制川烏炮制廢水中生物堿含量的探討＊

易劍平，遲玉明，孟 賀，張立波，李 敏，陳加富

（1. 北京中研同仁堂醫(yī)藥研發(fā)有限公司 北京 100079；2. 北京同仁堂科技發(fā)展股份有限公司 北京 100079）

川烏為毛茛科植物烏頭（Aconitum carmichaelii Debx.）的干燥母根，性熱，味辛、苦；有大毒，臨床使用時常用其炮制品。主治祛風(fēng)除濕、溫經(jīng)止痛。用于風(fēng)寒濕痹、關(guān)節(jié)疼痛、心腹冷痛、寒疝作痛[1]。川烏炮制前后其成分發(fā)生了較大的變化，秦語欣等在生川烏中檢測到99 個成分，制川烏中檢測到106 個成分，炮制前后共有成分53 個，炮制后新增成分53 個，消失成分46 個[2]。在川烏炮制過程中采用水浸泡法，浸泡使生物堿類成分含量降低，隨浸泡程度加深，雙酯型生物堿（新烏頭堿、次烏頭堿、烏頭堿）總量的降低率分別為28.7%、36.8%、44.9%，單酯型生物堿（苯甲酰新烏頭原堿、苯甲酰烏頭原堿、苯甲酰次烏頭原堿）總量的降低率分別為21.8%、25.5%、40.0%[3]?？梢?，在川烏浸泡過程中有部分生物堿可能進(jìn)入了廢水中。而川烏所含的烏頭類生物堿具有極強(qiáng)的毒性，相比較單酯型生物堿的毒性，雙酯型生物堿毒性較大，是烏頭類中藥的主要毒效成分，其中烏頭堿毒性最強(qiáng)。小鼠ig給藥，三者半數(shù)致死量（LD50）值分別為1.0-1.8、1.9、5.8 mg/kg[4-11]。目前未見有川烏炮制廢水的有效處理方法，且未見有對川烏炮制過程中廢水中毒性成分含量的報道，為此，需要建立對川烏炮制廢水中毒性生物堿含量的測定方法，以明確該廢水中的毒性成分及其含量，評估該廢水排放后進(jìn)入到天然水體中給生態(tài)環(huán)境帶來的威脅。同時可以明確川烏炮制過程中產(chǎn)生的大量毒性污水中生物堿含量的變化情況，為其減毒處理研究提供試驗依據(jù)。

1 儀器與材料

Waters e2695 高效液相色譜儀（2998PDA 檢測器，美國Waters 公司）；UV757CRT 紫外可見分光光度計(上海精密科學(xué)儀器有限公司)；梅特勒-托利多DELTA 320 pH 計；AB-135s 型電子天平（梅特勒-托利多儀器有限公司）。

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圖1 6種生物堿混合對照品和樣品的HPLC圖

烏頭堿對照品（批號：110720-200410）、次烏頭堿對照品（批號：110798-200805）、新烏頭堿對照品（批號：110799-200404）、苯甲酰烏頭原堿對照品（批號：111794-200901）、苯甲酰次烏頭原堿對照品（批號：111796-200901）、苯甲酰新烏頭原堿對照品（批號：111795-200901），以上對照品均購于中國藥品生物制品檢定所；乙腈、四氫呋喃為色譜純，水為超純水，其余試劑均為分析純。本實驗使用的供試品溶液由北京同仁堂（亳州）飲片有限責(zé)任公司依據(jù)實驗需求進(jìn)行提供。

2 方法與結(jié)果

2.1 HPLC 同時測定苯甲酰新烏頭原堿、苯甲酰烏頭原堿、苯甲酰次烏頭原堿、新烏頭堿、次烏頭堿、烏頭堿

2.1.1 色譜條件

色譜柱為phenomenex C18(4.6×250 mm，5μm)，流動相A相為乙腈-四氫呋喃（25∶15），B相為0.1 mol·L-1醋酸銨（每1000 mL 含冰醋酸0.5 mL）水溶液，梯度洗脫，體積流量1.0 mL·min-1，進(jìn)樣量50 μL，柱溫35℃，檢測波長為235 nm，色譜圖(圖1)。

