產(chǎn)乳酸芽孢桿菌發(fā)酵液對山藥護色及多糖免疫活性的影響

曾麗萍，田文妮，夏雨，黎攀，杜冰，*

（1.華南農(nóng)業(yè)大學(xué)食品學(xué)院，廣東廣州510642；2.咀香園健康食品（中山）有限公司，廣東中山528437）

山藥，薯蕷科，又稱薯蕷、白山藥等。山藥富含多種營養(yǎng)及功能活性物質(zhì)，如多糖、尿囊素等。山藥多糖是山藥中的主要活性成分，具有增強免疫力、抗氧化、抗腫瘤等作用[1-2]。但由于山藥水分含量高，難以長時間保存，因此往往需要對山藥進行干制處理，能夠有效延長山藥的貯藏期[3-4]。山藥在加工中極易產(chǎn)生褐變，影響其品質(zhì)。目前常用于山藥護色的褐變抑制劑主要是含硫護色劑，其中亞硫酸鹽不僅能夠有效抑制酶促反應(yīng)，還能抑制非酶褐變，從而延緩或者抑制褐變的發(fā)生，因此尤其受到廣泛的應(yīng)用。盡管采用含硫護色劑能夠取得很好的護色效果，但是產(chǎn)品中可能存在的殘硫量超標(biāo)的問題，嚴(yán)重影響產(chǎn)品品質(zhì)，還可能帶來食品安全問題[5]。因此，選用合適的非硫護色劑能夠有效保障山藥加工的品質(zhì)。

現(xiàn)有研究表明，加工過程中不同的處理手段可能影響山藥多糖的得率和山藥多糖的活性[6]，但目前多集中與研究提取方式對于山藥多糖的影響。護色方式對于山藥多糖的影響上未見報道。因此找尋合適的非硫護色劑對山藥進行護色，并探究其對山藥多糖的含量和活性的影響尤其重要。本研究采用產(chǎn)乳酸芽孢桿菌發(fā)酵液為原料，制備新型護色劑對山藥多糖進行護色，并探究其與傳統(tǒng)含硫護色對山藥多糖活性的影響，為山藥的護色工藝的進一步研究奠定基礎(chǔ)。

1 材料與方法

1.1 材料與試劑

山藥：河南焦作；產(chǎn)乳酸芽孢桿菌DU-106 篩選自傳統(tǒng)發(fā)酵奶酪，現(xiàn)由華南農(nóng)業(yè)大學(xué)新資源食品與功能性原料評價及研究中心鑒定及保藏；葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)品：sigma 試 劑 公 司；DMEM （dulbecco′s modified eagle medium，DMEM）培養(yǎng)基：美國Gibco 公司；無水乙醇：廣州化學(xué)試劑廠；CCK-8 試劑盒：日本同仁化學(xué)研究所；細胞因子（TNF-α、IL-1β、IL-6）試劑盒：欣博盛生物科技有限公司。

1.2 儀器與設(shè)備

HH-4 數(shù)顯恒溫水浴鍋：常州市華普達數(shù)學(xué)儀器有限公司；ANKE TDL-5-A 離心機：上海安亭分析儀器有限責(zé)任公司；752-N 紫外分光光度計：上海精密儀器有限公司；Labserv K3 酶標(biāo)儀：賽默飛世爾科技（中國）有限公司；DHP-600 電熱恒溫培養(yǎng)箱：北京市永光明醫(yī)療儀器廠；FA2004A 分析天平：上海精天電子儀器廠；HH-8 數(shù)顯恒溫水浴鍋：金壇市富華儀器有限公司；WYT 手持糖量計：早州中友光學(xué)儀器有限公司；VD-650 桌上式潔凈式工作臺：蘇州凈化設(shè)備有限公司；SHZ-Ⅲ循環(huán)水真空泵：上海亞榮生化儀器廠。

