其中，男性59例，女性55例；平均年齡（59.2±15.2）歲。納入標準：①符合世界衛(wèi)生組織（1990年）糖尿病診斷標準及2013版《中國2型糖尿病防治指南》中有關診斷標準[5]；②年齡35～80歲。排除標準：①合并高滲綜合征、酮癥酸中毒等糖尿病急性并發(fā)癥；②合并有急慢性感染；③合并有嚴重的肝腎功能不全；④合并有惡性腫瘤。同時選擇同期健康體檢者114例作為對照組。其中，男性57例，女性57例；平均年齡（58.5±15.9）歲。本研究通過本院倫理委員會批準，患者簽署知情同意書。

1.2 研究方法

1.2.1 一般資料收集并記錄兩組臨床基本信息，包括性別組成、年齡、體重指數（BMI）[體重（kg）/身高（m2）]、收縮壓（SBP）、舒張壓（DBP）、是否吸煙及是否合并高血壓。

1.2.2 實驗室指標檢查采用邁瑞220全自動生化分析儀（深圳邁瑞醫(yī)療國際有限公司），通過過氧化物酶法檢測兩組空腹血糖（FPG），通過磷酸甘油氧化酶法檢測甘油三酯（TG），通過雙試劑直接法檢測低密度脂蛋白（LDL）與高密度脂蛋白（HDL），通過比色法檢測總膽固醇（TC）。另外采用D-10血紅蛋白檢測系統(tǒng)（美國Bio-RAD公司），通過離子交換高壓液相色譜法檢測糖化血紅蛋白水平（HbA1c）。

1.2.3 TXNIP、Trx及PKCβ1水平檢測抽取兩組晨起空腹靜脈血6～7 ml，室溫靜置，離心3 000 r/min，10 min，小心吸取上層血清凍于-80℃冰箱備用。采用酶聯免疫吸附法，按照試劑盒步驟分別檢測血清中TXNIP、Trx及PKCβ1水平，試劑盒分別購自武漢艾美捷科技有限公司、上海晶抗生物工程有限公司及上海信裕生物科技有限公司。

1.2.4 頸動脈IMT檢測依據《血管超聲檢查指南》的相關操作方法及標準[6]：患者取仰臥位并充分暴露頸部，將Aplio 300超聲診斷儀（日本東芝株式會社）探頭（探頭型號LT-704SBT、中心頻率7.5 MHz）放置于患者胸鎖乳頭肌的前緣及后緣，縱橫向探查及確認頸總動脈、頸動脈分叉位置，在距離頸動脈分叉下方1.0～1.5 cm測量并記錄IMT值，得出雙側頸動脈IMT均值；其中頸動脈IMT 1.0～＜1.5 mm定義為內中膜增厚。

1.3 統(tǒng)計學方法

數據分析采用SPSS 22.0統(tǒng)計軟件。計數資料以構成比表示，比較用χ2檢驗；計量資料以均數±標準差（±s）表示，比較用t檢驗，相關性分析用Spearman法，影響因素的分析采用Logistic回歸模型，P＜0.05為差異有統(tǒng)計學意義。

2 結果

2.1 兩組一般資料和實驗室指標比較

兩組性別、年齡、BMI、SBP、DBP、TG、LDL、HDL、TC、吸煙人數及合并高血壓比較，差異無統(tǒng) 計 學意義（P＞0.05）；而FPG、HbA1c、TXNIP、Trx、PKCβ1及頸動脈IMT比較，差異有統(tǒng)計學意義（P＜0.05）。見表1。

2.2 觀察組亞組人口學參數和實驗室指標比較

依據是否觀察到內中膜增厚，將觀察組研究對象分為內中膜增厚亞組和內中膜非增厚亞組。結果顯示，兩亞組性別、BMI、SBP、DBP、TG、LDL、HDL、TC、吸煙及合并高血壓比較，差異無統(tǒng)計學意 義（P＞0.05）；但 年 齡、FPG、HbA1c、TXNIP、Trx、PKCβ1及頸動脈IMT比較，差異有統(tǒng)計學意義（P＜0.05）。見表2。

2.3 頸動脈IMT多因素Logistic回歸分析

以頸動脈IMT為因變量，取單因素分析中差異有統(tǒng)計學意義的變量進行多因素Logistic回歸分析。結果顯示，HbA1c、TXNIP、Trx及PKCβ1均是影響頸動脈IMT的獨立危險因素（P＜0.05）。見表3。

