Stathmin-1、Ki-67在子宮平滑肌腫瘤中的表達(dá)及意義

胡仙清 林中民 鄭小冬 馮國飛 潘瓊慧 朱雪瓊

子宮平滑肌腫瘤是婦女中最常見腫瘤，分為良性平滑肌腫瘤和惡性平滑肌肉瘤及特殊類型平滑肌腫瘤。子宮富于細(xì)胞平滑肌腫瘤是一種常見的特殊類型子宮平滑肌瘤[1]。目前子宮富于細(xì)胞平滑肌腫瘤及子宮平滑肌肉瘤主要依據(jù)病理鑒別，但是單純根據(jù)細(xì)胞形態(tài)學(xué)鑒別有時有困難。微管解聚相關(guān)蛋白Stathmin-1(STMN1)，廣泛存在于細(xì)胞質(zhì)中，參與微管與紡錘體的組裝，有促進(jìn)腫瘤細(xì)胞增殖、分化、侵襲的作用[2]。Ki-67是一種存在于增殖細(xì)胞核的與細(xì)胞增殖密切相關(guān)的核蛋白，為評價增殖細(xì)胞的標(biāo)志物。Stathmin-1及Ki-67在有絲分裂紡錘體形成、細(xì)胞有絲分裂中有著重要作用，其表達(dá)異常與腫瘤的發(fā)生、發(fā)展密切相關(guān)。國外僅一篇Stathmin-1在子宮平滑肌腫瘤表達(dá)的研究，國內(nèi)外關(guān)于Ki-67在子宮平滑肌腫瘤中的報道較多，尚未見Stathmin-1與Ki-67兩者相關(guān)性的研究[3～5]。本研究旨在通過檢測瘤旁正常子宮肌層組織、子宮普通型平滑肌腫瘤、子宮富于細(xì)胞平滑肌腫瘤、子宮平滑肌肉瘤組織中Stathmin-1及Ki-67的表達(dá)水平，來研究Stathmin-1及Ki-67的表達(dá)與子宮平滑肌腫瘤發(fā)生、發(fā)展的關(guān)系,了解Stathmin-1聯(lián)合Ki-67的檢測對子宮平滑肌肉瘤的輔助診斷意義。

資料與方法

1.一般資料：選取2013年1月～2016年6月在溫州市人民醫(yī)院及溫州醫(yī)科大學(xué)附屬第一醫(yī)院、第二醫(yī)院的72例手術(shù)患者。普通型子宮平滑肌腫瘤及子宮富于細(xì)胞平滑肌腫瘤患者行子宮肌瘤剔除術(shù)或子宮切除術(shù)，子宮平滑肌肉瘤患者行全子宮+雙附件切除，有或無盆腔淋巴結(jié)切除術(shù)。患者多以月經(jīng)改變或腹部包塊等就診，均無肌瘤剔除病史。

2.分組：72例患者據(jù)組織病理學(xué)結(jié)果分為4組，分別是子宮肌瘤旁正常肌層組織(normal smooth muscular tissue of uterus, M)組30例，相應(yīng)普通型子宮平滑肌腫瘤(normal leiomyoma of uterus, UL)組30例，子宮富于細(xì)胞平滑肌腫瘤(cellular leiomyoma of uterus, CL)組24例，子宮平滑肌肉瘤(leiomyosarcoma of uterus, LMS)組18例。

3.方法：調(diào)取病理科存檔蠟塊(其中子宮平滑肌肉瘤標(biāo)本取自溫州醫(yī)科大學(xué)附屬第一醫(yī)院11例，溫州醫(yī)科大學(xué)附屬第二醫(yī)院4例，其余標(biāo)本均來自溫州市人民醫(yī)院)，4μm厚度連續(xù)切片，1張切片經(jīng)HE染色以復(fù)核診斷外，其余留作免疫組化用。病理診斷標(biāo)準(zhǔn)：普通型子宮平滑肌腫瘤：鏡下可見由梭行平滑肌細(xì)胞和不等量纖維結(jié)締組織構(gòu)成。肌細(xì)胞大小均勻，排列成漩渦狀或吻合成束，核為桿狀。子宮富于細(xì)胞平滑肌腫瘤：梭形細(xì)胞胞質(zhì)稀少，束狀排列消失，細(xì)胞核增大，兩端圓頓或呈梭行，染色質(zhì)細(xì)膩、分散，核仁小，缺乏腫瘤細(xì)胞壞死，并且分裂象少見。子宮平滑肌肉瘤：由具有豐富嗜酸性胞漿突起的梭行細(xì)胞束組成。細(xì)胞核為紡錘形，通常兩端圓形，染色深帶有粗染色質(zhì)并且核仁明顯，核分裂象明顯(超過15個/10個高倍鏡)，出現(xiàn)凝固性腫瘤細(xì)胞壞死。