2.1.2 標(biāo)準(zhǔn)曲線繪制

取上述6 種生物堿對照品適量，精密稱定，加乙腈-0.05%乙酸水（30∶70）的混合溶液制成含苯甲酰新烏頭原堿9.03 μg·mL-1、苯甲酰烏頭原堿12.61 μg·mL-1、苯 甲 酰 次 烏 頭 原 堿11.82 μg·mL-1、新 烏 頭 堿12.05 μg·mL-1、次烏頭堿9.03 μg·mL-1、烏頭堿9.41μg·mL-1的對照品溶液，取該對照品溶液稀釋10倍，制成含苯甲酰新烏頭原堿0.903μg·mL-1、苯甲酰烏頭原堿1.261 μg·mL-1、苯甲酰次烏頭原堿1.182 μg·mL-1、新烏頭堿1.205 μg·mL-1、次烏頭堿0.903 μg·mL-1、烏頭堿0.941μg·mL-1的對照品溶液，以進(jìn)樣量為橫坐標(biāo)（X），峰面積為縱坐標(biāo)（Y），繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線（圖2），建立色譜峰面積對進(jìn)樣量的回歸方程（表1）。結(jié)果表明，各成分在檢測的濃度范圍內(nèi)線性關(guān)系良好。

2.1.3 精密度試驗

取混合對照品溶液，按“2.1.1”項下色譜條件進(jìn)行測定，連續(xù)進(jìn)樣6 次，檢測上述6 種生物堿的峰面積，計算得各生物堿的RSD 值依次為：苯甲酰新烏頭原堿0.47%、苯甲酰烏頭原堿0.86%、苯甲酰次烏頭原堿0.79%、新烏頭堿0.57%、次烏頭堿0.44%、烏頭堿1.35%，表明該方法精密度良好。

2.1.4 穩(wěn)定性試驗

取“2.2”項下川烏炮制過程中的水樣1，按“2.1.1”項下色譜條件進(jìn)行測定，在0、2、4、6、8、10、12、18、24 h進(jìn)樣，檢測6 種生物堿的峰面積，計算得各生物堿的RSD 值依次為：苯甲酰新烏頭原堿0.67%、苯甲酰烏頭原堿1.01%、苯甲酰次烏頭原堿1.14%、新烏頭堿0.89%、次烏頭堿0.76%、烏頭堿1.26%，表明供試品在24h內(nèi)穩(wěn)定，可供檢測。

2.1.5 重復(fù)性試驗

平行制備6 份“2.2”項下川烏炮制過程中的水樣1，按“2.1.1”項下色譜條件進(jìn)行測定，檢測6 種生物堿的峰面積，計算得各生物堿的RSD 值依次為：苯甲酰新烏頭原堿1.97%、苯甲酰烏頭原堿2.06%、苯甲酰次烏頭原堿1.89%、新烏頭堿2.41%、次烏頭堿0.97%、烏頭堿2.82%，表明重復(fù)性較好。

2.1.6 加樣回收率試驗

精密移取“2.2”項下川烏炮制過程中的水樣1 溶液5 mL于10 mL容量瓶中，平行6份，各精密加入對照品適量，定容，搖勻，按“2.1.1”項下色譜條件進(jìn)行測定，計算得苯甲酰新烏頭原堿、苯甲酰烏頭原堿、苯甲酰次烏頭原堿、新烏頭堿、次烏頭堿、烏頭堿的平均加樣回收率分別為98.75%、105.14%、108.97%、97.94%、102.46%、115.25%，RSD 分別為1.82%、2.44%、2.71%、0.96%、1.56%、3.23%。

圖2 6種生物堿類的標(biāo)準(zhǔn)曲線

表1 6種生物堿成分的回歸方程、相關(guān)系數(shù)和線性范圍

2.2 UV測定總生物堿

2.2.1 試劑的配制

烏頭堿標(biāo)準(zhǔn)溶液：精密稱取烏頭堿標(biāo)準(zhǔn)品16.75 mg，置50 mL 量瓶中，加0.01 mol·L-1鹽酸使溶解，并加至刻度，搖勻。

醋酸鈉緩沖溶液的配制：稱取醋酸鈉0.3 g，加適量水溶解后，加冰醋酸11.2 mL，再加水至1000 mL。混勻，用pH計測定該溶液的pH值為3.05。

0.1 %溴甲酚綠指示液：稱取溴甲酚綠0.2 g，用0.05 mol·L-1NaOH 溶液研磨，加水溶解至200 mL，濾過，用三氯甲烷除去脂溶性雜質(zhì)。

