• <tr id="yyy80"></tr>
  • <sup id="yyy80"></sup>
  • <tfoot id="yyy80"><noscript id="yyy80"></noscript></tfoot>
  • 99热精品在线国产_美女午夜性视频免费_国产精品国产高清国产av_av欧美777_自拍偷自拍亚洲精品老妇_亚洲熟女精品中文字幕_www日本黄色视频网_国产精品野战在线观看 ?

    產(chǎn)朊假絲酵母、植物乳桿菌混合發(fā)酵及凈水效果

    2019-04-04 08:38:22謝鳳行周可張峰峰趙瓊趙玉潔孫海波王姝
    食品與發(fā)酵工業(yè) 2019年6期
    關(guān)鍵詞:酵母菌植物

    謝鳳行,周可,張峰峰,趙瓊,趙玉潔,孫海波,王姝

    (天津市農(nóng)業(yè)生物技術(shù)研究中心,天津,300384)

    隨著水產(chǎn)養(yǎng)殖業(yè)集約化經(jīng)營模式的提高,殘存餌料的腐爛、生物代謝物和生物殘?bào)w沉積,使池塘有機(jī)污染嚴(yán)重,此外,人類生活污水、各種工業(yè)廢水、農(nóng)業(yè)退水等的超量排放,進(jìn)一步污染了養(yǎng)殖用水水源,使養(yǎng)殖環(huán)境惡化,養(yǎng)殖病害泛濫[1-3]。化學(xué)類藥品雖然在水質(zhì)調(diào)控和疾病防治方面起到了積極的作用,但化學(xué)類藥物的濫用帶來了藥物在魚蝦體內(nèi)大量富集殘留和病原菌的抗藥性等問題[4],導(dǎo)致水產(chǎn)品質(zhì)量的下降,既危害了人類健康,也污染了環(huán)境,歐盟現(xiàn)已明令禁止在動(dòng)物生產(chǎn)中使用抗生素。由酵母菌和乳酸菌組成的微生態(tài)制劑不僅可提高飼料的轉(zhuǎn)化利用率,促進(jìn)動(dòng)物生長,還可調(diào)節(jié)養(yǎng)殖動(dòng)物消化道的微生態(tài)平衡,產(chǎn)生免疫活性物質(zhì),激活免疫系統(tǒng)提高養(yǎng)殖動(dòng)物的健康水平[5-6];施與水體還能降低水體中氨氮和亞硝態(tài)氮含量,有效凈化水質(zhì)[7]。

    由酵母菌和乳酸菌組成的復(fù)合微生態(tài)制劑大多是由單一菌劑分別發(fā)酵后按一定比例混合而成,此種方法工作量較大,且單獨(dú)發(fā)酵后混合存在染菌風(fēng)險(xiǎn)。混合發(fā)酵又稱混菌發(fā)酵,指采用2種或多種微生物的協(xié)同作用共同完成某發(fā)酵過程的一種新型發(fā)酵技術(shù),與單株菌發(fā)酵相比顯著縮短了發(fā)酵時(shí)間,提高發(fā)酵效率,節(jié)約生產(chǎn)成本[8]。有研究表明,酵母菌和乳酸菌有協(xié)同共生作用,可以混合發(fā)酵[9-10],但目前相關(guān)文獻(xiàn)主要集中在單一菌株發(fā)酵技術(shù)方面[11-14],也有將酵母菌和乳酸菌進(jìn)行組合發(fā)酵食品的研究報(bào)道[15],鮮見酵母菌和乳酸菌同步混合發(fā)酵技術(shù)的相關(guān)報(bào)道。本項(xiàng)目組研制了一種高效微生態(tài)制劑EM12[7],該制劑由產(chǎn)朊假絲酵母(Candidautilis)和植物乳桿菌(Lactobacillusplantarum)組成,前期試驗(yàn)證明該制劑可提高魚蝦對飼料的消化吸收率,調(diào)節(jié)腸道微生物菌群[16]。本研究擬采用單因子試驗(yàn)和正交試驗(yàn)的方法,以提高菌劑的有效活菌濃度為目標(biāo),對EM12液體和固體混合發(fā)酵技術(shù)進(jìn)行了研究,并在室內(nèi)模擬條件下和田間魚蝦混養(yǎng)池塘中研究其水質(zhì)凈化效果,為菌劑的產(chǎn)業(yè)化開發(fā)提供理論依據(jù)和技術(shù)支撐。

