扶正泄?jié)岜ＤI湯對5/6腎切除CRF大鼠PTH的影響研究

李寧 王國泰

【摘要】 目的：觀察扶正泄?jié)岜ＤI湯對慢性腎衰大鼠甲狀旁腺激素（PTH）、腎功水平變化及中藥的干預(yù)作用。方法：采用5/6腎切除法建立CRF大鼠模型;將60只雄性SD大鼠隨機(jī)分為模型組，尿毒清組，中藥大、中、小劑量組和假手術(shù)組;假手術(shù)組及模型組同時(shí)間予等體積的生理鹽水灌胃，尿毒清組予以含原藥0.25 g/ml的懸混液灌胃，中藥組分別按臨床成人用量的9倍、6倍、3倍配制不同劑量中藥灌胃，療程8周。檢測各組大鼠PTH及Scr、BUN水平。結(jié)果：與假手術(shù)組比較，模型組大鼠PTH、Scr、BUN均明顯升高，Hb及RBC均明顯降低（P<0.05）;各給藥組治療后較模型組均有所改善，PTH、Scr、BUN降低（P<0.05），Hb及RBC升高（P<0.05）;其中以中藥大、中劑量組為佳，兩組之間差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）。結(jié)論：扶正泄?jié)岜ＤI湯可以降低慢性腎衰大鼠PTH、Scr、BUN水平，改善臨床癥狀，保護(hù)腎功，延緩腎衰竭的進(jìn)展。

【關(guān)鍵詞】 扶正泄?jié)岜ＤI湯 CRF大鼠 甲狀旁腺激素 血肌酐 尿素氮

doi：10.14033/j.cnki.cfmr.2019.30.001 文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼 A 文章編號(hào) 1674-6805（2019）30-000-03

[Abstract] Objective： To observe the intervention effect of Fuzheng Xiezhuo Baoshen Decoction on parathyroid hormone （PTH）， renal function in rats with chronic renal failure and TCM. Method： This case used 5/6 nephrectomy to establish a CRF rat model. Sixty male SD rats were randomly divided into six groups： a model group， a sham operation group， a group with Niaoduqing Granule and three TCM groups with large， medium and small doses of Fuzheng Xiezhuo Baoshen Decoction. The sham operation group and the model group were given equal volume of normal saline at the same time， and the Niaoduqing Granule group was given suspension containing 0.25 g/ml of the original drug. Three TCM groups had prepared different doses of Chinese medicine gavage according to the clinical adult dosage of 9 times， 6 times， 3 times， course of treatment respectively for 8 weeks. The levels of PTH， Scr and BUN in each group of CRF rats were detected. Result： Compared with the sham operation group， PTH， Scr and BUN were significantly increased in the model group and Hb and RBC were significantly decreased， there was statistical significance （P<0.05）. PTH， Scr and BUN were decreased （P<0.05）， and Hb and RBC were increased （P<0.05）. Among them， the large and medium dose groups of TCM were the best， and the difference between the two groups was not statistically significant （P>0.05）.Conclusion： Fuzheng Xiezhuo Baoshen Decoction can help lower the levels of PTH， SCr and BUN in rats with chronic renal failure， reduce clinical symptoms， protect renal function and prolong the process of renal failure.

[Key words] Fuzheng Xiezhuo Baoshen Decoction CRF rats PTH Scr BUN

First-authors address： Affiliated Hospital of Shanxi University of Chinese Medicine， Xianyang 712000， China

慢性腎衰竭（CRF）是各種慢性腎臟疾病進(jìn)展所導(dǎo)致的腎功能減退及由此引起的機(jī)體內(nèi)環(huán)境紊亂的臨床綜合征，涉及多個(gè)系統(tǒng)，為臨床急危重癥之一，目前尚無治愈方法。中醫(yī)中藥在延緩腎功能進(jìn)展、改善臨床癥狀、提高患者生存質(zhì)量等方面療效穩(wěn)定。前期我們應(yīng)用扶正泄?jié)岜ＤI湯治療CRF取得了較好的臨床療效[1-3]，并通過實(shí)驗(yàn)研究已初步探討了其部分作用機(jī)制[4-7]，本研究通過觀察扶正泄?jié)岜ＤI湯對慢性腎衰大鼠的治療作用，探討其降低PTH水平延緩腎功能進(jìn)展的可能機(jī)制，為藥物進(jìn)一步研發(fā)提供理論依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物 清潔級、雄性Spragoe-Dawley（SD）大鼠60只，6～8周齡，體質(zhì)量（200±20）g，購自西安交通大學(xué)醫(yī)學(xué)院實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心，動(dòng)物生產(chǎn)許可證號(hào)：2017-001。