2.2.2 線性關(guān)系考察

精密量取烏頭堿標(biāo)準(zhǔn)液0.1、0.2、0.3、0.4、0.5、0.6、0.7 mL，分別置于干燥分液漏斗中，加醋酸鈉緩沖液5.0 mL 和溴甲酚綠指示液2.0 mL，加蒸餾水使總體積達(dá)到10.0 mL，搖勻，再精密加入三氯甲烷10.0 mL，充分振搖3 min，靜置0.5 h，分取三氯甲烷層，用干燥濾紙過濾。棄去初濾液，收集續(xù)濾液至已放入0.5 g無水硫酸鈉的試管中，放置0.5 h，于416 nm處測定吸收度，以0.01 mL 鹽酸同法操作，所得三氯甲烷液作為空白。以濃度（μg·mL-1）為橫坐標(biāo)，吸光度為縱坐標(biāo)，得線性回歸方程為Y=0.031X-0.0071，r=0.9991，其線性范圍為3.4-23.5μg·mL-1，（圖3）。

圖3 UV檢測烏頭堿標(biāo)準(zhǔn)曲線

表2 萃取次數(shù)的考察及結(jié)果

表3 加樣回收試驗及結(jié)果

2.2.3 萃取次數(shù)的考察

對照品溶液的制備：精密量取烏頭堿標(biāo)準(zhǔn)溶液0.5 mL，置于分液漏斗中，按照標(biāo)準(zhǔn)曲線制備方法制備對照品溶液。

空白溶液的制備：精密量取0.01 mol·L-1鹽酸2 mL，置于分液漏斗中，照標(biāo)準(zhǔn)曲線制備方法制備空白溶液。

樣品溶液的制備：精密量取1號川烏炮制液20 mL 3 份，置于3 個分液漏斗中，用濃氨水調(diào)pH 值至10-11，分別用三氯甲烷20 mL振搖提取2次、3次、4次，合并三氯甲烷層，減壓40℃蒸干，殘渣用0.01 mol·L-1鹽酸溶解至10 mL量瓶中，并加至刻度，搖勻。精密量取2.0 mL 置于分液漏斗中，照標(biāo)準(zhǔn)曲線方法操作，精密量取試管中的溶液1 mL 至5 mL 量瓶中，加三氯甲烷至刻度，搖勻，測定吸光度，結(jié)果見表2。

結(jié)果表明，以三氯甲烷振搖提取3 次即可將川烏炮制廢水中的生物堿基本萃取出來。

2.2.4 重復(fù)性試驗

平行制備6份“2.2”項下川烏炮制過程中的水樣1，按“2.2.3”項下制備對照品溶液、空白溶液和樣品溶液，同法進(jìn)行測定，計算得總生物堿含量為24.3μg·mL-1，RSD 值為3.37%，表明重復(fù)性較好，可以滿足檢測精度的要求。

2.2.5 精密度試驗

取“2.2.4”項下的3 號樣品溶液連續(xù)測定吸光度6次，測得平均吸光度值為0.623，RSD 值為0.17%。結(jié)果表明，儀器的精密度良好，可以滿足檢測的要求。

2.2.6 穩(wěn)定性試驗

取“2.2.4”項下的3 號樣品溶液于0、1、2、4、8 h 分別測定吸光度，測得平均吸光度值為0.618，RSD 值為0.87%。結(jié)果表明，樣品供試品溶液在8小時內(nèi)穩(wěn)定。

2.2.7 加樣回收試驗

對照品溶液的制備:精密量取濃度為0.335 mg·mL-1的烏頭堿標(biāo)準(zhǔn)溶液25 mL，置于50 mL 量瓶中，以0.01 mol·L-1鹽酸加至刻度，搖勻，得濃度為0.168 mg·mL-1的烏頭堿標(biāo)準(zhǔn)溶液。精密量取濃度為0.335 mg·mL-1的烏頭堿標(biāo)準(zhǔn)溶液0.5 mL，置于分液漏斗中，照標(biāo)準(zhǔn)曲線制備方法制備對照品溶液。

空白溶液的制備：精密量取0.01 mol·L-1鹽酸2 mL，置于分液漏斗中，照標(biāo)準(zhǔn)曲線制備方法制備空白溶液。

樣品溶液的制備：精密量取1號川烏炮制液10 mL 6 份，置于分液漏斗中，加入濃度為0.168 mg/mL 的烏頭堿標(biāo)準(zhǔn)溶液各1.5 mL，再加入10 mL 蒸餾水，搖勻，用濃氨水調(diào)pH 值至10-11，分別用三氯甲烷20 mL 振搖提取3 次，合并三氯甲烷層，40℃減壓蒸干，殘渣用0.01 mol·L-1鹽酸溶解至10 mL量瓶中，并加至刻度，搖勻。精密量取2.0 mL 置于分液漏斗中，照標(biāo)準(zhǔn)曲線方法操作，精密量取試管中的溶液1 mL 至5 mL 量瓶中，加三氯甲烷至刻度，搖勻，測定吸光度（表3）。

