Mer受體酪氨酸激酶蛋白在胃癌組織中的表達(dá)及意義

董娟娟,胡顯橋

(1.成都市龍泉驛區(qū)第一人民醫(yī)院 病理科，四川 成都 610100;2.成都市龍泉驛區(qū)第一人民醫(yī)院 普外科，四川 成都 610100)

全球范圍內(nèi)胃癌位居惡性腫瘤的第4位，2013年我國(guó)胃癌死亡人數(shù)約為30.1萬(wàn)，病死率為22.13/10萬(wàn)[1-2]。目前，尋找癌癥標(biāo)志物是基礎(chǔ)研究和臨床研究中廣泛關(guān)注的話(huà)題。Mer受體酪氨酸激酶(MerTK)是TAM(Tyro3/Axl/Mer)受體酪氨酸激酶家族成員之一，表達(dá)于巨噬細(xì)胞、神經(jīng)細(xì)胞和NK細(xì)胞。與生長(zhǎng)阻抑特異性蛋白6和蛋白S結(jié)合后，可識(shí)別凋亡細(xì)胞表面的磷脂酰絲氨酸。另外，MerTK可以通過(guò)自身磷酸化參與吞噬凋亡細(xì)胞的過(guò)程[3-4]。既往研究發(fā)現(xiàn)，MerTK在肺癌、結(jié)腸癌等癌組織中高表達(dá)[5]，但是關(guān)于胃癌的報(bào)道較少。體外研究發(fā)現(xiàn)，MerTK可以促進(jìn)胃癌細(xì)胞株sgc-7901增殖、抑制凋亡的發(fā)生[6]。本文采用免疫組化法檢測(cè)胃癌組織中MerTK蛋白的表達(dá)，旨在評(píng)估MerTK在胃癌組織和正常胃黏膜組織中表達(dá)的差異，并分析MerTK激活與胃癌患者病理特征和預(yù)后的關(guān)系。

1 材料與方法

1.1 臨床資料 收集2014年1月至2017年4月在我院診治的胃癌患者121例，所有腫瘤均經(jīng)過(guò)病理組織活檢，術(shù)前均未接受任何形式的治療。術(shù)中共獲得121例胃癌組織標(biāo)本和67例癌旁組織標(biāo)本。癌旁組織標(biāo)本定義為距癌癥病灶5 cm的組織[7]。所有標(biāo)本均用10%中性福爾馬林固定，石蠟包埋，5 μm厚連續(xù)切片。121例患者中男性95例，女性26例；年齡35～80歲，平均(60.2±6.4)歲；腫瘤最大直徑0.5～13 cm，平均(4.7±1.0) cm；賁門(mén)癌35例，非賁門(mén)癌86例；TNM分期：T115例，T228例，T329例，T449例，N051例，N116例，N226例，N328例；胃癌分期：Ⅰ期30例，Ⅱ期33例，Ⅲ期58例。

1.2 試劑 兔抗人MerTK抗體購(gòu)于上海生物工程有限公司(貨號(hào)AP7662a)；SP免疫組化檢測(cè)試劑盒購(gòu)于上海麥約爾生物有限公司(目錄編號(hào):YM-BM1948)。

1.3 方法 采用免疫組化SP法檢測(cè)胃癌組織和癌旁組織MerTK蛋白的表達(dá)[6]。顯微鏡下觀(guān)察，以細(xì)胞核和胞漿出現(xiàn)棕黃色顆粒為陽(yáng)性。陽(yáng)性細(xì)胞百分比評(píng)分：無(wú)陽(yáng)性細(xì)胞記為0分，陽(yáng)性細(xì)胞百分率≤50%記1分，51%～75%記2分，≥75%記3分；細(xì)胞核和胞漿染色評(píng)分：胞漿或胞核不著色0分、色淡1分、色適中2分、色深3分。每張切片的陽(yáng)性細(xì)胞百分率得分和染色程度得分兩項(xiàng)相加作為最后得分?？偡譃?～1分記為陰性(-)，2～3分記為弱陽(yáng)性(+)，4～5分記為陽(yáng)性(++)，6分以上記為強(qiáng)陽(yáng)性(+++)，以陰性至弱陽(yáng)性為低表達(dá)，陽(yáng)性至強(qiáng)陽(yáng)性為高表達(dá)[8]。

2 結(jié)果

2.1 MerTK蛋白表達(dá) 121例胃癌組織中MerTK蛋白高表達(dá)49(40.5%)例，低表達(dá)72(59.5%)例，MerTK蛋白主要表達(dá)于細(xì)胞質(zhì)。而在癌旁組織中，MerTK蛋白為低表達(dá)(100.0%，見(jiàn)表1，圖1)。