4.免疫組化Envision二步法：采用Envision二步法檢測，實(shí)驗(yàn)分別采用陽性對照及陰性對照。Stathmin-1組采用子宮平滑肌肉瘤組織陽性對照，Ki-67采用乳腺癌組織陽性對照，兩個指標(biāo)均采用PBS代替一抗作為陰性對照。一抗分別為兔抗人單克隆抗體Stathmin-1原液(1∶250)購自英國Abcam公司，鼠抗人單克隆抗體Ki-67工作液購自北京中杉金橋生物技術(shù)有限公司。二抗為免疫組化PV-8000試劑盒購自北京中杉金橋生物技術(shù)有限公司。

5.免疫組化結(jié)果判定：每張切片隨機(jī)選擇有代表性5個400倍高倍鏡視野。Stathmin-1染色組將每個視野均進(jìn)行染色強(qiáng)度計分與陽性細(xì)胞百分比計分后相乘，結(jié)果取平均值[3]。顯色度按細(xì)胞著色深度計分：無染色，0分；淡黃色，1分；棕黃色，2分；棕褐色，3分。根據(jù)陽性細(xì)胞數(shù)所占百分比計分：≤5%，0分； 6%～25%，1分； 26%～50%，2分；51～75%，3分；>75%，4分。兩者相乘所得計為染色分值：0分為陰性，1～4分為弱陽性，5～8分為中度陽性，9～12分為強(qiáng)陽性。Ki-67組僅進(jìn)行陽性細(xì)胞百分比計分，結(jié)果取平均值計為染色分值：≤15%，陰性；16%～30%，弱陽性；﹥30% 強(qiáng)陽性[6,7]。

結(jié) 果

1.一般資料比較：由表1可見，3組患者的年齡比較，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(H=13.250,P=0.001)，3組患者的孕次、產(chǎn)次比較差異無統(tǒng)計學(xué)意義(H=0.053,P=0.762;H=2.576,P=0.276)。

2.Stathmin-1、Ki-67蛋白表達(dá)情況：由圖1可見，Stathmin-1蛋白陽性反應(yīng)主要定位于腫瘤細(xì)胞的細(xì)胞質(zhì)，為淺黃或棕黃褐色顆粒；由圖2可見，Ki-67蛋白陽性反應(yīng)主要定位于腫瘤細(xì)胞的細(xì)胞核，為淺黃或棕黃褐色顆粒。

表1 3組患者一般情況比較[M(P25～P75)]

圖1 Stathmin-1在各種子宮平滑肌腫瘤中的表達(dá)(免疫組化Envision二步法，×400)

表2 Stathmin-1在4組的表達(dá)情況

圖3 Stathmin-1在各組的染色分值箱線圖

表3 Ki-67在4組中的表達(dá)情況

圖4 Ki-67在各組的染色分值箱線圖

5.Stathmin-1、Ki-67的表達(dá)與臨床病理特征的關(guān)系：子宮平滑肌肉瘤組按FIGO分期分為Ⅰ～Ⅳ期。由表4可見，子宮肌瘤旁正常肌層組織Stathmin-1、Ki-67的表達(dá)與患者年齡無關(guān)(P>0.05)，普通型子宮平滑肌腫瘤及子宮富于細(xì)胞平滑肌腫瘤Stathmin-1、Ki-67的表達(dá)與患者年齡、肌瘤直徑、肌瘤數(shù)目均無關(guān)(P均>0.05)，子宮平滑肌肉瘤Stathmin-1、Ki-67的表達(dá)與患者年齡、腫瘤期別均無關(guān)(P均>0.05)。

表4 Stathmin-1、Ki-67在子宮平滑肌腫瘤中的表達(dá)與臨床病理特征的關(guān)系

6.Stathmin-1與Ki-67相關(guān)性分析：由表5可見，Stathmin-1及Ki-67染色分值在子宮肌瘤旁正常肌層組織、普通型子宮平滑肌腫瘤、子宮富于細(xì)胞平滑肌腫瘤組中均無相關(guān)性(P均>0.05)；子宮平滑肌肉瘤組中呈正相關(guān)(P<0.05)。

表5 Stathmin-1及Ki-67染色分值相關(guān)性分析

7.Stathmin-1與Ki-67在子宮平滑肌腫瘤中的惡性預(yù)測價值：由表6可見， Stathmin-1聯(lián)合Ki-67檢測子宮平滑肌惡性腫瘤敏感度為77.78%，特異性為90.04%，陽性預(yù)測值為73.68%，陰性預(yù)測值為92.45%。

