D-雙功能蛋白在子宮內(nèi)膜癌組織中的表達(dá)及意義

路欣 孔令玉

[摘要] 目的 檢測(cè)子宮內(nèi)膜癌組織中D-雙功能蛋白（DBP）表達(dá)水平，及其與血清腫瘤標(biāo)志物癌胚抗原（CEA）、糖類抗原125（CA125）檢測(cè)結(jié)果的相關(guān)性，探討DBP對(duì)子宮內(nèi)膜癌診斷和治療的臨床意義。 方法 選取2013年1月～2015年12月在河北省唐山市婦幼保健院（以下簡(jiǎn)稱“我院”）進(jìn)行子宮內(nèi)膜癌切除術(shù)患者30例作為實(shí)驗(yàn)組，選取我院同期健康體檢的正常者20名作為對(duì)照組，應(yīng)用化學(xué)發(fā)光法檢查血清腫瘤標(biāo)志物CEA和CA125的表達(dá)水平，免疫組織化學(xué)法檢測(cè)子宮內(nèi)膜癌組織和癌旁組織DBP的表達(dá)水平，測(cè)量積分光密度值（IOD），采用Pearson相關(guān)分析法分析DBP與腫瘤標(biāo)志物CEA、CA125的相關(guān)性。 結(jié)果 子宮內(nèi)膜癌組織中DBP的IOD值表達(dá)高于癌旁組織，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P < 0.05），且DBP與腫瘤標(biāo)志物CEA（r = 0.837，P < 0.01）和CA125（r = 0.787，P < 0.01）的表達(dá)水平呈線性正相關(guān)。 結(jié)論 子宮內(nèi)膜癌患者DBP的表達(dá)升高，并且與子宮內(nèi)膜癌的發(fā)生發(fā)展密切相關(guān)。CEA、CA125和DBP聯(lián)合檢測(cè)對(duì)子宮內(nèi)膜癌早期診斷有重要的意義，并為子宮內(nèi)膜癌的治療和預(yù)后提供了一個(gè)新的研究靶點(diǎn)。

[關(guān)鍵詞] 子宮內(nèi)膜癌;D-雙功能蛋白;癌胚抗原;糖類抗原125;基因診斷

[中圖分類號(hào)] R737.33? ? ? ? ? [文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼] A? ? ? ? ? [文章編號(hào)] 1673-7210（2019）02（a）-0161-04

[Abstract] Objective To detect the expression level of D-bifunctional protein （DBP） in endometrial cancer tissues and its correlation with the detection results of serum tumor markers carcinoembryonic antigen （CEA） and carbohydrate antigen 125 （CA125）， and to explore the clinical significance of DBP in the diagnosis and treatment of endometrial cancer. Methods From January 2013 to December 2015， 30 cases of patients undergoing endometrial cancer resection in Tangshan Maternal and Child Health Care Hospital （hereinafter referred to as "our hospital"） were selected as the experimental group， and 20 cases of normal persons who underwent physical examination during the same period in our hospital were selected as the control group. Chemiluminescence was used to detect the expression levels of serum tumor markers CEA and CA125， and immunohistochemistry was used to detect the expression levels of DBP in endometrial and paracancer tissues， and the integral optical density value （IOD） was measured. Pearson correlation analysis was used to analyze the correlation between DBP and tumor markers CEA and CA125. Results The expression of IOD value of DBP in endometrial carcinoma was higher than that in adjacent tissues， and the difference was statistically significant （P < 0.05）. There was a positive linear correlation between DBP and tumor markers CEA （r = 0.837， P < 0.01） and CA125 （r = 0.787， P < 0.01）. Conclusion The expression of DBP is increased in patients with endometrial cancer and is closely related to the occurrence and development of endometrial cancer. The combined detection of CEA， CA125 and DBP has important significance for the early diagnosis of endometrial cancer， and provides a new research target for the treatment and prognosis of endometrial cancer.