A:癌旁組織表達(dá)陰性；B：胃癌組織表達(dá)強(qiáng)陽(yáng)性，SP法×100。圖1 MerTK蛋白的表達(dá)強(qiáng)度

表1 MerTK蛋白的表達(dá)強(qiáng)度[例(%)]

項(xiàng)目例數(shù)MerTK-++++++胃癌組織12112(9.9)60(49.6)39(32.2)10(8.3)癌旁組織6720(29.9)47(70.1)0(0) 0(0)

2.2 MerTK蛋白表達(dá)與胃癌患者病理指標(biāo)的關(guān)系 MerTK蛋白表達(dá)與胃癌患者的年齡、腫瘤大小、腫瘤Lauren分型、遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移和TNM分期有關(guān)(P<0.05，見(jiàn)表2)。多因素分析結(jié)果顯示，年齡(>60歲)、腫瘤Lauren分型(彌漫型)、遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移和TNM分期(Ⅲ期)是MerTK蛋白高表達(dá)的獨(dú)立影響因素(P<0.05，見(jiàn)表3)。

表2 MerTK蛋白表達(dá)與胃癌患者病理指標(biāo)的單因素分析[例(%)]

病理參數(shù)例數(shù)低表達(dá)(n=72)高表達(dá)(n=49)χ2 P 年齡(歲) ≤605139(54.2)12(24.5)10.5310.001 >607033(45.8)37(75.5)性別 男9555(76.4)40(81.6)0.4750.491 女2617(23.6)9(18.4)腫瘤部位 胃近端2011(15.3)9(18.4)0.8300.660 胃中端6638(52.8)28(57.1) 胃遠(yuǎn)端3523(31.9)12(24.5)腫瘤直徑(cm) ≤55340(55.6)13(26.5)9.9790.002 >56832(44.4)36(73.5)腫瘤Lauren分型 腸型5040(55.6)10(20.4)14.885<0.001 彌漫型7132(44.4)39(79.6)組織類(lèi)型 乳頭狀腺癌104(5.6)6(12.2)0.2450.970 管狀腺癌6045(62.5)15(30.6) 黏液腺癌219(12.5)12(24.5) 印戒細(xì)胞癌3014(19.4)16(32.7)分化程度 高1710(13.9)7(14.3) 中3521(29.2)14(28.6)1.3250.357 低6840(55.6)28(57.1) 其他11(1.4)0(0)浸潤(rùn)深度 T1+T24325(34.7)18(36.7)1.8400.606 T3+T47847(65.3)31(63.3)淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移 是6322(29.7)41(83.7) 否5850(70.3)8(16.3)遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移23.963<0.001 是5340(55.6)13(26.5) 否6832(44.4)36(73.5)TNM分期9.9790.002 Ⅰ+Ⅱ6345(62.5)18(36.7) Ⅲ5827(37.5)31(63.3)

表3 MerTK蛋白表達(dá)與胃癌患者病理指標(biāo)的多因素分析

參數(shù)BSEWaldP OR95%CI年齡(>60歲)5.2642.3542.0120.0372.1571.578～3.012Lauren分型(彌漫型)3.2482.0583.0110.0251.8941.987～2.341遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移6.0143.1464.0210.0132.3481.024～4.357TNM分期(Ⅲ期)6.0842.7042.0080.0341.1691.444～3.647

B：截距；SE：標(biāo)準(zhǔn)誤；Wald：卡方值；OR：比值比；CI:可信區(qū)間。

2.3 隨訪(fǎng)情況 所有患者均隨訪(fǎng)至2018年4月，隨訪(fǎng)時(shí)間為9～39個(gè)月，中位隨訪(fǎng)時(shí)間為36.5個(gè)月。隨訪(fǎng)期間有11例胃癌患者死亡，均是由于腫瘤復(fù)發(fā)。

2.4 MerTK蛋白與生存預(yù)后的關(guān)系 以整組中位數(shù)作為中值進(jìn)行分組， 胃癌患者的預(yù)后和MerTK蛋白表達(dá)強(qiáng)度及MerTK蛋白染色積分有關(guān)(P<0.05)。多因素分析發(fā)現(xiàn)，MerTK蛋白的表達(dá)強(qiáng)度是胃癌患者死亡的獨(dú)立危險(xiǎn)因素(P<0.05，見(jiàn)表4)。

MerTK蛋白低表達(dá)患者的2年生存率為63.6%，明顯高于高表達(dá)患者，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(χ2=8.574，P=0.003)。進(jìn)一步Kaplan-Meier分析發(fā)現(xiàn)，MerTK蛋白低表達(dá)的Ⅰ期、Ⅱ期和Ⅲ期胃癌患者的生存率分別為86.5%、61.3%和40.1%，均高于高表達(dá)患者的55.4%、31.7%和9.0%，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(χ2=32.547，P<0.001；χ2=20.647，P<0.001；χ2=29.147，P<0.001)。