1.3 方法

1.3.1 原料處理

挑選大小一致、無創(chuàng)傷、無病蟲斑的塊莖，用清水洗凈、淋干，迅速切成2 mm 左右厚的薄片，分別用不同的護色液處理一定時間后，置于70 ℃烘箱中烘干至恒重，得干山藥片備用。

1.3.2 發(fā)酵護色液的制備

1.3.2.1 產(chǎn)乳酸芽孢桿菌發(fā)酵液制備

分別稱取乳清粉20 g、葡糖糖10 g、硫酸鎂1 g、磷酸氫二鉀2 g、硫酸錳0.5 g 溶解于一定量的水中，定容至1 L，分裝滅菌，得發(fā)酵培養(yǎng)基。

將產(chǎn)乳酸芽孢桿菌接種至發(fā)酵培養(yǎng)基中，接種量為0.1%，置于180 r/min，37 ℃搖床中液體發(fā)酵一定時間后取出，取出后采用0.22 μm 濾膜過濾，得產(chǎn)乳酸芽孢桿菌發(fā)酵液。

1.3.2.2 混合

將1.3.2.1 所得的產(chǎn)乳酸芽孢桿菌發(fā)酵液按照一定要求加水混合均勻，得發(fā)酵護色液。

1.3.3 護色工藝單因素

按照1.3.2 的方法分別考察發(fā)酵液發(fā)酵時間、發(fā)酵液添加量、護色時間3 個因素對山藥的相對褐變度和多糖含量的影響。當(dāng)探究發(fā)酵時間變化對相對褐變度和多糖含量影響時，發(fā)酵液添加量為10%，護色時間為1 h；探究發(fā)酵液添加量的影響時，發(fā)酵液發(fā)酵時間均為36 h，護色時間1 h；探究護色時間的影響時，發(fā)酵液發(fā)酵時間為36 h，發(fā)酵液添加量為10%。

1.3.4 響應(yīng)面優(yōu)化

在單因素試驗的基礎(chǔ)上，利用響應(yīng)面分析法對護色工藝進行進一步的優(yōu)化。根據(jù)Box-Behnken 試驗設(shè)計原理[7]，選取發(fā)酵液發(fā)酵時間（A）、發(fā)酵液添加量（B）、護色時間（C）3 個因素為自變量，以多糖得率（Y1）和相對褐變度（Y2）為響應(yīng)值，進行三因素三水平的響應(yīng)面試驗分析，得到最佳護色工藝。試驗因素與水平設(shè)計見表1。

表1 響應(yīng)面分析因素與水平Table 1 Coded levels and corresponding actual levels of independent variables used for Box-Behnken design

1.3.5 山藥多糖的提取

將干山藥片經(jīng)粉碎機粉碎后過20 目，精密稱取適量處理后的干山藥片，按料液比1∶60（g/mL），沸水浸提2 h 兩次，抽濾合并濾液，用3 倍體積的95%乙醇，醇沉過夜，沉淀物用75%乙醇洗滌兩遍后，用50 mL水把沉淀物洗入回流瓶中，加入25%鹽酸15 mL，沸水回流水解2.5 h，水解液定容至100 mL，取1 mL 測定多糖含量。

1.3.6 多糖含量測定

采用苯酚硫酸法測定山藥多糖含量[8-9]。

以葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)品繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，以葡萄糖當(dāng)量為橫坐標(biāo)，吸光度值為縱坐標(biāo)，作回歸曲線，線性回歸方程為：y=9.865 6x+0.012 3，R2=0.999。

1.3.7 相對褐變度測定

褐變度測定方法參考劉麗芳[10]，采用相對褐變度[11]來表述山藥的褐變程度。相對褐變度按下式計算：

式中：A護色為經(jīng)護色液處理后的樣品按照褐變度測定方法處理后在420 nm 下的吸光度值；A空白為經(jīng)清水處理后的樣品按照褐變度測定方法處理后在420 nm下的吸光度值。