[Key words] Endometrial cancer; D-bifunctional protein; Carcinoembryonic antigen; Carbohydrate antigen 125; Genetic diagnosis

子宮內(nèi)膜癌（endometrial carcinoma，EC）是門診和住院患者中常見(jiàn)的婦科腫瘤，臨床發(fā)病率近年呈現(xiàn)升高趨勢(shì)，甚至在一些地區(qū)發(fā)病率超過(guò)子宮頸癌，嚴(yán)重影響著女性的生活和健康[1]。因此，EC的早期診斷和預(yù)后監(jiān)測(cè)就變得尤其重要。近年來(lái)，EC的多學(xué)科聯(lián)合檢測(cè)為提高其診斷的準(zhǔn)確率和敏感率做出很大貢獻(xiàn)。D-雙功能蛋白（D-bifunctional protein，DBP），也稱為17β-雌二醇脫氫酶Ⅳ（17β-Hydroxysteroid dehydrogenase Ⅳ，HSD17B4），作為一種過(guò)氧化物酶蛋白，在類固醇的代謝過(guò)程中發(fā)揮著重要作用[2]。人類蛋白圖譜（human protein atlas）網(wǎng)站報(bào)道，肝癌患者的癌組織石蠟切片中DBP的蛋白表達(dá)水平也很高。筆者前期對(duì)D-雙功能蛋白在肝癌發(fā)病中的作用進(jìn)行了研究，結(jié)果表明DBP不僅在肝癌HepG2細(xì)胞明顯升高，在肝癌大鼠、肝癌患者腫瘤組織中也存在明顯的高表達(dá)，并且同樣在乳腺癌組織中也得到了證實(shí)[3]。因?yàn)樽訉m內(nèi)膜癌同屬于受激素影響的腫瘤，為進(jìn)一步明確DBP在子宮內(nèi)膜癌中的表達(dá)情況，本研究提出對(duì)子宮內(nèi)膜癌患者血清的標(biāo)志物癌胚抗原（CEA）和糖類抗原125（CA125），以及患者腫瘤組織學(xué)DBP水平檢測(cè)，探討DBP在子宮內(nèi)膜癌表達(dá)情況，研究DBP和CEA、CA125聯(lián)合在早期診斷子宮內(nèi)膜癌中的臨床意義及相關(guān)性分析。

1 資料與方法

1.1 一般資料

選擇在河北省唐山市婦幼保健院（以下簡(jiǎn)稱“我院”）2013年1月～2015年12月進(jìn)行子宮內(nèi)膜癌切除術(shù)患者30例為實(shí)驗(yàn)組，年齡34～65歲，平均（44.53±9.25）歲，子宮內(nèi)膜癌患者全部經(jīng)病理和臨床確診，子宮內(nèi)膜癌患者術(shù)后的腫瘤組織和距離腫瘤邊緣1 cm以上的癌旁正常組織留取病理標(biāo)本，并經(jīng)2名臨床診斷經(jīng)驗(yàn)豐富的病理科醫(yī)師進(jìn)行確診，將癌旁正常組織無(wú)腫瘤細(xì)胞浸潤(rùn)作為手術(shù)切除完全的標(biāo)準(zhǔn)，手術(shù)前未經(jīng)過(guò)放化療等治療，無(wú)其他特殊病史。選擇同期我院20名健康體檢女性為對(duì)照組，年齡28～62歲，平均（32.45±7.65）歲。兩組年齡比較，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P > 0.05），具有可比性。