    1 材料與方法

    1.1 材料

    1.1.1 試驗(yàn)菌種

    用于混合發(fā)酵的產(chǎn)朊假絲酵母(Candidautilis)和植物乳桿菌(Lactobacillusplantarum)菌種均為本室從水產(chǎn)養(yǎng)殖池底泥中分離保存。

    1.1.2 培養(yǎng)基

    產(chǎn)朊假絲酵母菌種培養(yǎng)用YPD培養(yǎng)基,植物乳桿菌菌種培養(yǎng)用MRS培養(yǎng)基。

    在本室優(yōu)化的乳酸菌培養(yǎng)基基礎(chǔ)上[17],設(shè)計(jì)了6種液體發(fā)酵培養(yǎng)基配方(表1),培養(yǎng)基正交試驗(yàn)各因子水平見表2。

    固體發(fā)酵培養(yǎng)基篩選共設(shè)了7個(gè)不同的培養(yǎng)基配方(g),1:麩皮60,玉米粉40,葡萄糖3.0,蛋白胨1.0,酵母膏1.0;2:麩皮100,葡萄糖2,尿素0.5,K2HPO40.8;3:麩皮60,玉米粉40,尿素0.8,K2HPO40.8;4:玉米粉100,葡萄糖20,氯化鈉8;5:豆粕40、麩皮40、玉米粉20、葡萄糖10;6:豆粕40,麩皮40,玉米粉20,葡萄糖2,K2HPO40.4;7:豆粕40,麩皮40,玉米粉20,葡萄糖2,檸檬酸氫二銨0.2,K2HPO40.4。

    表1 培養(yǎng)基成分篩選 單位:g/L

    表2 培養(yǎng)基優(yōu)化正交試驗(yàn)的各因素及水平 單位:g/L

    1.1.3 試驗(yàn)試劑和儀器

    本研究所用酵母膏、蛋白胨、葡萄糖為北京奧博星生產(chǎn),其他化學(xué)試劑由天津江天化工生產(chǎn)。

    CX31顯微鏡,日本奧林巴斯;MLS-3780高壓滅菌鍋,日本三洋;UV-2550紫外可見分光光度計(jì),日本島津;BioTech-3000 200 L二聯(lián)罐,上海保興;ZSD-1270培養(yǎng)箱和ZHWY-B2102C恒溫?fù)u床,上海智誠;SW-CJ-2F超凈工作臺,蘇州凈化;BSA2202S-CW電子天平,德國賽多利斯;Seven Easy pH計(jì),瑞士梅特勒-托利多。

    1.2 方法

    1.2.1 EM12液體發(fā)酵培養(yǎng)基優(yōu)化

    在250 mL玻璃瓶裝200 mL培養(yǎng)基,滅菌后接10 mL 菌種(V(酵母菌)∶V(乳酸菌)=1∶1),34 ℃靜置培養(yǎng),培養(yǎng)期間搖動(dòng)2次,1 d后取樣測定酵母菌和乳酸菌濃度,并測菌液pH值。酵母菌測定參照GB 4789.15—2016中方法,乳酸菌測定參照GB 4789.35—2016中方法,pH值測定采用pH計(jì)。

    1.2.2 液體發(fā)酵培養(yǎng)條件優(yōu)化

    采用單因子試驗(yàn)研究不同初始pH(設(shè)4.0、5.0、6.0、7.0、8.0)對EM12混合發(fā)酵的影響;發(fā)酵溫度為34 ℃時(shí),不同接種量1%、2%、3%、5%、7%、10%;接種量為3%時(shí),不同溫度20、25、30、35 ℃對EM12混合發(fā)酵的影響,方法同1.2.1。

    1.2.3 發(fā)酵罐放大試驗(yàn)

    采用200 L發(fā)酵罐進(jìn)行放大試驗(yàn),共設(shè)計(jì)4個(gè)處理,處理1:通氣8 h后停止通氣,通氣量1.5 m3/h;處理2:通氣4 h后停止通氣,通氣量1.5 m3/h;處理3:不通氣;處理4:僅接種植物乳桿菌,在24 h取樣測菌液pH、植物乳桿菌和產(chǎn)朊假絲酵母的濃度。發(fā)酵時(shí)裝液量150 L,拌轉(zhuǎn)速100 r/min,接種量3%,發(fā)酵溫度30 ℃,發(fā)酵周期24 h。