表4 MerTK蛋白與生存預(yù)后的關(guān)系[n(%)]

項(xiàng)目例數(shù)2年生存期死亡(n=11)生存(n=110)χ2PMerTK蛋白表達(dá)強(qiáng)度 低表達(dá)722(18.2)70(63.6)8.5740.003 高表達(dá)499(81.8)40(36.4)MerTK蛋白染色陽(yáng)性率 ≤中值603(27.3)57(51.8)2.410.121 >中值618(72.7)53(48.2)MerTK蛋白染色積分 ≤中值703(27.3)67(60.9)4.640.031 >中值518(72.7)43(39.1)

3 討論

Bang等[9]發(fā)現(xiàn)化療聯(lián)合赫賽汀治療HER2陽(yáng)性的胃癌可延長(zhǎng)患者的生存時(shí)間，這顯示了分子靶向治療的優(yōu)勢(shì)。因此尋找胃癌的生物標(biāo)志物和治療靶點(diǎn)已成為胃癌診治的熱點(diǎn)話(huà)題。MerTK是TAM受體酪氨酸激酶家族成員之一，參與了細(xì)胞凋亡等生理過(guò)程[10]。既往研究發(fā)現(xiàn)，MerTK在白血病、非小細(xì)胞肺癌、膠質(zhì)母細(xì)胞瘤、黑色素瘤、前列腺癌、乳腺癌、結(jié)腸癌、胃癌、垂體腺瘤和橫紋肌肉瘤等癌組織中高表達(dá)[5,11-12]，但是關(guān)于胃癌的報(bào)道較少。本研究發(fā)現(xiàn)，胃癌組織中MerTK蛋白表達(dá)水平明顯升高，且MerTK蛋白的高表達(dá)與胃癌的不良預(yù)后有關(guān)。

本研究檢測(cè)了121例胃癌組織樣本，發(fā)現(xiàn)MerTK蛋白高表達(dá)占40.5%，這說(shuō)明MerTK作為胃癌生物標(biāo)志物的價(jià)值可能并不是很大。Yi等[6]回顧性分析了192例胃癌患者，其中有16例患者表現(xiàn)出MerTK蛋白強(qiáng)陽(yáng)性表達(dá)。本研究發(fā)現(xiàn)，年齡(>60歲)、腫瘤Lauren分型(彌漫型)、遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移和TNM分期是MerTK蛋白高表達(dá)的獨(dú)立影響因素。另外，MerTK高表達(dá)患者的死亡率較MerTK低表達(dá)患者高。這就提示高齡、彌漫型胃癌、有遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移和TNM分期為Ⅲ期的患者預(yù)后較差，而MerTK蛋白可能為中介因素。既往研究發(fā)現(xiàn)，彌漫型胃癌、有遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移、TNM分期為Ⅲ期是影響胃癌患者5年生存率的高危因素[13-15]，因此這類(lèi)患者是臨床上重點(diǎn)關(guān)注的對(duì)象。

MerTK影響胃癌患者預(yù)后的機(jī)制目前尚未明了，Kim等[16]對(duì)10個(gè)胃癌細(xì)胞系進(jìn)行研究，發(fā)現(xiàn)MerTK過(guò)表達(dá)可以激活下游ERK和AKT的磷酸化，RXDX-106作為MerTK抑制劑或可作為治療胃癌的新藥物。既往一項(xiàng)綜述表明，MerTK可通過(guò)激活MAPK、JAK/STAT、FAK/RhoA/MLC2等通路調(diào)控癌癥的表達(dá)和侵襲等[5]。

MerTK蛋白的表達(dá)與腫瘤放化療的療效有關(guān)，Xie等發(fā)現(xiàn)，MerTK表達(dá)水平的升高與埃羅替尼的抗藥性有關(guān)[17]。另外，還有學(xué)者發(fā)現(xiàn)，接受放療患者的癌組織中單核細(xì)胞MerTK蛋白表達(dá)量升高，MerTK可能是一個(gè)特異性放療靶點(diǎn)[18-19]。

本研究的局限性為：①本研究為回顧性研究，未來(lái)需要開(kāi)展前瞻性研究，以明確MerTK在胃癌預(yù)后中的作用；②本研究隨訪(fǎng)時(shí)間相對(duì)較短，未來(lái)需要探討MerTK的表達(dá)對(duì)胃癌患者5年生存率的影響；③未對(duì)MerTK對(duì)胃癌影響的機(jī)制進(jìn)行研究，這也是本研究以后研究的方向。

綜上，年齡(>60歲)、腫瘤Lauren分型(彌漫型)、遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移和TNM分期(Ⅲ期)是MerTK蛋白高表達(dá)的獨(dú)立影響因素。胃癌組織MerTK蛋白的高表達(dá)與患者預(yù)后有關(guān)。