銀朱質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)提升研究

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1.內(nèi)蒙古蒙醫(yī)藥工程技術(shù)研究院，內(nèi)蒙古 通遼 028000；2.內(nèi)蒙古民族大學(xué)蒙醫(yī)藥學(xué)院，內(nèi)蒙古 通遼 028000

銀朱為蒙醫(yī)習(xí)用傳統(tǒng)藥材，蒙古名譯音“雄胡”，清·占布拉道爾吉著《無誤蒙藥鑒》記：“雄胡為紅色粉末，鮮紅者最佳、暗紅佳、紅者次之。燒之出水銀”[1]，清·伊喜巴拉珠爾著《認(rèn)藥白晶鑒》又記：“雄胡正品為當(dāng)今用紅色銀朱?？蓴總?、清肺肝脈之熱”[2]。目前蒙醫(yī)臨床和蒙藥生產(chǎn)使用的“雄胡”均為銀朱。銀朱性輕、涼，味甘。具有止腐，愈傷，清熱，消“奇哈”等功效。用于奇哈，蘇日雅，梅毒，傷口不愈，頑瘡不收，肺熱，肝熱，脈熱。本品1986年載入《內(nèi)蒙古蒙藥材標(biāo)準(zhǔn)》[3]，該標(biāo)準(zhǔn)就其“性狀”做了規(guī)定外，“鑒別”項(xiàng)下僅有硫化汞，汞鹽，硫酸鹽的一般理化鑒別。本實(shí)驗(yàn)研究為銀朱建立穩(wěn)定、可靠、準(zhǔn)確的檢查及含量測(cè)定方法，填補(bǔ)該藥材質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)項(xiàng)下的空白項(xiàng)，以及合理控制其質(zhì)量，保證用藥安全及療效提供可靠的依據(jù)。

1 儀器與材料

1.1 藥材 銀朱來源如下：X1批號(hào)為20161012，內(nèi)蒙古蒙藥股份有限公司；X2批號(hào)為20161102，赤峰阿魯科爾沁旗蒙醫(yī)醫(yī)院；X3批號(hào)為20161104，內(nèi)蒙民族大學(xué)附屬醫(yī)院制劑室；X4批號(hào)為20161106，內(nèi)蒙古庫倫蒙藥廠；X5批號(hào)為20161121，內(nèi)蒙古烏蘭浩特蒙醫(yī)醫(yī)院；X6批號(hào)為20161120，赤峰巴林右旗大板蒙醫(yī)醫(yī)院； X7批號(hào)為20161116，呼倫貝爾蒙醫(yī)醫(yī)院制劑室；X8批號(hào)為20161123，阜新蒙藥有限責(zé)任公司。經(jīng)鑒定皆為人工制成品銀朱Vermilton，均符合《內(nèi)蒙古蒙藥材標(biāo)準(zhǔn)》(1986)銀珠項(xiàng)下的各項(xiàng)規(guī)定。

1.2 儀器 滴定管(50 mL)，SQP電子天平(賽多利斯科學(xué)儀器有限公司)；DL-1型電爐(北京市永光明醫(yī)療儀器有限公司)。

1.3 試藥 陽性對(duì)照用銀朱 紅色硫化汞(上海阿拉丁生化科技股份有限公司，99%)；硫酸(西隴科學(xué)股份有限公司)，硝酸鉀、高錳酸鉀、硫酸亞鐵、硫酸鐵銨等試劑試藥均為分析純(天津市永大化學(xué)試劑有限公司)。

2 方法與結(jié)果

2.1 鑒別 本品由汞和硫混合加熱升華制得，為人工紅色硫化汞。因此主要含硫化汞(HgS)。故照《內(nèi)蒙古蒙藥材標(biāo)準(zhǔn)》(1986)載銀珠該項(xiàng)下的規(guī)定，和《中國人民共和國藥典》2015年版四部通則(0301)方法[4]對(duì)8批樣品進(jìn)行了鑒別研究。

2.1.1 汞鹽鑒別銀色反應(yīng) 取樣品粉末約各0.2 g，分別用鹽酸濕潤后，在光潔的銅片上摩檫，銅片表面顯銀白色光澤，加熱烘烤后，銀白色即消失。均顯陽性反應(yīng)。

2.1.2 汞鹽與硫酸鹽鑒別試驗(yàn)供試品溶液的制備 取樣品粉末各2 g，分別加鹽酸-硝酸(3∶1)的混合溶液2 mL使溶解，蒸干，加水2 mL使溶解，濾過，濾液作為供試品溶液。

2.1.2.1 汞鹽鑒別 ①取供試品溶液，加氫氧化鈉試液，即生成黃色沉淀。結(jié)果均顯陽性反應(yīng)。②取供試品的中性溶液，加碘化鉀試液，即生成猩紅色沉淀，能在過量的碘化鉀試液中溶解；再以氫氧化鈉試液堿化，加銨鹽即生成紅棕色的沉淀。結(jié)果均顯陽性反應(yīng)。③取不含過量硝酸的供試品溶液，涂于光亮的銅箔表面，擦拭后即生成一層光亮似銀的沉積物。結(jié)果均顯陽性反應(yīng)。