    1.2.4 固體發(fā)酵培養(yǎng)基成分篩選

    采用1 L耐高溫帶蓋的PP塑料瓶作為發(fā)酵容器,每瓶裝混合均勻的干物料(麩皮、玉米粉、豆粕)100 g蓋好蓋滅菌,另用250 mL三角瓶裝水100 mL,將麩皮、玉米粉、豆粕之外的成分根據(jù)不同配方按比例加入水中,滅菌冷卻至室溫,取20 mL菌種加入含水及部分營養(yǎng)成分的三角瓶中,搖勻接入PP瓶中,將蓋擰緊,30 ℃培養(yǎng)2 d,取10 g發(fā)酵后的樣品于90 mL 無菌水中25 ℃振蕩30 min后測pH、產(chǎn)朊假絲酵母和植物乳桿菌的有效活菌濃度。

    1.2.5 固體發(fā)酵培養(yǎng)條件優(yōu)化

    采用單因子試驗(yàn)測量不同發(fā)酵溫度(18、25、30、35 ℃,接種量5%,含水率50%)、不同含水率(30%、40%、50%、60%,接種量5%,25 ℃培養(yǎng))、不同接種量(1%、3%、5%、7%、10%,基質(zhì)含水率50%,25 ℃培養(yǎng))對EM12菌固體混合發(fā)酵的影響,操作方法同1.2.4。

    1.2.6 水質(zhì)凈化效果研究

    模擬污水:取外塘魚蝦混養(yǎng)池水,加入一定量的亞硝酸鈉,使水體中亞硝態(tài)氮的初始質(zhì)量濃度為45.0 mg/L。將3.5 L玻璃容器中裝3 L模擬污水,按1%的量分別加入液體菌劑和固體菌劑,以不添加菌劑的為對照,置于30 ℃培養(yǎng)箱中,分別于24、48、72 h取樣測水體中的亞硝態(tài)氮、氨氮和pH值。

    EM12在魚蝦混養(yǎng)池的應(yīng)用,養(yǎng)殖池面積50畝,使用量為每次每畝500 g固體菌劑,10 d使用1次,全池潑灑。2017年6月13日測定值為使用前初始值,6月14日開始使用,持續(xù)試驗(yàn)2個(gè)月到2017年8月14日,期間定期取樣取水測水體亞硝態(tài)氮、氨氮、pH值。

    1.3 統(tǒng)計(jì)分析

    本文所有指標(biāo)測定均進(jìn)行3次重復(fù)實(shí)驗(yàn),采用Excel 2013 軟件統(tǒng)計(jì)分析數(shù)據(jù),樣品之間的差異采用SPSS 19.0 軟件進(jìn)行單因素方差分析(ANOVA),顯著性分析通過Duncan進(jìn)行多重比較,正交試驗(yàn)采用正交設(shè)計(jì)助手Ⅱ進(jìn)行設(shè)計(jì)和分析。

    2 結(jié)果與分析

    2.1 液體發(fā)酵培養(yǎng)基篩選

    由表3可知,所試6種培養(yǎng)基的pH值均降低到3.2以下,其中處理6菌濃度最高,植物乳桿菌的有效活菌濃度達(dá)到5.07×109CFU/mL,顯著高于其他處理,產(chǎn)朊假絲酵母的有效活菌濃度也達(dá)到11.52×106CFU/mL,高于其他處理,pH值為3.10,說明處理6利于EM12混合菌生長。處理6相對處理4只增加MnSO4,但植物乳桿菌濃度為處理4的2.3倍,說明Mn2+對植物乳桿菌的生長有明顯的促進(jìn)作用,可能是因?yàn)镸n2+是葡萄糖激酶、醛縮酶、變位酶、磷酸烯醇化酶、丙酮酸激酶等主要酶的激活劑,這與王欣等的研究結(jié)果一致[18]。乳酸菌為EM12中的優(yōu)勢菌群,因此后續(xù)試驗(yàn)中選用植物乳桿菌活菌濃度高的6號培養(yǎng)基進(jìn)行進(jìn)一步優(yōu)化。

    表3 培養(yǎng)基成分篩選結(jié)果Table 3 The results of culture medium composition screening