1.2 檢測(cè)方法

晨起空腹時(shí)采取兩組實(shí)驗(yàn)對(duì)象的靜脈血，經(jīng)離心機(jī)分離血清后，用我院檢驗(yàn)科的DX-800i化學(xué)發(fā)光儀，采用化學(xué)發(fā)光免疫法檢測(cè)血清CEA和CA125，所有試劑購(gòu)買自美國(guó)貝克曼公司;子宮內(nèi)膜癌腫瘤組織和癌旁正常組織用石蠟包埋后，萊卡組織切片機(jī)，先用普通染色檢測(cè)切片情況，然后應(yīng)用免疫組織化學(xué)檢測(cè)試劑盒（北京中杉金橋生物公司）檢測(cè)DBP表達(dá)水平，腫瘤組織的DBP表達(dá)水平用分析測(cè)量圖象軟件Imagepro-Pro-Plus 6.0（IPP 6.0）對(duì)積分光密度值（IOD）進(jìn)行測(cè)量，最后分析實(shí)驗(yàn)組DBP表達(dá)水平與CEA和CA125的相關(guān)性。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

應(yīng)用SPSS 17.0軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析，計(jì)量資料采用均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（x±s）表示，比較用t檢驗(yàn)。相關(guān)性采用Pearson相關(guān)分析。以P < 0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 實(shí)驗(yàn)組與對(duì)照組血清CEA和CA125水平比較

2.2 子宮內(nèi)膜癌癌組織和癌旁組織DBP表達(dá)水平比較

排除實(shí)驗(yàn)組個(gè)別離均值后，分別對(duì)12例實(shí)驗(yàn)組術(shù)后癌組織和癌旁組織DBP表達(dá)水平比較，免疫組化分析結(jié)果顯示癌組織顯著高于癌旁正常組織（圖1，封四）。進(jìn)一步通過(guò)灰度值的分析，子宮內(nèi)膜癌組織DBP的灰度值（56.26±11.44）高于癌旁組織（29.87±5.73），差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P < 0.05）。

2.3 實(shí)驗(yàn)組CEA、CA125與DBP表達(dá)水平的相關(guān)性分析

3 討論

腫瘤血清標(biāo)志物的臨床檢測(cè)是一種無(wú)創(chuàng)且有一定指導(dǎo)性的檢查方法，但血清學(xué)單項(xiàng)檢測(cè)在腫瘤早期診斷和預(yù)后中靈敏性和特異性不高，因此可通過(guò)聯(lián)合檢測(cè)的方法解決這個(gè)問(wèn)題，而且在檢驗(yàn)和臨床中得到了專家學(xué)者的認(rèn)可。CEA常常被認(rèn)為是胃腸道腫瘤早期診斷及預(yù)后評(píng)價(jià)的良好指標(biāo)之一，而近年的相關(guān)報(bào)道，其對(duì)婦科生殖系統(tǒng)腫瘤的診斷和預(yù)后檢測(cè)也有很好的臨床參考價(jià)值，同時(shí)在其他惡性腫瘤的鑒別診斷、病情和預(yù)后中CEA檢測(cè)也有重要臨床意義[4]，但是該指標(biāo)檢測(cè)存在非特異型，通常與其他指標(biāo)聯(lián)合應(yīng)用[5]。本研究結(jié)果顯示，實(shí)驗(yàn)組CEA表達(dá)水平也是明顯升高的，提示血清CEA檢測(cè)對(duì)子宮內(nèi)膜癌的早期診斷是有著一定的臨床價(jià)值。CA125是對(duì)卵巢癌的診斷最敏感的腫瘤標(biāo)志物之一，臨床實(shí)踐中有較高的準(zhǔn)確率，有研究報(bào)道，在術(shù)前對(duì)疑似卵巢癌患者CA125水平進(jìn)行檢測(cè)確診可高達(dá)80%左右[6-7]。CA125作為腫瘤標(biāo)志物不僅僅是卵巢癌診斷較高靈敏性的非特異性腫瘤標(biāo)志物，在其他婦科腫瘤患者中的表達(dá)水平也會(huì)過(guò)高表達(dá)[8-11]。洪錫田等[12]研究表明診斷乳腺癌的患者中血清CA125的陽(yáng)性率達(dá)到31.8%，這也說(shuō)明CA125也作為乳腺癌診斷的腫瘤標(biāo)志物。雖然CEA、CA125等血清腫瘤標(biāo)志物診斷婦科腫瘤比較敏感，但畢竟受血清學(xué)影響因素限制，因此并不是太穩(wěn)定。