結(jié)果表明本方法加樣回收試驗結(jié)果良好，可以滿足檢測的要求。

2.3 樣品溶液生物堿含量的檢測結(jié)果

2.3.1 樣品溶液的制備

制川烏按照2015版《中華人民共和國藥典》一部[1]和《北京市中藥飲片炮制規(guī)范》[12]進(jìn)行炮制，其在炮制過程中產(chǎn)生的含毒性成分的廢水主要產(chǎn)生在前期的“水浸泡至內(nèi)無干心”階段，該過程歷時長，約為7-10天，且每天均需換水2 次，產(chǎn)生的毒性污水量大，其中含有雙酯型烏頭堿和單酯型烏頭堿，本供試品溶液即為該部分水樣。取川烏，用水浸泡10 天，每天換水2次，水量為川烏量的10倍，水樣編號依次為1、2、3……20，即為樣品溶液。

表4 樣品溶液生物堿含量HPLC檢測結(jié)果(μg·mL-1)

圖4 川烏炮制廢水中毒性成分含量的變化

2.3.2 樣品溶液HPLC檢測結(jié)果

取制備好的樣品溶液，按照“2.1.1”項下的HPLC條件進(jìn)行檢測，結(jié)果（表4）和（圖4），可以看出在浸泡前2天產(chǎn)生的污水，含有大量的苯甲酰新烏頭原堿、新烏頭堿、次烏頭堿，若不經(jīng)過處理直接排放到環(huán)境當(dāng)中，能夠產(chǎn)生巨大的危害，在浸泡后期，產(chǎn)生的污水也存在少量毒性成分，必須經(jīng)過處理才能排放。

表5 樣品溶液檢測結(jié)果

2.3.3 樣品溶液UV檢測結(jié)果

取制備好的樣品溶液，按照“2.2”項下的UV 制備對照品溶液和空白溶液，并按方法進(jìn)行檢測，由結(jié)果可以看出，在浸泡提取前2天產(chǎn)生的污水，川烏炮制液總生物堿含量非常高，隨著浸泡次數(shù)的增加，總生物堿含量逐漸降低，但是，也存在大量的毒性成分，因此，必須經(jīng)過處理才能排放。（表5）。

3 討論

制烏頭自古以來用于痛痹、歷節(jié)之證?，F(xiàn)臨床普遍用來治療類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎。在現(xiàn)代許多治療類風(fēng)關(guān)的中成藥中，制烏頭大多是主藥。不論是煎湯服，還是中成藥都有較好的療效。尤其是對一些寒濕型的病人，其即刻療效是非常顯著的，這已經(jīng)得到中醫(yī)界的公認(rèn)[13]。

烏頭類中藥的主要毒性來源于3 種雙酯型二萜生物堿，其毒性作用主要是影響中樞神經(jīng)系統(tǒng)、心臟和肌肉組織。其中損害心臟是烏頭堿中毒最重要、最多見的危險因素。烏頭堿的毒性概括為①箭毒樣作用，即阻斷神經(jīng)-肌肉接頭傳導(dǎo)；②烏頭堿樣作用，表現(xiàn)為心率紊亂、血壓下降、體溫降低、呼吸抑制、肌肉麻痹和中樞神經(jīng)功能紊亂等?，F(xiàn)代研究表明，烏頭類生物堿的毒理學(xué)機(jī)制主要包括影響電壓依賴性鈉離子通道、調(diào)節(jié)神經(jīng)遞質(zhì)釋放、促進(jìn)脂質(zhì)過氧化作用和誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡等[14]；烏頭堿可直接作用于心肌細(xì)胞，使心室內(nèi)異位起博點的興奮性增高和產(chǎn)生折返激動，形成單源或多源多形室性早搏、室性心動過速、心室顫動等，故其致命性的心臟毒副作用最為嚴(yán)重[15]；烏頭堿可使中樞神經(jīng)系統(tǒng)及周圍神經(jīng)先興奮后麻痹，阻止沖動的發(fā)生和傳導(dǎo)，因而使心率變慢、心律不齊、血壓下降[16]?？梢?，川烏中的烏頭堿類成分的毒性是需要重點關(guān)注的。目前對川烏的研究主要集中在川烏炮制前后的差異性，川烏毒性成分及其結(jié)構(gòu)等方面，對川烏炮制過程中產(chǎn)生的大量廢水并沒有進(jìn)行研究，而王哲等的研究表明川烏浸泡后，其生物堿成分有了明顯的降低，即川烏炮制廢水中含有一定量的毒性生物堿成分，以斑馬魚進(jìn)行的初步毒理實驗結(jié)果表明該水具有一定的毒性，能造成斑馬魚的死亡。因此建立較為簡便、有效的川烏炮制廢水中生物堿含量的檢測方法，可以為后期進(jìn)行川烏炮制廢水減毒處理研究奠定技術(shù)基礎(chǔ)。