    注:表中字母不同表示差異顯著(P<0.05),下表同。

    2.2 液體發(fā)酵培養(yǎng)基正交試驗(yàn)優(yōu)化

    正交分析結(jié)果表明(見表4),利于植物乳桿菌生長的組合為A1B2C1D3,即葡萄糖20.0 g/L、酵母膏8.0 g/L、乙酸鈉4.0 g/L、檸檬酸氫二銨3.0 g/L,從極差大小分析可知,各因子對植物乳桿菌生長影響的主次依次為:酵母膏>檸檬酸氫二銨>乙酸鈉>葡萄糖;利于產(chǎn)朊假絲酵母生長的組合為A1B2C2D2,即葡萄糖20.0 g/L、酵母膏8.0 g/L、乙酸鈉5.0 g/L、檸檬酸氫二銨2.0 g/L,從極差大小分析可知,各因子對產(chǎn)朊假絲酵母生長影響的主次依次為:葡萄糖>酵母膏>乙酸鈉>檸檬酸氫二銨。表5方差分析結(jié)果表明,酵母膏、檸檬酸氫二銨、乙酸鈉對植物乳桿菌生長有顯著影響;所試的培養(yǎng)基成分對產(chǎn)朊假絲酵母生長均無顯著影響。

    由于得到的2個(gè)組合均不在所設(shè)的9個(gè)處理當(dāng)中,對其進(jìn)行了驗(yàn)證試驗(yàn)。結(jié)果發(fā)現(xiàn),混合菌在組合A1B2C1D3培養(yǎng)基中發(fā)酵后,植物乳桿菌濃度達(dá)6.67×109CFU/mL,產(chǎn)朊假絲酵母濃度達(dá)1.67×107CFU/mL,pH為3.30;在組合A1B2C2D2培養(yǎng)基中發(fā)酵后,產(chǎn)朊假絲酵母濃度達(dá)2.42×107CFU/mL,植物乳桿菌濃度達(dá)5.01×109CFU/mL,發(fā)酵參數(shù)得到有效驗(yàn)證??紤]到EM12中乳酸菌為優(yōu)勢菌,在后續(xù)試驗(yàn)中選用A1B2C1D3組合配方。

    表4 乳酸菌和酵母菌的直觀分析結(jié)果Table 4 Intuitive analysis results of lactic acid bacteria and yeast

    注:L代表乳酸菌、Y代表酵母菌,K1、K2、K3分別為對應(yīng)列指標(biāo)的平均值,R為極差。

    表5 乳酸菌和酵母菌方差分析結(jié)果Table 5 Variance analysis results of lactic acid bacteria and yeast

    注:L代表乳酸菌、Y代表酵母菌,“*”表示差異顯著(P<0.05)。

    2.3 液體發(fā)酵培養(yǎng)條件優(yōu)化

    2.3.1 不同初始pH對EM12生長的影響

    培養(yǎng)環(huán)境的pH變化會影響細(xì)胞中各種酶的活性及細(xì)胞對基質(zhì)中營養(yǎng)物質(zhì)的利用速率,從而影響菌體細(xì)胞生長和產(chǎn)物的合成[19]。由圖1可知,pH值對發(fā)酵液活菌數(shù)有顯著影響(P<0.05),在所試的初始pH濃度范圍內(nèi),植物乳桿菌的有效活菌濃度呈先升后降的趨勢,在pH 6.0時(shí)植物乳桿菌的濃度顯著高于其他處理,有效活菌濃度達(dá)到了4.61×109CFU/mL。產(chǎn)朊假絲酵母的濃度整體均較低,這可能跟靜置培養(yǎng)有關(guān)。植物乳桿菌濃度高的處理,其產(chǎn)朊假絲酵母濃度相對較低,說明此2種菌雖然存在協(xié)同互補(bǔ)作用,可以混合發(fā)酵,但共同發(fā)酵時(shí)也存在一定的營養(yǎng)競爭。綜合分析,pH 6.0利于混合菌發(fā)酵,在將來的發(fā)酵中控制發(fā)酵液pH為6.0左右,利于菌體細(xì)胞生長。

    圖1 初始pH對EM12發(fā)酵的影響Fig.1 Effects of initial pH on EM12 fermentation注:圖中字母不同表示差異顯著(P<0.05),下圖同。

    2.3.2 不同接種量對EM12發(fā)酵的影響

    由表7可以看出,發(fā)酵液植物乳桿菌的有效活菌濃度隨接種量呈先升高后降低的趨勢,其中3%接種量顯著高于其他處理,接種量大于7%以后,菌液濃度顯著降低,可能是取樣點(diǎn)菌液已進(jìn)入了衰亡期,菌體細(xì)胞出現(xiàn)了自溶;發(fā)酵液產(chǎn)朊假絲酵母菌濃度為(1.05~5.25)×107CFU/mL,7%~10%接種量處理酵母菌的濃度顯著高于其他處理;菌液pH值在3.44~3.84,處理之間差異不顯著。