2.1.2.2 硫酸鹽鑒別 ①取供試品溶液，滴加氯化鋇試液，即生成白色沉淀；分離，沉淀在硝酸中均不溶解。結(jié)果均顯陽性反應(yīng)。②取供試品溶液，滴加醋酸鉛試液，即生成白色沉淀；分離，沉淀在氫氧化鈉試液中溶解。結(jié)果均顯陽性反應(yīng)。③取供試品溶液，加鹽酸，不生成白色沉淀(與硫代硫酸鹽區(qū)別)。結(jié)果均顯陽性反應(yīng)。

2.2 檢查

2.2.1 鐵檢查 在本品的人工煉制過程中接觸的鐵器，高溫中氧化，可不同程度污染成品。為了避免過多的鐵離子對(duì)人體傷害，故照《中國藥典》2015年版四部(通則0807)鐵鹽檢查法，對(duì)8樣品進(jìn)行了鐵鹽檢查。

2.2.1.1 供試液的制備 取樣品1.0 g，加稀鹽酸20 mL，加熱煮沸10 min，放冷，濾過，濾液置250 mL量瓶中，加氫氧化鈉試液中和后，加水至刻度，搖勻，即得。

2.2.1.2 標(biāo)準(zhǔn)鐵溶液的制備 稱取硫酸鐵銨[FeNH4 (SO4)2·12H2O]0.863 g，置1 000 mL量瓶中，加水溶解后，加硫酸2.5 mL，用水稀釋至刻度，搖勻，作為貯備液。臨用前，精密量取貯備液10 mL，置100 mL量瓶中，加水稀釋至刻度，搖勻，即得(每1 mL相當(dāng)于10 μg的Fe)。

2.2.1.3 鐵鹽檢查 準(zhǔn)確吸取供試液10 mL(相當(dāng)于樣品40 mg)，加水使成25 mL，移置50 mL納氏比色管中，加稀鹽酸4 mL與過硫酸銨50.0 mg，用水稀釋使成35 mL后，加30%硫氰酸銨溶液3 mL，再加水適量稀釋成50 mL，搖勻；如顯色，立即與標(biāo)準(zhǔn)鐵溶液一定量制成的對(duì)照溶液(取標(biāo)準(zhǔn)鐵溶液4 mL，置50 mL納氏比色管中，加水使成25 mL，加稀鹽酸4 mL與過硫酸銨50 mg，用水稀釋成35 mL，加30%硫氰酸銨溶液3 mL，再加水適量稀釋成50 mL，搖勻)比較。 結(jié)果8批樣品供試液的顏色都淺于標(biāo)準(zhǔn)鐵溶液的顏色。表明銀朱8批樣品中的鐵化合物含量均少于0.1%。

2.2.2 可溶性汞鹽檢查 為確保臨床用藥安全，本品進(jìn)行了可溶性汞鹽的檢查。

2.2.2.1 供試品溶液的制備 取樣品1 g，加水10 mL，攪勻，濾過，靜置(或離心分離)，過濾，即得。

2.2.2.2 汞鹽檢查 照汞鹽(《中國藥典》2015年版四部通則0301)鑒別試驗(yàn)檢查。①取供試品溶液，加氫氧化鈉試液，觀察沉淀反應(yīng)。結(jié)果均顯陰性反應(yīng)，沒有生成沉淀。②取供試品溶液，加碘化鉀試液，觀察沉淀反應(yīng)。如生成猩紅色沉淀，加過量的碘化鉀試液，沉淀溶解；再以氫氧化鈉試液堿化，加銨鹽即生成紅棕色的沉淀。結(jié)果首次加碘化鉀試液，均沒有生成沉淀。③取供試品溶液加適量硝酸，混勻，涂于光亮的銅箔表面，觀察。結(jié)果均顯陰性反應(yīng)，都未見有光亮似銀的沉積物層。結(jié)果8批樣品的可溶性汞鹽檢查均顯陰性反應(yīng)。故本品水溶液不得顯汞鹽的鑒別反應(yīng)。

2.3 含量測(cè)定

2.3.1 滴定液的制備 硫氰酸銨滴定液(0.1 mol/L):取硫氰酸銨8.0 g，加水使溶解成1 000 mL，搖勻。精密量取硝酸銀滴定液(0.1 mol/L)25 mL，加水50 mL、硝酸2 mL與硫酸鐵銨指示液2 mL，用本液滴定至溶液微顯淡棕紅色；經(jīng)劇烈振搖后仍不褪色，即為終點(diǎn)。根據(jù)本液的消耗量算出本液的濃度，即得。 本試驗(yàn)用硫氰酸銨滴定液的濃度為0.102 7 mol/L。每1 mL硫氰酸銨滴定液(0.102 7 mol/L)相當(dāng)于11.94 mg的硫化汞(HgS)。