2.4 TXNIP、Trx及P KCβ1與頸動脈IMT相關性分析

血清中TXNIP、Trx、PKCβ1與頸動脈IMT呈正相關（P＜0.05），且TXNIP與頸動脈IMT相關系數略高于其他2個指標。見表4。

表1 兩組患者一般資料和實驗室指標比較（n=114）

表2 觀察組亞組人口學參數和實驗室指標比較

表4 TXNIP、Trx、PKCβ1與頸動脈IMT相關性

3 討論

流行病學數據顯示，1980年我國糖尿病發(fā)病率約為0.67%，而近10年糖尿病發(fā)病率約為4.5%。其中，年齡＞60歲城市和農村人口糖尿病發(fā)病率甚至高達13.13%和7.78%，且T2DM患者居多，占所有糖尿病患者約90%。因此，T2DM已成為威脅我國人民健康的首要非傳染性疾病[5]。由于T2DM的危害主要在于引起的并發(fā)癥，而根據并發(fā)癥部位可分為微血管并發(fā)癥和大血管并發(fā)癥。研究發(fā)現，通過控制血糖可降低微血管并發(fā)癥發(fā)病率，但對于大血管并發(fā)癥，尤其是心腦血管病，其效果并不顯著[7]。其原因之一在于大血管病變多已伴有血管壁增厚、斑塊形成，而血糖調節(jié)對已經增厚的血管壁或斑塊影響較小。因此，早期干預是降低T2DM大血管并發(fā)癥的最佳手段。其中頸動脈IMT是目前公認的用于評估心腦血管大血管病變的早期檢測指標，證實哪些指標與頸動脈IMT指標有相關性，不僅有利于提高早期診斷的準確性，同時也為治療提供新的靶點。

研究發(fā)現，高血糖可誘發(fā)機體氧化應激反應，進而抑制血管內皮細胞遷移及新生血管生成，并誘導炎癥級聯反應[8]。而TXNIP及Trx均是氧化應激反應中重要的效應分子。當機體處于氧化應激狀態(tài)下，大量Trx會釋放入血，引起血液中Trx表達升高，因此，血清中Trx含量可以作為判斷氧化應激損傷嚴重程度指標之一。正如本研究結果所示，T2DM患者血清中Trx含量高于對照組，同時內中膜增厚亞組高于內中膜非增厚亞組，由此推測，頸動脈IMT增厚程度與氧化應激損傷存在聯系。此外，Trx還可上調超氧化物歧化酶表達，抑制腫瘤壞死因子α分泌[9]。可見大量釋放的Trx具有抗氧化應激、抑制炎癥反應的作用。但是高糖引起氧化應激反應還可上調TXNIP表達，而TXNIP可特異性結合Trx，從而抑制Trx的生物學活性[10]。而本結果顯示，各組TXNIP的表達水平高低與Trx一致（即內中膜增厚亞組血清中TXNIP含量最高，而對照組則最低）。目前，TXNIP除與Trx結合并抑制Trx的作用外，其他機制仍不明確。但有研究認為[11]，TXNIP可影響細胞黏附分子、血管內皮生長因子及炎癥因子的表達。由此推測，TXNIP可能通過多種途徑參與血管性病變過程。PKCβ1是一種常見的蛋白激酶PKC亞型之一。以往研究顯示，血液流動性減弱、血液成分異常等因素是導致內中膜增厚的另一因素；而PKCβ1可通過誘導血小板聚集、活化等作用，使血液黏稠及促使血栓生成[12]。本研究發(fā)現，血清中PKCβ1表達趨勢與TXNIP、Trx均一致。提示3者可能均是頸動脈IMT的獨立危險因素。隨后筆者通過Logistic回歸分析顯示，HbA1c、TXNIP、Trx及PKCβ1均是頸動脈IMT增厚的獨立危險因素，HbA1c是反應機體血糖水平的可行指標之一。通過Spearman相關性分析發(fā)現，血清TXNIP含量水平相較于Trx或PK Cβ1，與頸動脈IMT具有更高的相關性。

綜上所述，對于T2DM患者，其血清中TXNIP、Trx及PKCβ1含量水平均與頸動脈IMT值存在相關性，通過靶向TXNIP、Trx及PK Cβ1的治療有利于減少T2DM大血管并發(fā)癥的發(fā)生。鑒于此次納入病例數較少，后續(xù)還需進行大樣本、隨機及雙盲研究，從而獲得更具可信的結論。