3.1 HPLC法供試品溶液處理方法的考察

對供試品溶液的處理方法進(jìn)行了對比研究，其方法包括（1）精密量取“2.2”項下川烏炮制過程中的水樣1 50mL，滴加氨水3mL，混勻后，用乙醚振搖提取2次，每次50 mL，合并乙醚液，室溫?fù)]干，殘渣用乙腈-0.05%乙酸水（30∶70）的混合溶液溶解，轉(zhuǎn)移至5mL量瓶中，并稀釋至刻度，搖勻，濾過，取續(xù)濾液，即得；（2）精密量取“2.2”項下川烏炮制過程中的水樣1 50 mL，滴加氨水3 mL，混勻后，用二氯甲烷振搖提取2次，每次50 mL，合并二氯甲烷液，40℃減壓蒸干，殘渣同方法（1）溶解并稀釋定容，搖勻，濾過，取續(xù)濾液，即得；（3）精密量取“2.2”項下川烏炮制過程中的水樣1 50 mL，加入3 倍量的乙醇，醇沉過夜，濾過，減壓濃縮（40℃）至無醇味，用稀鹽酸調(diào)pH 值至1-2，用石油醚（60-90℃）振搖提取2 次，每次20 mL，棄去石油醚液，水液用濃氨水調(diào)pH值至9-10，用二氯甲烷振搖提取2次（40 mL∶40 mL），合并二氯甲烷液，40℃減壓蒸干，殘渣同方法（1）溶解并稀釋定容，搖勻，濾過，取續(xù)濾液，即得；（4）水樣原液。結(jié)果表明，經(jīng)過不同方式萃取后的樣品溶液和原液直接進(jìn)樣，其6 種生物堿成分分離度均達(dá)到《中華人民共和國藥典》的要求，但經(jīng)過萃取處理后的供試品溶液其6種生物堿都有一定量的損失，不同萃取溶劑損失的生物堿的種類和多少差異性較大，且需要消耗一定量的試劑，故選擇原液直接進(jìn)樣。

3.2 HPLC法進(jìn)樣體積的考察

在液相儀器允許的范圍內(nèi)進(jìn)行進(jìn)樣體積的研究。本實驗考察了供試品溶液進(jìn)樣量為10、20、30、40、50μL，考慮到在川烏炮制過程中，其生物堿含量的變化可能趨勢，結(jié)合峰面積，確定進(jìn)樣量為50μL。

3.3 生物堿的變化情況

由HPLC 和UV 檢測結(jié)果可知，川烏炮制過程中6種生物堿成分和總生物堿成分在炮制過程中含量的變化趨勢是基本一致的。在炮制第一天和第二天時，由于生川烏中生物堿含量較高，由滲透壓造成生物堿類成分在水中的溶出程度較高，其中3 種雙酯型生物堿的溶出均超過了65%，單酯型生物堿的溶出為50%左右，UV 檢測由于自6號樣品后總生物堿含量低于檢測方法的檢出限，僅具有一定的參考價值，但其趨勢與HPLC 的檢測結(jié)果一致，前兩天總生物堿的溶出占總?cè)艹隽康?0%以上，液相檢測結(jié)果在炮制的后期樣品中6 種成分有部分也出現(xiàn)了低于檢測限的情況，但其檢測結(jié)果也具有一定的參考意義?？梢?，6 種生物堿含量的變化和總生物堿含量的變化均顯示川烏在炮制的前兩天生物堿成分大部分都已經(jīng)溶出。隨后三天生物堿成分繼續(xù)有一定的溶出量，這可能是由于前兩天主要是川烏外層生物堿溶出，隨著浸泡時間的延長，水分逐步滲入川烏細(xì)胞的內(nèi)部，將其生物堿成分溶出，五天后生物堿的溶出量呈現(xiàn)逐步下降的趨勢。