2.3.2 測(cè)定方法 取本品粉末約0.3 g，精密稱定，置錐形瓶中，加硫酸10 mL與硝酸鉀1.5 g，加熱20分鐘使溶解(保持溶液微沸，由瓶中溶液鮮紅色與灰紅色出黃色氣體至溶液呈黃綠色出白色氣體)，放冷至室溫，加水50 mL，并加1%高錳酸鉀溶液至顯粉紅色，再滴加2%硫酸亞鐵溶液至顏色消失后，加硫酸鐵銨指示液2 mL，用硫氰酸銨滴定液(0.1mol/ mL)滴定。滴定至溶液微黃色。

2.3.3 線性與范圍取硫化汞0.1 g、0.2 g、0.3 g、0.4 g、0.5 g，精密稱定，分別置錐形瓶中，按“2.3.2測(cè)定方法”項(xiàng)下方法，自“加硫酸10 mL”起依法操作，以樣品量(x)對(duì)硫氰酸銨滴定液(0.1 mol/L)的消耗體積(y)進(jìn)行線性回歸，得標(biāo)準(zhǔn)曲線回歸方程為：y=191.63x+0.426 4，相關(guān)系數(shù)r= 0.999 8。表明硫化汞的取樣量在0.1～0.5 g范圍內(nèi)，與硫氰酸銨滴定液(0.1 mol/L)的消耗體積具有良好的線性關(guān)系。

2.3.4 精密度試驗(yàn)取 紅色硫化汞0.3 g，精密稱定，置錐形瓶中，按“2.3.3測(cè)定方法”項(xiàng)下方法，自“加硫酸10 mL”起依法操作，連續(xù)測(cè)定5次，并計(jì)算含硫化汞測(cè)得率。結(jié)果硫化汞測(cè)得率為100.97%，RSD為0.14%。結(jié)果表明該試驗(yàn)精密度良好。

2.3.5 穩(wěn)定性試驗(yàn) 精密稱取樣品X2(赤峰阿魯科爾沁旗蒙醫(yī)醫(yī)院，批號(hào)20161102)0.3 g，按“2.3.2測(cè)定方法” 分別于0 h、4 h、8 h、12 h、24 h時(shí)間點(diǎn)依法測(cè)定，其結(jié)果平均含量為98.91%、RSD為0.23%。表明該方法穩(wěn)定性良好。

2.3.6 重復(fù)性試驗(yàn) 稱取樣品X2(赤峰阿魯科爾沁旗蒙醫(yī)醫(yī)院，批號(hào)20161102)0.3 g，5份，精密稱定，分別按“2.3.2測(cè)定方法”依法測(cè)定，其結(jié)果重復(fù)性良好，平均含量為98.88%、RSD為0.29%。

2.3.7 回收率試驗(yàn) 取已知含量的樣品X2(赤峰阿魯科爾沁旗蒙醫(yī)醫(yī)院，批號(hào)20161102)0.15 g，9份，精密稱定，各置錐形瓶中，分三組按標(biāo)準(zhǔn)品加入量-樣品中含量0.8∶1、1∶1、1.2∶1的要求分別依次精密加入赤色硫化汞，按“2.3.2測(cè)定方法”項(xiàng)下方法，自“加硫酸10 mL”起依法操作，平行測(cè)定3次，其HgS的總平均回收率為98.85%、RSD為1.02%。結(jié)果見表1。

表1 回收率試驗(yàn)結(jié)果

2.3.8 樣品測(cè)定 取8批銀朱樣品0.3 g，精密稱定，各置錐形瓶中，按“2.3.2測(cè)定方法”，自“加硫酸10 mL”起依法操作，測(cè)定并計(jì)算含量。銀朱平均含量為98.91%，RSD為0.26%。結(jié)果見表2。

表2 銀朱樣品測(cè)定結(jié)果

3 討論

銀朱載于《內(nèi)蒙古蒙藥材標(biāo)準(zhǔn)》(1986版)中，主要內(nèi)容為“名稱”、“來源”、“性狀”、“鑒別”、“性味”、“功能與主治”、“用法與用量”、“貯藏”等項(xiàng)。不同產(chǎn)地采購的7批銀朱樣品根據(jù)《國家藥品工作手冊(cè)》(第四版)和《中蒙藥材和炮制品標(biāo)準(zhǔn)制修訂工作手冊(cè)》中技術(shù)要求進(jìn)行補(bǔ)充項(xiàng)實(shí)驗(yàn)研究，在原有的標(biāo)準(zhǔn)上增加了 “檢查”、“含量測(cè)定”、“注意”等項(xiàng)，經(jīng)過實(shí)驗(yàn)研究也初步獲得了參考性價(jià)值的數(shù)據(jù)。