1.3.8 多酚氧化酶（polyphenol oxidase，PPO）和過氧化物酶（peroxidase，POD）活性測定

將山藥塊莖用清水洗凈、淋干后迅速切成2 mm左右薄片，分別用A：對照組（蒸餾水）；B：0.1%亞硫酸鈉（含硫?qū)φ眨?；C：發(fā)酵護色液（經(jīng)由響應(yīng)面試驗優(yōu)化所得最佳工藝）浸泡護色1 h，參照趙喜亭等[12]的方法提取粗酶液并測定PPO 和POD 酶活。

1.3.9 山藥多糖免疫活性試驗

1.3.9.1 RAW264.7 細胞的培養(yǎng)與模型的建立

參考chen 等[13]的方法培養(yǎng)RAW264.7 細胞，略有調(diào)整。其中調(diào)整細胞密度為1.0×105個/mL 在96 孔板毎孔加入100 μL 的細胞懸浮液，培養(yǎng)24 h 后，然后按不同組別將入100 μL 的梯度濃度（2 000、1 000、500、250、125、62.5、31.25 μg/mL）的山藥多糖培養(yǎng)液孵育24 h，分別為空白對照組：含10%胎牛血清的DMEM培養(yǎng)基和實驗組：含10%胎牛血清的DMEM 培養(yǎng)基中加入不同質(zhì)量濃度的經(jīng)由不同護色處理的山藥中提取的粗多糖。其中，清水處理山藥多糖組（CYH）：加入從清水浸泡處理的山藥中提取的粗多糖；亞硫酸鈉處理山藥多糖組（CYN）：加入經(jīng)亞硫酸鈉護色處理的山藥中提取的粗多糖；發(fā)酵液處理山藥多糖組（CYF）：加入發(fā)酵護色液護色處理的山藥中提取的粗多糖。實驗組加入的山藥多糖均直接溶解于含10%胎牛血清的DMEM 培養(yǎng)基后，過0.22 μm 的無菌濾膜并重復(fù)3 次。

1.3.9.2 CCK-8 法檢測細胞增殖活性

參照chen 等[14]的方法，采用CCK-8 法檢測細胞增殖活性，其中細胞增殖率按下式計算：

式中：OD實驗組為實驗組在450 nm 波長下的OD值；OD空白對照組為空白對照組在450 nm 下的OD值。

1.3.9.3 細胞因子分泌水平測定

根據(jù)ELISA 試劑盒說明檢測細胞培養(yǎng)基中腫瘤壞死因子-α（tumor necrosis factor-α，TNF-α）、細胞白介素（interleukin，IL）-1β、細胞白介素（interleukin，IL）-6的含量。

2 結(jié)果與分析

2.1 單因素試驗結(jié)果

2.1.1 發(fā)酵液發(fā)酵時間對山藥褐變及多糖含量的影響

發(fā)酵時間對山藥褐變及多糖含量的影響如圖1所示。

由圖1可知，隨著發(fā)酵時間的延長，山藥多糖的含量呈現(xiàn)先上升后下降，而山藥的相對褐變度呈現(xiàn)先下降后上升。其中當(dāng)發(fā)酵時間為36 h，多糖含量最高為12.22%，此時山藥的相對褐變度為51.43%。而在48 h時，相對褐變度則達到最低點為43.81%，此時山藥多糖的含量為11.01%。綜合考慮，選定36 h 為最佳發(fā)酵液發(fā)酵時間。

圖1 發(fā)酵時間對山藥褐變及多糖含量的影響Fig.1 Effect of fermentation time on polysaccharide yield and browning index

2.1.2 發(fā)酵液添加量對山藥褐變度及多糖含量的影響發(fā)酵液添加量對山藥褐變及多糖含量的影響如圖2所示。

圖2 發(fā)酵液添加量對山藥褐變及多糖含量的影響Fig.2 Effect of the additive amount of color-protective agent on polysaccharide yield and browning index