DBP是一種與炎癥、脂肪酸代謝，特別是性類固醇代謝密切相關(guān)的酶蛋白分子。研究報(bào)道DBP表達(dá)水平與腫瘤發(fā)生有密切關(guān)系，DBP不僅前列腺癌腫瘤組織比癌旁正常組織明顯升高，并且在前列腺癌預(yù)后較差的患者中檢測(cè)有重要臨床意義[13]。另外研究也顯示其他腫瘤組織如肝細(xì)胞肝癌、直腸癌中都高度表達(dá)，DBP在卵巢等與激素相關(guān)的腫瘤組織也存在高表達(dá)[14-17]，并且DBP在類固醇的代謝過(guò)程中發(fā)揮重要的作用，這就為研究子宮內(nèi)膜癌的診斷和治療檢測(cè)提供了新的方向和靶點(diǎn)[18-21]。

本課題在前期研究基礎(chǔ)上，以DBP為切入點(diǎn)，探討子宮內(nèi)膜癌的DBP與CEA、CA125的關(guān)系，本研究與前期肝細(xì)胞肝癌、乳腺癌研究結(jié)果表現(xiàn)存在一致性，子宮內(nèi)膜癌患者腫瘤組織的DBP基因表達(dá)水平升高，并且明顯高于癌旁的正常組織，實(shí)驗(yàn)組血清CEA、CA125表達(dá)水平顯著高于對(duì)照組，提示子宮內(nèi)膜癌腫瘤組織DBP表達(dá)水平與患者血清CEA、CA125表達(dá)呈線性正相關(guān)的關(guān)系。鑒于DBP基因的特點(diǎn)，它在血清學(xué)檢測(cè)中幾乎不表達(dá)，可以作為基因檢測(cè)的重要手段，本研究也表明DBP結(jié)合血清腫瘤標(biāo)志物CEA和CA125的檢測(cè)更好地提升臨床診斷價(jià)值，且DBP可以作為子宮內(nèi)膜癌術(shù)后和病情監(jiān)測(cè)的新基因靶點(diǎn)，并將進(jìn)一步探索和研究。

[參考文獻(xiàn)]

[1]? Morrison DH，Rahardja D，King E，et al. Tumour biomarker expression relative to age and molecular subtypes of invasive breast cancer [J]. Br J Cancer，2012，107（2）：382-387.

[2]? Jiang LL，Miyazawa S，Souri M，et al. Structure of D-3-Hydroxyacyl-CoA Dehydratase/D-3-Hydroxyacyl-CoA Dehydrogenase Bifunctional Protein1 [J]. J Biochem，1997， 121（3）：506-513.

[3]? Lu X，Ma P，Shi Y，et al. NF-κB increased expression of 17β-hydroxysteroid dehydrogenase 4 promotes HepG2 proliferation via inactivating estradiol [J]. Mol Cell Endocrinol，2015，401（C）：1-11.

[4]? 張菁.聯(lián)合檢測(cè)血清CA125、CA125、CA199對(duì)子宮內(nèi)膜癌的診斷價(jià)值[J].內(nèi)蒙古醫(yī)學(xué)雜志，2009，41（5）：547-549.

[5]? Dufy MJ，Shering S. CA 153：aprognostic marker in breast cancer [J]. Int Markers，2000，15（4）：330-333.

[6]? 鄭航，羅榮城.TPS CA2153和CEA聯(lián)合檢測(cè)對(duì)乳腺癌的診斷[J].第一軍醫(yī)大學(xué)學(xué)報(bào)，2005，25（10）：1293-1298.