表6 Stathmin-1及Ki-67表達(dá)檢測子宮平滑肌腫瘤的惡性預(yù)測價值

討 論

子宮平滑肌腫瘤是婦科最常見的腫瘤，其組織學(xué)分為良性子宮平滑肌瘤、子宮平滑肌肉瘤和交界性子宮平滑肌瘤，其中子宮富于細(xì)胞平滑肌腫瘤是最常見的交界性子宮平滑肌瘤。子宮富于細(xì)胞平滑肌腫瘤鏡下表現(xiàn)瘤細(xì)胞豐富，排列緊密，呈編織狀，細(xì)胞大小形態(tài)尚一致，無異型性或僅個別細(xì)胞有異型性，核分裂象(0～4)個/10倍高倍鏡下，但無病理性核分裂，無凝固性壞死。高度子宮富于細(xì)胞平滑肌腫瘤有時與子宮平滑肌肉瘤難以鑒別。子宮平滑肌肉瘤雖少見，惡性程度高，占子宮惡性腫瘤的 2%～4%, 占女性生殖道惡性腫瘤的1%, 大多數(shù)預(yù)后極差[8]。探索新的鑒別診斷指標(biāo)，提高腫瘤的診斷準(zhǔn)確度，預(yù)測腫瘤的預(yù)后等成為當(dāng)今的研究方向。

細(xì)胞周期調(diào)控異常、染色體的不穩(wěn)定一直是腫瘤學(xué)研究的熱點(diǎn)之一。微管解聚蛋白Stathmin-1是一種細(xì)胞調(diào)節(jié)因子，通過磷酸化調(diào)節(jié)自身活性來改變微管系統(tǒng)的動力平衡。Stathmin-1有促進(jìn)腫瘤細(xì)胞增殖、分化、侵襲的作用，與腫瘤預(yù)后相關(guān)[9～11]。Stathmin-1在卵巢癌、子宮內(nèi)膜癌、宮頸癌、輸卵管癌等患者中過度表達(dá)，其表達(dá)水平與紫杉醇類化療藥物治療效果及預(yù)后呈負(fù)相關(guān)[12～17]。Ki-67，細(xì)胞周期調(diào)節(jié)蛋白，作為增殖性細(xì)胞核的標(biāo)志物,可視為反映腫瘤增殖率的指標(biāo)。隨著Ki-67 表達(dá)水平的升高，腫瘤細(xì)胞增殖活性也隨之增高。細(xì)胞的過度分裂與增殖已被證實(shí)是腫瘤惡變的重要環(huán)節(jié)。Ki-67在卵巢癌、子宮內(nèi)膜癌、宮頸癌中均呈高表達(dá)，與患者腫瘤期別、組織學(xué)類型、腫瘤分化、肌層浸潤等侵襲性病理因素正相關(guān)，與患者預(yù)后負(fù)相關(guān)[18]。

本研究揭示了Stathmin-1及Ki-67在子宮平滑肌腫瘤中的表達(dá)以及與臨床特征的相關(guān)性。首先，采用免疫組化Envision二步法研究Stathmin-1及Ki-67在子宮平滑肌腫瘤中的表達(dá)，結(jié)果顯示Stathmin-1及Ki-67在普通子宮肌層、普通子宮平滑肌瘤、子宮子宮富于細(xì)胞平滑肌腫瘤中均呈低水平表達(dá)，子宮平滑肌肉瘤中高表達(dá)。進(jìn)一步將Stathmin-1及Ki-67在子宮平滑肌腫瘤中的表達(dá)與患者年齡、腫瘤直徑、惡性腫瘤期別等進(jìn)行相關(guān)性分析，結(jié)果顯示無臨床相關(guān)性。本研究同時進(jìn)行了Stathmin-1及Ki-67相關(guān)性的分析，結(jié)果顯示Stathmin-1與Ki-67在子宮平滑肌肉瘤中表達(dá)呈正相關(guān)，rs=0.795，P=0.000。本研究中，Stathmin-1陽性表達(dá)在子宮平滑肌腫瘤中診斷子宮平滑肌肉瘤的敏感度達(dá)100%，特異性為31.48%，與2015年美國Allen等[3]的研究相符。雖然大多數(shù)病例病理學(xué)診斷上主要依據(jù)標(biāo)本HE染色，但遇到特殊類型子宮平滑肌腫瘤，如子宮高度富于細(xì)胞平滑肌腫瘤，子宮惡性潛能不確定平滑肌腫瘤等，輔助的免疫組化參數(shù)有助于病理專家提高診斷的準(zhǔn)確性。Stathmin-1表達(dá)在子宮平滑肌肉瘤診斷的敏感度高，但特異性低，相較Allen等單純檢測Stathmin-1與子宮平滑肌腫瘤的研究，本研究進(jìn)一步聯(lián)合檢測Ki-67及Stathmin-1提高輔助早期診斷子宮平滑肌肉瘤及鑒別診斷子宮富于細(xì)胞平滑肌腫瘤及子宮平滑肌肉瘤的特異性。

綜上所述，本研究結(jié)果初步提示Stathmin-1及Ki-67在子宮平滑肌肉瘤中的高表達(dá)可能與子宮平滑肌肉瘤的發(fā)生相關(guān)。Stathmin-1及 Ki-67在子宮平滑肌肉瘤中的表達(dá)有一致性，聯(lián)合檢測Stathmin-1與Ki-67在早期輔助診斷子宮平滑肌肉瘤上有一定的臨床意義。