由圖2可知，隨著發(fā)酵液添加量的增加，山藥多糖得率增加，當(dāng)發(fā)酵液添加量為10%后，多糖含量無明顯變化。而山藥的相對褐變度則隨著發(fā)酵液添加量增加不斷下降，直至發(fā)酵液添加量為10%后，再增加發(fā)酵液的添加量，山藥的相對褐變度無顯著變化。當(dāng)發(fā)酵液添加量為10%時，山藥多糖的得率為10.63%，而相對褐變度為46.95%。綜合考慮，選定最佳發(fā)酵液添加量為10%。

產(chǎn)乳酸芽孢桿菌的主要發(fā)酵產(chǎn)物為乳酸，發(fā)酵液的添加量不同，護色液的酸度等均發(fā)生變化。因此，發(fā)酵液的添加量對山藥多糖的得率和相對褐變度均有影響，在一定范圍內(nèi)，多糖得率和護色效果均隨著發(fā)酵液添加量的增加而增加。這可能是因為酸性溶液能夠降低多酚氧化酶的活性，同時也能夠減少氧氣在酸溶液中的溶解度，能夠有效減緩酶促褐變，達到護色的效果[15]。同時，王宗軍[16]認為，多糖結(jié)構(gòu)中均含有不穩(wěn)定的“H”，可能自身易被氧化，造成多糖的損失，而劉靜等[17]的研究表明護色劑在一定程度上能夠起到排氧的作用，能夠抑制多糖被氧化，在一定程度上，發(fā)酵液添加量越大，說明其中包含的產(chǎn)乳酸芽孢桿菌的發(fā)酵產(chǎn)物越多，排氧程度越高，因此多糖得率越多。但是當(dāng)發(fā)酵液添加量增大10%，再增大發(fā)酵液添加量對山藥護色及對多糖含量的影響不顯著。

2.1.3 護色時間對山藥褐變度及多糖含量的影響

以添加10%的發(fā)酵時間為36 h 的發(fā)酵液制備得到護色液為護色劑，探究不同護色時間對山藥多糖的得率與山藥相對褐變度的影響如圖3所示。

圖3 護色時間對山藥褐變及多糖含量的影響Fig.3 Effect of soaking time on polysaccharide yield and browning index

由圖3可知，隨著護色時間的延長，山藥多糖得率先增加后減少，其中護色時間為1 h 時，山藥多糖的得率最高，但當(dāng)護色時間繼續(xù)延長，其多糖含量變化不明顯。而山藥相對褐變度則隨著護色時間的延長呈現(xiàn)先下降后上升，當(dāng)護色時間為1 h 時，山藥的相對褐變度最低，其后延長護色試驗，山藥的相對褐變度變化不明顯。綜合考慮，選定1 h 為最佳護色時間。

2.2 發(fā)酵護色液制備工藝條件的優(yōu)化

在單因素試驗的基礎(chǔ)上，選用響應(yīng)面分析法對發(fā)酵護色液制備工藝條件進行優(yōu)化選取了不同的水平進行中心組合試驗，其中發(fā)酵時間、發(fā)酵液添加量和護色時間為自變量，多糖得率和相對褐變度均為響應(yīng)值，試驗方案設(shè)計及結(jié)果見表2，多糖得率回歸模型方差分析見表3，相對褐變度回歸模型方差分析見表4。

運用Design Expert8.0 軟件對表中的試驗結(jié)果進行整理分析，回歸擬合，得到的回歸方程預(yù)測模型如下：

從表3可以看出，一次項中A（發(fā)酵時間）和B（發(fā)酵液添加量）對多糖得率的線性效應(yīng)顯著（P＜0.05），C（護色時間）對多糖得率的線性效應(yīng)不顯著（P＞0.05），二次項中，B2、C2影響均極顯著（P＜0.01），AC影響顯著（P＜0.05），AB、BC、A2影響不顯著（P＞0.05）。此模型顯著性檢測P值小于0.000 1，極顯著，失擬項P值為0.349 4，不顯著。模型的相關(guān)系數(shù)為0.980 5，調(diào)整復(fù)相關(guān)指數(shù)為0.955 5。因此，說明模型的擬合程度好，試驗誤差小。根據(jù)F 值大小可知，在試驗范圍內(nèi)各因素對多糖得率的影響因素大小依次為A（發(fā)酵時間）＞B（發(fā)酵液添加量）＞C（護色時間）。