    表6 不同接種量對EM12菌發(fā)酵的影響Table 6 Effects of different inoculation amount on EM12 fermentation

    乳酸菌濃度高的處理,酵母菌的濃度則相對較低,與2.3.1中結(jié)果一致,說明此2種菌同時(shí)存在互補(bǔ)作用和營養(yǎng)競爭作用。

    2.3.3 不同溫度對EM12菌發(fā)酵的影響

    發(fā)酵溫度是影響菌體細(xì)胞生長繁殖的重要因素之一,溫度對菌株的生長代謝有調(diào)節(jié)作用。不同溫度進(jìn)行比較發(fā)現(xiàn)(圖2),混合菌中植物乳桿菌的有效活菌濃度隨溫度的升高呈先升后降的趨勢,25~30 ℃處理有效活菌濃度較高,35 ℃處理的有效活菌濃度又顯著降低。不同取樣點(diǎn)比較發(fā)現(xiàn),20 ℃處理,72 h達(dá)到活菌濃度最高;25 ℃發(fā)酵48 h有效活菌濃度最高,達(dá)5.13×109CFU/mL;而30 ℃只需發(fā)酵24 h,植物乳桿菌的有效活菌濃度就能達(dá)到5.30×109CFU/mL。從上述結(jié)果可知,在不同的溫度條件下發(fā)酵,菌株達(dá)到穩(wěn)定期的時(shí)間不一樣,其最終的有效活菌濃度也差異顯著,這可能是因?yàn)殡S著溫度的升高,酶反應(yīng)速率加快,菌株生長代謝加速,而溫度過高又會導(dǎo)致酶失活,從而使菌株提前進(jìn)入衰亡期,可見保持合適的發(fā)酵溫度才能保證酶的活性,從而利于菌株發(fā)酵[20]。

    圖2 不同溫度對植物乳酸菌生長的影響Fig.2 Effects of temperature on Lactobacillus plantarum

    產(chǎn)朊假絲酵母的有效活菌濃度總體較低(圖3),這跟酵母菌是好氧菌,與發(fā)酵過程中未通氣有關(guān)。

    圖3 不同溫度對EM12產(chǎn)朊假絲酵母菌生長的影響Fig.3 Effects of temperature on Candida utilis

    不同溫度比較發(fā)現(xiàn),在所試的溫度范圍內(nèi),酵母菌有效活菌濃度隨溫度的升高呈降低的趨勢,在20 ℃ 下酵母菌生長相對較好,發(fā)酵72 h,有效活菌濃度達(dá)到4.00×107CFU/mL。不同溫度不同取樣點(diǎn)的有效活菌濃度變化規(guī)律與植物乳桿菌一致,即20 ℃ 處理發(fā)酵72 h達(dá)到最高點(diǎn),25 ℃在48 h達(dá)到最高點(diǎn),而30~35 ℃處理,24 h就能達(dá)到最高點(diǎn)。由于EM12混合菌中植物乳桿菌是優(yōu)勢功能菌,綜合分析,EM12混合菌最適發(fā)酵溫度為30 ℃,在此溫度下發(fā)酵24 h植物乳桿菌的有效活菌濃度分為5.30×109CFU/mL。

    2.3.4 發(fā)酵罐放大試驗(yàn)

    由表7可知,不同的通氣時(shí)間對植物乳桿菌和產(chǎn)朊假絲酵母生長的影響都比較顯著,植物乳桿菌的濃度隨通氣時(shí)間延長而降低,產(chǎn)朊假絲酵母則相反,這可能跟產(chǎn)朊假絲酵母為好氧菌而植物乳桿菌為堿性厭氧菌有關(guān)。EM12混合發(fā)酵在不通氣的情況下,植物乳桿菌的有效活菌濃度可達(dá)6.70×109CFU/mL,為植物乳桿菌單獨(dú)發(fā)酵濃度4.40×109CFU/mL的1.5倍,這可能是產(chǎn)朊假絲酵母的存在,可以消耗發(fā)酵罐中的余氧,為植物乳桿菌的發(fā)酵提供厭氧環(huán)境,另外產(chǎn)朊假絲酵母的代謝產(chǎn)物可為植物乳桿菌生長提供營養(yǎng)因子[21]。這也說明,混合發(fā)酵可以提高發(fā)酵效率。

