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    MicroRNA-7對膀胱癌診斷和復發(fā)的作用機制研究*

    2019-04-24 06:07:44歐陽波武明瑞李家兵
    中國現(xiàn)代醫(yī)學雜志 2019年8期
    關鍵詞:尿沉渣泌尿膀胱癌

    歐陽波,武明瑞,李家兵

    [綿陽市第三人民醫(yī)院(四川省精神衛(wèi)生中心) 泌尿外科,四川 綿陽 621000]

    膀胱癌具有易復發(fā)、易轉(zhuǎn)移等特點,容易發(fā)生局部進展和遠處轉(zhuǎn)移。提高膀胱癌的診療水平,對其早期診斷和及時隨訪具有重大意義[1-5]。MicroRNA-7(miR-7)作為腫瘤研究的熱點因子,抑制受體激酶插入 嵌合 受 體(kinase insert domain-containing receptor,KDR)、血管內(nèi)皮生長因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)及 胰 島 素 樣 生 長 因 子(insulin like growth factor,IGF)等基因表達,在腫瘤發(fā)生、發(fā)展中miRNA發(fā)揮抑癌基因作用,其可調(diào)控多種腫瘤[6-7]。本研究旨在探討血清和尿沉渣miR-7用于膀胱癌診斷、預后及隨訪的臨床意義。

    1 資料與方法

    1.1 一般資料

    選取2014年12月—2015年12月綿陽市第三人民醫(yī)院收治的90例膀胱癌(膀胱癌組)、30例正常(正常組)、30例泌尿結石(泌尿結石組)及30例泌尿感染患者(泌尿感染組)病例資料。膀胱癌患者經(jīng)病理組織學確診,均行診斷性電切或膀胱切除術,術后常規(guī)灌注吡柔比星或表柔比星,膀胱鏡檢1次/ 3個月。膀胱癌組:男性62例,女性28例;平均發(fā)病年齡(49.53±12.30)歲;TNM分期,Ⅰ、Ⅱ期35例,Ⅲ、Ⅳ期55例。正常組:男性15例,女性15例;平均年齡(46.59±12.96)歲。泌尿結石組:男性20例,女性10例;平均發(fā)病年齡(51.33±11.92)歲。泌尿感染組:男性19例,女性11例;平均發(fā)病年齡(50.66±10.35)歲。本研究通過本院倫理委員會批準,患者及家屬簽署知情同意書。

    1.2 樣品收集

    分別于入院當日、治療后第2天及隨訪時采血。清晨空腹采集膀胱癌患者、正常、泌尿結石及泌尿感染患者靜脈血10 ml,2 000 r/min離心15 min,棄去血漿留取血清待檢。收集膀胱癌、正常、泌尿結石及泌尿感染患者晨起中段尿150 ml,2 000 r/min離心15 min,吸掉上清留取尿沉渣用于提取RNA。

    1.3 實時聚合酶鏈反應

    采用Trizol法提取血液和尿液內(nèi)總RNA。用含有gDNA橡皮擦功能的PrimeScript RT試劑盒進行逆轉(zhuǎn)錄,合成cDNA進行并擴增,用SYBR Premix Ex TaqⅡ試劑盒按照說明書操作,進行實時聚合酶鏈反應(日本TaKaRa公司,大連寶生生物技術有限公司)。每個實驗重復≥3次,通過計算miR-7基因的相對表達量。

    1.4 統(tǒng)計學方法

    數(shù)據(jù)分析采用SPSS 22.0統(tǒng)計軟件。計量資料以均數(shù)±標準差(±s)表示,比較用方差分析,進一步兩兩比較用LSD-t檢驗。P<0.05為差異有統(tǒng)計學意義。

    2 結果

    2.1 4組患者血清及尿沉渣miR-7 mRNA水平比較

    4組患者血清及尿沉渣miR-7 mRNA水平比較,差異有統(tǒng)計學意義(P<0.05);與正常組比較,膀胱癌組患者血清和尿沉渣miR-7 mRNA表達下降(P<0.05)。其他3組比較,差異無統(tǒng)計學意義(P>0.05)。見表1。

    表1 4組患者血清及尿沉渣miR-7 mRNA水平比較(±s)

    表1 4組患者血清及尿沉渣miR-7 mRNA水平比較(±s)

    組別 n 血清 尿沉渣正常組 30 1.00±0.00 1.00±0.00泌尿結石組 30 0.96±0.16 0.94±0.12泌尿感染組 30 1.02±0.12 1.01±0.16膀胱癌組 90 0.61±0.07 0.74±0.10 F值 71.510 37.820 P值 0.000 0.000

    2.2 血清及尿沉渣miR-7的診斷價值

    膀胱癌患者血清miR-7 AUC曲線下面積為0.82,敏感性為72.00%,特異性為80.00%;尿沉渣miR-7 AUC曲線下面積為0.89,敏感性為83.33%,特異性為86.67%。膀胱癌患者尿沉渣miR-7診斷價值優(yōu)于血清miR-7(P=0.001)。見表2。