表2 響應(yīng)面優(yōu)化試驗設(shè)計及結(jié)果Table 2 Experimental design with experimental values of polysaccharide yied and browning index for response surface analysis

從表4可以看出，一次項中C（護色時間）對相對褐變度的線性效應(yīng)極顯著（P＜0.01），A（發(fā)酵時間）和B（發(fā)酵液添加量）對相對褐變度的線性效應(yīng)顯著（P＜0.05），二次項中，B2、C2、BC影響均極顯著（P＜0.01），A2影響顯著（P＜0.05），AB、AC影響不顯著（P＞0.05）。此模型顯著性檢測P值小于0.000 1，極顯著，失擬項P值為0.053 9，不顯著。模型的相關(guān)系數(shù)為0.990 1，調(diào)整復(fù)相關(guān)指數(shù)為0.979 5。因此，說明模型的擬合程度好，試驗誤差小。根據(jù)F 值大小可知，在試驗范圍內(nèi)各因素對多糖得率的影響因素大小依次為C（護色時間）＞A（發(fā)酵時間）＞B（發(fā)酵液添加量）。

通過回歸模型分析可知，以多糖得率為指標(biāo)，護色最佳工藝為，采用發(fā)酵時間為33.93 h 的產(chǎn)乳酸芽孢桿菌發(fā)酵液，發(fā)酵液添加量為12%，護色時間為0.94 h。在此條件下，模型預(yù)測山藥多糖的得率為12.78%，相對褐變度為41.74%?？紤]到在實際應(yīng)用中操作簡便，將工藝條件修正為采用發(fā)酵時間為34 h 的產(chǎn)乳酸芽孢桿菌發(fā)酵液、發(fā)酵液添加量為10%、護色時間為1 h；在此條件下，多糖得率為12.44%，相對褐變度為43.05%，實際值與理論值基本相符，說明模型對采用產(chǎn)乳酸芽孢桿菌配制護色液工藝條件參數(shù)優(yōu)化可靠可行，具有一定的應(yīng)用價值。

2.3 不同護色劑對山藥PPO和POD活性的影響

不同護色劑對山藥中PPO 和POD 的酶活性及護色效果的影響如圖4所示。

表3 多糖得率回歸模型方差分析Table 3 Analysis of variance of regression model of polysaccharide yield

表4 相對褐變度回歸模型方差分析Table 4 Analysis of variance of regression model of browning index

圖4 不同護色液對山藥中的PPO 和POD 酶活性及山藥褐變的影響Fig.4 Effect of different color protecting on PPO and POD activity and browning index

由圖4可知，最優(yōu)的發(fā)酵護色液和傳統(tǒng)亞硫酸鈉兩種護色液均能夠有效抑制PPO 和POD 活性。其中：發(fā)酵護色液對于PPO 的抑制效果顯著優(yōu)于亞硫酸鈉護色液，而兩種護色液護色后POD 活性沒有顯著差異（P＞0.05）。通過比較相對褐變度可知，亞硫酸鈉護色液和發(fā)酵護色液均有明顯的護色效果，其中發(fā)酵護色液的護色效果顯著優(yōu)于亞硫酸鈉護色液。