1.1.2 藥物與試劑 本方由冬蟲夏草（百令膠囊）6 g，熟地12 g，黃芪30 g，黨參20 g，當(dāng)歸10 g，山藥15 g，白術(shù)10 g，枳實(shí)10 g，法半夏12 g，陳皮12 g，云苓20 g，制大黃10 g，車前子20 g，水蛭6 g，煎煮濃縮（2 g生藥/ml）;陽性對照藥物：尿毒清顆粒，康臣藥業(yè)有限公司，國藥準(zhǔn)字Z20073256，5 g/袋，配制成1 ml含0.25 g尿毒清顆粒水溶液。血PTH放免試劑盒由上海信帆生物科技有限公司提供。

1.2 方法

1.2.1 模型復(fù)制及分組 SD大鼠60只適應(yīng)性飼養(yǎng)1周后，隨機(jī)分為假手術(shù)組（8只）、手術(shù)組（52只）。采用5/6腎切除方法建立CRF模型[8]。操作步驟：術(shù)前禁食12 h，SD大鼠10%水合氯醛（35 mg/100 g）麻醉后，選擇左側(cè)背部肋下約0.5 cm為切開，剃毛、消毒，逐層切開、分離皮膚、肌層至腹腔，暴露左腎，鈍性分離腎周脂肪，剝離腎包膜，切除左腎上下級各約1/3皮質(zhì)，明膠海綿貼敷止血，復(fù)位殘腎，逐層間斷縫合;1周后行右腎全切術(shù)，麻醉、消毒方法同前，暴露右腎后，游離腎下極附近輸尿管，止血鉗鉗夾后于兩鉗間剪斷，遠(yuǎn)端結(jié)扎，近段隨同腎蒂一起剝離，止血鉗鉗夾于近腎端切除，逐層間斷縫合。假手術(shù)組：剃毛、消毒、逐層切開分離方法同前，暴露左腎不行切除術(shù)，后逐層間斷縫合;1周后暴露右腎，手術(shù)方法同前。手術(shù)組大鼠飼養(yǎng)2周后，1期手術(shù)大鼠死亡2只，將存活造模大鼠隨機(jī)分為模型組、尿毒清陽性對照組、中藥（扶正泄?jié)岜ＤI湯）大、中、小劑量組，每組各10只。

1.2.2 給藥方法 參照文獻(xiàn)[9]按照10 ml/（kg·d）給予大鼠灌胃，中藥組每日給予扶正泄?jié)岜ＤI湯灌胃，其中大劑量組2.94 g/ml（相當(dāng)于成人用量9倍）、中劑量組1.96 g/ml（6倍）、小劑量組0.98 g/ml（3倍）;尿毒清組予以尿毒清顆粒水溶液（0.25 g/ml）灌胃，假手術(shù)組及模型組每日予以等量生理鹽水灌胃，連續(xù)8周。

1.3 觀察指標(biāo)

PTH采用放射免疫法檢測，血肌酐（Scr）檢測采用苦味酸法，尿素氮（BUN）檢測采用尿素酶法，按照試劑盒說明操作。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理

采用SPSS 18.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析，計(jì)量資料以（x±s）表示，采用t檢驗(yàn)，計(jì)數(shù)資料以率（%）表示，采用字2檢驗(yàn)，P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 對CRF大鼠PTH、腎功、血常規(guī)的影響

各治療組PTH、腎功及血常規(guī)水平均較模型組改善（P<0.05），中藥大劑量和中劑量組為佳;中藥大、中劑量組間及中藥小劑量與尿毒清組間差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05），見表1。

2.2 對CRF大鼠體質(zhì)量的影響

給藥后，各組大鼠體質(zhì)量均有所增加。用藥至第2周，各組間大鼠體質(zhì)量無明顯差異;至第5周，中藥大、中劑量組與模型組相比體質(zhì)量明顯增加（P<0.05）;第8周，中藥各組及尿毒清組大鼠體質(zhì)量較模型組增加（P<0.05），其中以中藥大、中劑量顯著，見表2。