    表7 發(fā)酵罐放大試驗(yàn)結(jié)果Table 7 The results of fermentation tank amplification test

    2.4 EM12固體混合發(fā)酵

    2.4.1 培養(yǎng)基篩選

    豆粕和玉米粉為微生物固體發(fā)酵常用的碳氮源,但豆粕和玉米粉吸水后均容易結(jié)塊,通氣性差,不利于酵母菌生長,因此本試驗(yàn)多數(shù)的處理均添加了一定量的麩皮。不同配方進(jìn)行比較發(fā)現(xiàn)(表8),不同培養(yǎng)基對混合菌發(fā)酵影響較大,其中6號培養(yǎng)基(m(豆粕)∶m(麩皮)∶m(玉米粉)=2∶2∶1,每100 g物料中加葡萄糖2 g,K2HPO40.4 g)上植物乳桿菌濃度最高,濕培養(yǎng)基上活菌含量達(dá)到7.43×109CFU/g,顯著高于其他處理,產(chǎn)朊假絲酵母濃度也達(dá)到了6.25×107CFU/g濕培養(yǎng)基,因此,確定6號為后續(xù)試驗(yàn)發(fā)酵培養(yǎng)基。

    表8 不同配方發(fā)酵結(jié)果Table 8 The fermentation result of different cultures

    2.4.2 不同溫度對EM12混合發(fā)酵的影響

    發(fā)酵溫度是影響菌株固體發(fā)酵水平的重要因素之一,一方面隨著溫度升高細(xì)胞的蛋白質(zhì)活性和酶活性增強(qiáng),生化反應(yīng)加快,從而促進(jìn)細(xì)胞生長繁殖,但部分溫敏的酶和核酸會隨溫度升高而遭到破壞,從而抑制細(xì)胞生長。由表9可知,在料水比為1∶1,接種量10%時(shí)發(fā)酵,產(chǎn)朊假絲酵母在18、25 ℃生長較好,在18 ℃發(fā)酵72 h,每克濕培養(yǎng)基的菌體濃度達(dá)到了億級水平,這與液體發(fā)酵結(jié)果比較一致。植物乳桿菌在所試溫度范圍內(nèi),最高活菌濃度都達(dá)到每克濕培養(yǎng)基66億以上,其中25 ℃生長最好,48 h達(dá)到8.60×109CFU/g濕培養(yǎng)基,到72 h菌濃度有不同程度降低,說明發(fā)酵48 h即可停止發(fā)酵;48 h所有處理10倍稀釋液的pH值都降低到了4.91以下。綜合比較發(fā)現(xiàn),EM12固體發(fā)酵在25 ℃發(fā)酵效果較好。

    表9 不同溫度對EM12固體發(fā)酵的影響Table 9 Effects of temperature on EM12 solid fermentation

    2.4.3 物料含水率對EM12混合發(fā)酵的影響

    物料含水率是固體發(fā)酵能否成功的關(guān)鍵因素之一,含水率過高會導(dǎo)致多孔性和通透性降低,而含水率過低使基質(zhì)的膨脹性降低、水的張力增加,從而抑制微生物生長[22]。EM12置于25 ℃培養(yǎng)48 h,植物乳桿菌的含水率隨基質(zhì)的含水率升高呈現(xiàn)先升后降的趨勢(圖4),其中含水率為50%時(shí),植物乳桿菌的濃度顯著高于其他處理,達(dá)到1.36×1010CFU/g濕培養(yǎng)基;不同含水率基質(zhì)中酵母菌的濃度則整體呈現(xiàn)降低趨勢,但各處理之間菌體濃度差異不顯著,最低為1.0×108CFU/g濕培養(yǎng)基,最高的為30%含水率處理,達(dá)2.40×108CFU/g。這也說明基質(zhì)含水率越低,其通透性越強(qiáng),越利于酵母菌生長。由于EM12中乳酸菌為優(yōu)勢菌群,因此,混合菌發(fā)酵的含水率優(yōu)選50%。

    圖4 含水率對EM12固體發(fā)酵的影響Fig.4 Effects of moisture content on EM12 solid fermentation