果蔬的褐變從本質(zhì)上可分為由于酚類物質(zhì)在酶的作用下氧化成能聚合形成褐色物質(zhì)的醌類的酶促褐變，以及其他非酶原因?qū)е碌姆敲负肿儍纱箢怺18-19]。山藥中的褐變以酶促褐變?yōu)橹?，趙喜亭等[20]研究表明，在山藥中，褐變發(fā)生的位置與山藥中的酚類物質(zhì)的分布情況相同，其中PPO、POD 和苯丙氨酸解氨酶（phenylalaninammo-nialyase，PAL）的活性與山藥的褐變度呈正相關(guān)，其相關(guān)性依次為PPO ＞POD ＞PAL，因此PPO 是使得山藥褐變的主要因素[21-22]。根據(jù)Li 等[23]研究成果表明，產(chǎn)乳酸芽孢桿菌的產(chǎn)物中包含有乳酸，其生長穩(wěn)定期為36 h～48 h，此時積累的發(fā)酵產(chǎn)物最多，而48 h 時后開始進入衰亡期，采用產(chǎn)乳酸芽孢桿菌發(fā)酵液制備護色液，可能是因為產(chǎn)乳酸芽孢桿菌生長過程中的乳酸等發(fā)酵產(chǎn)物能夠有效的減緩山藥中的酶促褐變，以此達到護色效果。因此在本試驗中，可能由于發(fā)酵護色液對山藥中的PPO 和POD 具有明顯的抑制效果，發(fā)酵護色液能夠起到明顯的護色效果，其中PPO 與山藥褐變的相關(guān)性大于POD，所以發(fā)酵護色液的護色效果優(yōu)于亞硫酸鈉護色液的護色效果。

2.4 不同護色劑對山藥多糖免疫活性的影響

巨噬細胞能夠分泌細胞因子參與調(diào)控天然免疫防御和特異性免疫，其在機體防御、自身穩(wěn)定方面都發(fā)揮著重要的作用，如直接殺傷病原微生物、抑制腫瘤細胞生長，消除凋零細胞[24-25]。不同護色處理后的山藥多糖對RAW264.7 細胞的增殖率的影響如圖5所示。

由圖5可知，CYH 在質(zhì)量濃度為31.25 μg/mL～1 000.00 μg/mL 時，對細胞增殖率的影響與空白對照組相比無顯著差異，說明CYH 在該濃度下對細胞無毒，但當(dāng)質(zhì)量濃度提高至2 000 μg/mL 時，細胞增殖率有明顯的提高，與空白對照組相比存在顯著差異（P＜0.05）。而CYN 在質(zhì)量濃度為31.25 μg/mL～2 000.00 μg/mL 時，隨著多糖濃度的增加，細胞的生長反而受到了抑制，Zhao 等[26]研究表明，硫處理會促進細胞凋亡，可能的原因是其增加了凋亡相關(guān)的基因和蛋白的表達，其中包括Bax and caspase-8。因此當(dāng)多糖的質(zhì)量濃度為1 000 μg/mL～2 000 μg/mL 時，CYN 顯著抑制細胞的增殖。但CYF 未出現(xiàn)這個情況，相反，CYF 隨多糖的質(zhì)量濃度的增加，細胞增殖率增加。其中，多糖質(zhì)量濃度為1 000 μg/mL 和2 000 μg/mL 時，CYF 對細胞增殖率顯著高于CYN（P＜0.05），與CYH 的細胞增殖率相近，說明這可能是山藥多糖本身促進細胞的增殖，而采用發(fā)酵護色液處理并未對多糖的細胞增殖促進作用產(chǎn)生影響?？傮w而言，不同護色處理的山藥多糖對細胞增殖率的影響不同，在高濃度下（1 000 μg/mL～2 000 μg/mL）CYF 和CYH 均能顯著提高細胞增殖率，但是CYN 則極顯著抑制細胞增殖率，結(jié)果表明，經(jīng)過亞硫酸鈉處理的山藥所得的山藥多糖對細胞增殖具有抑制作用，但采用清水處理和采用發(fā)酵護色液處理的山藥所提取得到的多糖則能對RAW264.7 的增殖有促進作用。不同護色處理的山藥多糖對RAW264.7 細胞分泌TNF-α 的影響如圖6所示。