[7]? 羅麗麗，張易欣，倪惠杰，等.EpCAM和CA125在子宮內(nèi)膜腺癌及子宮癌前病變患者血清中的表達(dá)水平與意義[J].中國(guó)婦幼保健，2014，29（5）：484-486.

[8]? Zhou X，Wang H，Wang X. Preoperative CA125 and fibrinogen in patients with endometrial cancer：a risk model for predicting lymphovascular space invasion [J]. J Gynecol Oncol，2017，28（2）：e11.

[9]? Baser E，Gungor T，Togrul C，et al. Preoperative prediction of poor prognostic parameters and adjuvant treatment in women with pure endometrioid type endometrial cancer：what is the significance of tumor markers？ [J]. Eur J Gynaecol Oncol，2014，35（5）：513-518.

[10]? Wang H，Xiao SS，Zeng F，et al. Synchronous primary endometrial and fallopian tube cancers：one case report [J]. Nan Fang Yi Ke Da Xue Xue Bao，2011，31（12）：2093-2094.

[11]? Dolscheid-Pommerich RC，Keyver-Paik M，Hecking T，et al. Clinical performance of LOCITM-based tumor marker assays for tumor markers CA-153，CA125，CEA，CA19-9 and AFP in gynecological cancers [J]. Tumour Biol，2017，39（10）：1010428317730246.

[12]? 洪錫田，王景萍，張瑞麗.血清CA153、CA125、CEA、SF檢測(cè)在乳腺癌診斷中的價(jià)值[J].中國(guó)民康醫(yī)學(xué)，2007， 19（1）：23-24.

[13]? Rasiah KK，Gardiner-Garden M，Padilla EJ，et al. HSD17B4 overexpression，an independent biomarker of poor patient outcome in prostate cancer [J]. Mol CellEndocrinol，2009， 301（1/2）：89-96.

[14]? English MA，Kane KF，Cruickshank N，et al. Loss of estrogen inactivation in colonic cancer [J]. J Clin Endocrinol Metab，1999，84（6）：2080-2085.

[15]? Mcmichael AJ，Potter JD. Colon cancer and sex[J]. The Lancet，1982，319（8282）：1190-1191.

[16]? Nagayoshi Y，Ohba T，Yamamoto H，et al. Characterization of 17beta-hydroxysteroid dehydrogenase type 4 in human ovarian surface epithelial cells [J]. Mol Hum Reprod，2005，11（9）：615-621.

[17]? Maleki J，Nourbakhsh M，Shabani M，et al. 17beta-Estradiol Stimulates Generation of Reactive Species Oxygen and Nitric Oxide in Ovarian Adenocarcinoma Cells（OVCAR 3）[J]. Iran J Cancer Prev. 2015，8（3）：e2332.

[18]? Moeller G，Adamski J. Multifunctionality of human 17beta-hydroxysteroid dehydrogenases [J]. Mol Cell Endocrinol，2006，248（1/2）：47-55.

[19]? Markus M，Husen B，Leenders F，et al. The organelles containing porcine 17 beta-estradiol dehydrogenase are peroxisomes [J]. Eur J Cell Biol，1995，68（3）：263-267.

[20]? de Launoit Y，Adamski J. Unique multifunctional HSD17B4 gene product：17beta-hydroxysteroid dehydrogenase 4 and D-3-hydroxyacyl-coenzyme A dehydrogenase/hydratase involved in Zellweger syndrome [J]. J Mol Endocrinol，1999，22（3）：227-240.

[21]? Santolla MF，Lappano R，De Marco P，et al. G protein-coupled estrogen receptor mediates the up-regulation of fatty acid synthase induced by 17beta-estradiol in cancer cells and cancer-associated fibroblasts [J]. J Biol Chem，2012，287（52）：43234-43245.

（收稿日期：2018-08-06? 本文編輯：封? ?華）