    2.4.4 不同接種量對混合菌發(fā)酵的影響

    接種量也是固體發(fā)酵不可忽視的一個(gè)因子,接種量大可以使發(fā)酵快速啟動(dòng),但接種量過高又會導(dǎo)致菌體細(xì)胞吸收不到足夠的營養(yǎng)成分從而抑制生長,接種量過低會使發(fā)酵周期延長,從而增加染菌的風(fēng)險(xiǎn)。在本試驗(yàn)中,植物乳桿菌的有效活菌濃度隨接種量的增加呈現(xiàn)先升后降的趨勢(圖5)。

    圖5 不同接種量對EM12發(fā)酵的影響Fig.5 Effects of inoculation amount on EM12 solid fermentation

    其中7%接種量處理的乳酸菌濃度最高,達(dá)到1.64× 1010CFU/g濕培養(yǎng)基,顯著高于其他處理,所有處理植物乳桿菌的濃度超過1.00×1010CFU/g濕培養(yǎng)基;不同接種量處理酵母菌濃度比較接近,在(1.00~2.70) ×108CFU/g;處理組之間比較發(fā)現(xiàn),7%接種量混合菌的總體有效活菌數(shù)最高,乳酸菌濃度達(dá)1.64×1010CFU/g,酵母菌濃度達(dá)1.65×108CFU/g,且10-6稀釋液中未檢出雜菌。

    2.5 菌劑水質(zhì)凈化效果

    2.5.1 室內(nèi)模擬水體水質(zhì)凈化結(jié)果

    由圖6可知,EM12液體菌劑和固體菌劑對模擬水體中的亞硝態(tài)氮有顯著去除效果。其中液體菌劑處理24 h,對模擬廢水中45.0 mg/L亞硝態(tài)氮的去除率為79.1%,48 h去除率達(dá)到89.8%,去除速率達(dá)到0.84 [mg/(L·h)];固體菌劑處理24 h,亞硝態(tài)氮的去除率達(dá)到99.7%,去除速率達(dá)到1.87 [mg/(L·h)],液體菌劑和固體菌劑在去除亞硝態(tài)氮的同時(shí)不累積氨氮。此外,EM12顯著降低了水體的pH(圖7),72 h, 液體菌劑處理水體的pH值低于對照0.1~0.3單位,固體菌劑處理水體的pH值低于對照0.4~1.3單位。

    圖6 EM12對亞硝態(tài)氮去除效果Fig.6 The nitrite-N removal effect by EM12

    圖7 EM12對水體pH影響Fig.7 The effect on pH by EM12

    2.5.2 EM12在外塘中的使用效果

    6月13日測定值為使用前初始值,6月14日開始使用,試驗(yàn)持續(xù)2個(gè)月,到8月14日。從表10可知,EM12能高效去除水體中亞硝態(tài)氮、氨氮,去除率分別達(dá)90%、84%,到試驗(yàn)后期亞硝態(tài)氮和氨氮維持在一個(gè)較低的水平,對pH有明顯的降低作用,試驗(yàn)期間養(yǎng)殖池水質(zhì)清爽,魚蝦攝食活躍。室內(nèi)模擬試驗(yàn)和田間試驗(yàn)結(jié)果說明,EM12有較強(qiáng)的水質(zhì)凈化效果,可用于水產(chǎn)養(yǎng)殖水質(zhì)凈化。

    表10 EM12在養(yǎng)殖池中的使用效果Table 10 The application effect of EM12 on breeding pond

    3 結(jié)論

    混合發(fā)酵是在純種發(fā)酵基礎(chǔ)上發(fā)展起來的一種新型發(fā)酵技術(shù),目前的研究大多還是關(guān)于同屬不同種微生物進(jìn)行混合發(fā)酵[8,23]。本研究通過單因素試驗(yàn)和正交試驗(yàn)的方法對酵母菌和乳酸菌的混合發(fā)酵技術(shù)進(jìn)行了研究,確定了其最佳的發(fā)酵工藝。結(jié)果表明,EM12液體混合發(fā)酵在優(yōu)化的工藝條件下發(fā)酵,液體菌劑發(fā)酵24 h,植物乳桿菌的濃度達(dá)6.70×109CFU/mL, 為單菌發(fā)酵4.4×109CFU/mL的1.5倍,產(chǎn)阮假絲酵母菌的濃度達(dá)到了2.00×107CFU/mL;固體菌劑發(fā)酵48 h,乳酸菌的濃度達(dá)到1.64×1010CFU/g 濕培養(yǎng)基,酵母菌濃度達(dá)1.65×108CFU/g濕培養(yǎng)基,且主要成分為農(nóng)副產(chǎn)品下腳料。本研究中混合發(fā)酵植物乳桿菌的濃度高于植物乳桿菌單一發(fā)酵,與劉喬等研究混合發(fā)酵活菌濃度低于單菌發(fā)酵的結(jié)果不一致,可能是酵母菌生長代謝產(chǎn)生的丙酮酸、維生素、氨基酸等物質(zhì)促進(jìn)了乳酸菌生長代謝[21]。但在液體混合發(fā)酵試驗(yàn)中,乳酸菌濃度高的處理其酵母菌的含量相對較低,這說明此2種菌也存在一定的營養(yǎng)競爭作用,至于在什么情況下能使其協(xié)同共生作用最大發(fā)揮,什么情況下使其營養(yǎng)競爭作用降到最低,這有待進(jìn)一步試驗(yàn)研究。