圖5 不同護色處理的山藥多糖對RAW264.7 細胞增殖的影響Fig.5 Effect of Dioscorea opposita Thunb polysaccharide of different color protecting on the proliferation of RAW264.7

圖6 不同護色處理的山藥多糖對RAW264.7 細胞分泌TNF-α 的影響Fig.6 Effect of Dioscorea opposita Thunb polysaccharide of different color protecting on TNF-α secretion of RAW264.7

由圖6可知，相對于空白對照組，加入質(zhì)量濃度為31.25 μg/mL～2 000 μg/mL 的3 種護色處理后的山藥多糖均對RAW264.7 細胞分泌TNF-α 的水平有極顯著影響（P＜0.01）。其中CYN 在31.25 μg/mL～2 000 μg/mL 的質(zhì)量濃度下，隨之山藥多糖的質(zhì)量濃度的增加，RAW264.7 細胞分泌的TNF-α 的水平呈現(xiàn)先增加后降低的趨勢，在250 μg/mL 時達到最大值。而CYF 和CYH 在質(zhì)量濃度為31.25 μg/mL～2 000 μg/mL 時，RAW264.7 細胞分泌的TNF-α 的水平隨著山藥多糖的質(zhì)量濃度的增加而增加。通過對比可知，3 種處理后的山藥多糖均能夠提高細胞分泌TNF-α 的水平，但是CYN 在高濃度（500 μg/mL～2 000 μg/mL）下對提高RAW264.7 細胞分泌TNF-α 的水平有所降低，但是仍然高于空白對照組，而CYF 和CYH 對RAW264.7 細胞分泌TNF-α 水平存在濃度依賴性，而且兩者對于分泌水平的影響相似。通過對比可知，CYN 和CYF 對于提高RAW264.7 細胞分泌TNF-α 的水平具有顯著差異，CYF 對于細胞分泌TNF-α 的提高顯著優(yōu)于CYN，這可能是因為硫處理減少粗多糖的免疫調(diào)節(jié)活性可能是與其下調(diào)MAPK 信號通路有關(guān)[26]。不同護色處理的山藥多糖對RAW264.7 細胞分泌IL-1β 的影響見圖7。

圖7 不同護色處理的山藥多糖對RAW264.7 細胞分泌IL-1β 的影響Fig.7 Effect of Dioscorea opposita Thunb polysaccharide of different color protecting on IL-1β secretion of RAW264.7

如圖7所示，與空白對照組相比，3 種不同護色處理后的山藥多糖對小鼠RAW264.7 細胞分泌IL-1β 均有促進作用。CYN 在1 000 μg/mL～2 000 μg/mL的質(zhì)量濃度下，能夠極顯著提高IL-1β 的分泌水平（P＜0.01），但在小于1 000 μg/mL 的質(zhì)量濃度下無顯著影響；CYF 在62.5 μg/mL～250 μg/mL 的質(zhì)量濃度下，能顯著提高細胞分泌IL-1β 的水平（P＜0.05），在500 μg/mL～2 000 μg/mL 的質(zhì)量濃度則有極顯著的影響（P＜0.01）；CYH 在250 μg/mL～2 000 μg/mL 質(zhì)量濃度下，能極顯著提高細胞分泌IL-1β 的水平（P＜0.01）。而在本試驗濃度下，CYF 對RAW264.7 細胞分泌IL-1β 水平的促進作用明顯優(yōu)于CYN。

3 結(jié)論

本文提供了一種優(yōu)化后的山藥的非硫護色方案，與采用亞硫酸鹽護色方案相比，本護色方案能夠有效抑制山藥的褐變，顯著降低山藥中PPO 和POD 活性，同時提高多糖得率和保護山藥多糖的活性，尤其與傳統(tǒng)含硫護色相比，采用發(fā)酵護色液處理的山藥中的山藥多糖的活性顯著優(yōu)于采用亞硫酸鈉處理的，對實際生產(chǎn)具有一定的參考價值。