由于換水時間間隔在一天中有一定的差異性，一次為9 小時，一次為15 小時，故生物堿成分存在含量起伏的現(xiàn)象，但總體趨勢是隨著時間的推移和水的更換，水液中的有毒成分含量逐漸降低，HPLC 檢測結(jié)果和UV 檢測結(jié)果基本一致。川烏炮制廢水中雙酯型生物堿的含量以次烏頭堿最高，其次是新烏頭堿，烏頭堿的含量最低，在浸泡3天后的含量已經(jīng)不易檢出；浸泡6 天后水中的雙酯型烏頭堿的含量均已經(jīng)很低，而單酯型生物堿的含量下降比雙酯型的慢，到10天仍然有檢出。烏頭屬植物的主要化學(xué)成分是二萜類生物堿，根據(jù)其骨架碳原子數(shù)目及其類型結(jié)構(gòu)上的差異，可以分為4 大類：C20、C19、C18-二萜生物堿和雙二萜生物堿。其中C19-二萜生物堿中的烏頭堿型生物堿是目前研究最多的一類生物堿，也是最具毒性的植物成分之一。按照取代基的不同烏頭堿型生物堿又可分為雙酯型二萜生物堿、單酯型二萜生物堿和醇胺型二萜生物堿，三者的毒性大小順序：雙酯型＞單酯型＞醇胺型[17]。由于單酯型生物堿在一定含量范圍內(nèi)雖有毒性，但其活性明顯，是制川烏的藥效成分，可見川烏炮制過程在“水浸泡至內(nèi)無干心”階段歷時7-10 天是有一定科學(xué)道理的，經(jīng)過該浸泡炮制過程，將毒性大的雙酯型生物堿盡量去除，保留了一定含量毒性較低且具有生物活性的單酯型生物堿。在川烏隨后的炮制過程中，生物堿成分得到了進(jìn)一步的去除，從而確保制川烏在具有藥效活性的同時其毒性降低到可接受的范圍內(nèi)。

當(dāng)前，制藥工業(yè)廢水常用的處理方法大多為物理法、化學(xué)法、生化法、其他組合工藝等。物理方法是指根據(jù)廢水中污染物的物理性質(zhì)相應(yīng)開發(fā)的一些水處理工藝方法，目前所報道的較為有效的物化處理法，主要有吸附法、萃取法、磁分離法、混凝沉降法、反滲透技術(shù)等。化學(xué)處理法是利用化學(xué)反應(yīng)的原理和方法來分離回收廢水中的污染物，其中化學(xué)氧化法是采用添加氧化劑的方式，使有機(jī)化合物的結(jié)構(gòu)發(fā)生轉(zhuǎn)變，改變它們的化學(xué)性質(zhì)，從而使其降解或使之穩(wěn)定化，最終達(dá)到無害化的效果。生物法主要是利用微生物的代謝作用將水中有機(jī)物同化或分解的方法，對水中大部分呈溶解性、膠體及懸浮顆粒狀的有機(jī)物都有效，其種類主要分為好氧法、厭氧法及一些由此衍生出來的處理方法，針對不同性質(zhì)的污水，需要培養(yǎng)具有相應(yīng)特性降解作用的菌種微生物，活性污泥法就是屬于一種好氧生物處理方法。本課題組根據(jù)川烏污水的特征分析，結(jié)合現(xiàn)有污水處理方法，在后期將進(jìn)行絮凝沉降和樹脂吸附法（物化法）、活性污泥法（生化法）和高級氧化法（化學(xué)法）等對川烏炮制毒性污水進(jìn)行減毒甚至無害化處理的研究，以達(dá)到低毒或無毒排放的目的，降低其污水排放對環(huán)境的影響。

本文建立了HPLC 同時檢測川烏炮制廢水中6 種生物堿的含量測定方法和以醋酸鈉緩沖液和溴甲酚綠指示液檢測總生物堿總含量的UV 法，這兩種檢測方法均快速、簡便、穩(wěn)定、準(zhǔn)確、可靠。采用這兩種方法對川烏炮制工藝過程中水中生物堿含量進(jìn)行了檢測，確定了6 種生物堿和總生物堿含量在水中的變化情況，為該廢水毒性成分的減毒處理提供了技術(shù)支持，同時為川烏傳統(tǒng)炮制工藝的科學(xué)性提供了數(shù)據(jù)支持，也為后期進(jìn)行川烏炮制毒性污水減毒甚至無害化處理的研究提供有效的檢測手段和評價依據(jù)。