    表2 血清及尿沉渣miR-7診斷價值分析

    2.3 膀胱癌患者不同分期血清及尿沉渣miR-7 mRNA表達水平比較

    膀胱癌患者血清及尿沉渣miR-7 mRNA表達水平比較,采用t檢驗,差異有統(tǒng)計學意義(P<0.05),TNM Ⅰ、Ⅱ期膀胱癌患者血清及尿沉渣miR-7 mRNA表達高于TNM Ⅲ、IV期患者,即隨著膀胱癌患者TNM分期而加重。見表3。

    表3 不同分期膀胱癌患者血清及尿沉渣miR-7 mRNA表達水平比較(±s)

    表3 不同分期膀胱癌患者血清及尿沉渣miR-7 mRNA表達水平比較(±s)

    分期 n 血清miR-7 mRNA 尿沉渣miR-7 mRNA I、II期 35 1.42±0.13 1.75±0.14 III、IV期 55 1.20±0.10 1.16±0.11 t值 7.347 18.272 P值 0.000 0.000

    2.4 膀胱癌未復發(fā)與復發(fā)患者血清及尿沉渣miR-7 mRNA表達水平比較

    對90膀胱癌患者進行術后隨訪,隨訪時間(1.36±0.59)年,其中25例出現(xiàn)術后復發(fā)。膀胱癌未復發(fā)與復發(fā)患者血清及尿沉渣miR-7 mRNA表達水平比較,經(jīng)t檢驗,差異有統(tǒng)計學意義(P<0.05),膀胱癌復發(fā)患者血清及尿沉渣miR-7 mRNA表達較未復發(fā)患者下降。見表4。

    表4 膀胱癌未復發(fā)與復發(fā)患者血清及尿沉渣miR-7 mRNA表達水平比較(±s)

    表4 膀胱癌未復發(fā)與復發(fā)患者血清及尿沉渣miR-7 mRNA表達水平比較(±s)

    組別 n 血清miR-7 mRNA 尿沉渣miR-7 mRNA未復發(fā) 65 1.37±0.11 1.51±0.14復發(fā) 25 1.04±0.09 1.11±0.10 t值 12.720 13.360 P值 0.000 0.000

    3 討論

    目前診斷膀胱癌主要包括CT、MRI及B超等影像學檢查和膀胱鏡檢查、組織活檢及尿脫落細胞學檢查等[8-9]。B超作為膀胱癌篩選的主要手段,能檢測直徑≥0.5 cm的膀胱腫瘤,但極易受膀胱周圍組織的影響;CT和MRI價格昂貴,臨床多用于浸潤性膀胱癌的檢測,而對原位癌及微小腫瘤的檢測效果不佳,常導致腫瘤診斷的延誤治療甚至漏診;膀胱鏡檢查及組織活檢是臨床診斷的金標準,但具有創(chuàng)傷性,患者創(chuàng)口較大易感染,雖然尿脫落細胞學檢查特異性的較高,但其敏感性太差[10-11]。因此,尋找一種高效、方便、快捷的腫瘤標記物成為現(xiàn)如今膀胱癌早期診斷的重點。

    miR-7其序列位于人類第9號染色體異源核糖核蛋白K基因的內(nèi)含子區(qū)域,成熟miR-7產(chǎn)物序列高度的保守,可在不同調(diào)控網(wǎng)狀系統(tǒng)中及腫瘤內(nèi)傳遞穩(wěn)定[12-13]。研究表明,高表達的miR-7能抑制Pak1、VEGF及IGF1R等基因,而在人類乳腺癌、施萬細胞瘤、膠質(zhì)瘤及舌鱗癌等多種腫瘤組織中呈低表達,說明其可調(diào)節(jié)起到多種腫瘤的發(fā)生發(fā)展,產(chǎn)生抑癌基因的功 能[14]。miR-7是新近發(fā)現(xiàn)的miRNA家族成員,其在多種惡性腫瘤中呈低表達,在抑制腫瘤細胞生長、侵襲、轉(zhuǎn)移中發(fā)揮重要作用。miR-7能夠通過作用于FAK基因的3′UTR區(qū)的特定位點對其表達進行負性調(diào)節(jié),而影響腫瘤細胞遷移及侵襲。本研究結果表明,血清和尿沉渣miR-7在診斷的特異性及敏感性方面有優(yōu)勢,并與膀胱癌TNM分期相關,這預示血清和尿沉渣miR-7可能作為判斷膀胱癌預后的無創(chuàng)診斷指標。血清和尿沉渣miR-7作為微創(chuàng)診斷指標,膀胱癌患者尿沉渣miR-7診斷價值優(yōu)于血清miR-7,與膀胱癌術后復發(fā)相關,可用于指導術后膀胱鏡檢查的隨訪方案的制定。

    綜上所述,血清和尿沉渣miR-7可用于作為診斷膀胱癌診斷、預后及隨訪的生物學腫瘤標志物,但血清及尿沉渣miRNA用于膀胱癌的臨床診斷尚需要進一步大樣本的前瞻性研究。

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