3 討論

慢性腎功能衰竭是各種原發(fā)性或繼發(fā)性腎臟疾病進(jìn)展的共同結(jié)局，多系統(tǒng)并發(fā)癥及高額費(fèi)用嚴(yán)重威脅著人類健康。美國1999-2004年健康與營養(yǎng)調(diào)查結(jié)果顯示，20歲以上美國成年人中CKD的患病率較1988-1994年上升了30%[10]，王海燕教授牽頭的調(diào)查指出CKD的知曉率僅為12.5%[11]，其高發(fā)病率、低知曉率已成為腎臟病學(xué)界所面臨的嚴(yán)重公衛(wèi)問題。扶正泄?jié)岜ＤI湯是治療慢性腎衰的有效方藥，以往的動(dòng)物實(shí)驗(yàn)顯示，該方可通過降低白細(xì)胞介素-6（IL-6）、腫瘤壞死因子（TNF-α）等因子水平、抑制血栓烷2（TXB2）等的高表達(dá)，從而改善腎臟血供，提高腎小球?yàn)V過率，減輕微炎癥狀態(tài)、抑制系膜基質(zhì)增生，達(dá)到延緩腎功能惡化的作用[7]。

甲狀旁腺激素（PTH）被認(rèn)為是最重要的一種尿毒癥毒素，高PTH血癥可通過增加細(xì)胞內(nèi)鈣濃度、改變細(xì)胞膜通透性、細(xì)胞內(nèi)環(huán)酸腺苷增加、軟組織改化、蛋白分解增加等多方面是循環(huán)血液中含氮廢物增加[12];同時(shí)高PTH血癥也是尿毒癥癥狀的重要原因，引起一系列的機(jī)體癥狀，臨床上PTH水平是CRF患者病情程度和評價(jià)預(yù)后的一個(gè)重要指標(biāo)。PTH參與多臟器損害的發(fā)生[13]，無論在CRF早期、終末期，高PTH水平導(dǎo)致細(xì)胞內(nèi)鈣含量升高，細(xì)胞線粒體功能喪失并最終致細(xì)胞死亡，機(jī)體廣泛受損[14]，其靶器官除腎和骨外，也作用于其他細(xì)胞，如神經(jīng)細(xì)胞等，因此慢性腎衰竭患者常有神經(jīng)、精神異常，如直覺性精神異常、情感障礙、癲癇樣發(fā)作、周圍神經(jīng)病變等[13];另外CRF患者PTH水平與左心室結(jié)構(gòu)和功能的關(guān)系也十分密切[15]，亦有報(bào)道指出PTH是影響尿毒癥患者高血壓的主要因素，其與血壓呈正相關(guān)[16]。扶正泄?jié)岜ＤI湯一合四君子湯之意，益氣健脾，樞利中焦氣機(jī)，以復(fù)腎中元?dú)?二寓參芪地黃湯方，益氣滋陰補(bǔ)腎，共瀉腎濁;三藏當(dāng)歸補(bǔ)血湯養(yǎng)血和血;四暗溫膽湯祛瘀化濕排毒;全方共奏“健脾益腎平衡陰陽以扶正，活血化瘀祛濕排毒以泄?jié)帷敝?該方作為中藥有效單體的復(fù)方制劑，通過系列反應(yīng)途徑共同遏制了CRF的發(fā)病趨勢，同時(shí)幫助機(jī)體恢復(fù)生理機(jī)能，“多元多靶點(diǎn)、多相多途徑”的作用特點(diǎn)正是中醫(yī)藥治療的特色及優(yōu)勢所在，故而效果顯著。本實(shí)驗(yàn)研究表明扶正泄?jié)岜ＤI湯和尿毒清顆粒對5/6腎切除大鼠均有不同程度的降低PTH、BUN、Scr等毒素水平，改善貧血及機(jī)能狀況，其中以中藥大、中劑量組最佳，呈劑量依賴性，尿毒清組對毒素指標(biāo)的抑制作用和中藥小劑量組相當(dāng);其作用機(jī)理可能是通過降低PTH的毒性作用，進(jìn)一步減少血鈣含量，調(diào)整細(xì)胞內(nèi)外鈣濃度，恢復(fù)細(xì)胞膜通透性、改善細(xì)胞功能實(shí)現(xiàn)的。

本實(shí)驗(yàn)研究由于觀察時(shí)間短、樣本小等條件所限，僅初步探討了扶正泄?jié)岜ＤI湯的部分作用機(jī)理，存在一定的不足;但本實(shí)驗(yàn)顯示扶正泄?jié)岜ＤI湯對腎功具有一定的保護(hù)作用，亦印證了PTH與慢性腎功能衰竭的病情進(jìn)展呈正相關(guān)?？傊哂醒a(bǔ)脾益腎、活血化瘀、祛濕泄?jié)峁πУ姆稣節(jié)岜ＤI湯可以降低PTH、Scr、BUN水平，改善貧血，保護(hù)腎功、延緩CRF的進(jìn)展，同時(shí)為中醫(yī)中藥防治CRF提供了實(shí)驗(yàn)依據(jù)和理論基礎(chǔ)。

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（收稿日期：2019-09-02） （本文編輯：張亮亮）