    本研究對混合菌劑的水質(zhì)凈化效果進(jìn)行了評價(jià),結(jié)果發(fā)現(xiàn),固體菌劑處理24 h能將模擬水體中45.0 mg/L的亞硝態(tài)氮徹底去除,液體菌劑處理48 h亞硝態(tài)氮去除率達(dá)89.8%,且不累積氨氮。前期試驗(yàn)中發(fā)現(xiàn)植物乳桿菌單株菌72 h能將11.5 mg/L亞硝態(tài)氮徹底去除,優(yōu)于已有報(bào)道的乳酸菌[17]。說明混合菌劑對亞硝態(tài)氮的去除效果優(yōu)于單一菌劑,具體是因?yàn)榫w細(xì)胞濃度提高了還是酵母菌也在其中發(fā)揮了積極作用,需要進(jìn)一步的試驗(yàn)研究。另外,外塘試驗(yàn)也表明,EM12對水體中亞硝態(tài)氮、氨氮均有較好的去除效果,可用于養(yǎng)殖水體水質(zhì)凈化。

    綜上可見,EM12混合發(fā)酵,不僅提高了發(fā)酵效率,同時(shí)提高了菌劑的有效活菌濃度,保證了菌劑質(zhì)量,且菌劑的水質(zhì)凈化能力也得到了提升,為EM12的規(guī)?;a(chǎn)和應(yīng)用提供了理論依據(jù)和技術(shù)指導(dǎo)。

    猜你喜歡
    酵母菌植物
    酵母菌知多少
    米卡芬凈對光滑假絲酵母菌在巨噬細(xì)胞內(nèi)活性的影響
    為什么酵母菌既能做面包也能釀酒?
    植物的防身術(shù)
    把植物做成藥
    哦,不怕,不怕
    將植物穿身上
    植物罷工啦?
    植物也瘋狂
    讓面包變“胖”的酵母菌
    国产精品一区二区在线不卡| 成年动漫av网址| 捣出白浆h1v1| 婷婷色综合大香蕉| 我的亚洲天堂| 丰满饥渴人妻一区二区三| 日韩视频在线欧美| 女性生殖器流出的白浆| 亚洲av成人精品一二三区| 久久久久久久精品精品| 三上悠亚av全集在线观看| 久久久精品免费免费高清| 国产有黄有色有爽视频| 七月丁香在线播放| 不卡av一区二区三区| 91成人精品电影| 色94色欧美一区二区| 日本色播在线视频| 黄色怎么调成土黄色| 97精品久久久久久久久久精品| 日韩电影二区| 纵有疾风起免费观看全集完整版| 国产亚洲欧美精品永久| 欧美日韩精品网址| 少妇的逼水好多| 高清黄色对白视频在线免费看| 亚洲欧美成人综合另类久久久| 啦啦啦在线免费观看视频4| 久久久久久免费高清国产稀缺| 日韩在线高清观看一区二区三区| 亚洲激情五月婷婷啪啪| 亚洲情色 制服丝袜| 少妇人妻精品综合一区二区| 久久av网站| 国产黄色免费在线视频| 色视频在线一区二区三区| 九色亚洲精品在线播放| 国产日韩欧美在线精品| 男女啪啪激烈高潮av片| 国产精品女同一区二区软件| 欧美国产精品va在线观看不卡| 亚洲成人一二三区av| 亚洲欧美精品综合一区二区三区 | 2021少妇久久久久久久久久久| 青春草国产在线视频| 一级爰片在线观看| 美女高潮到喷水免费观看| av有码第一页| 精品国产乱码久久久久久男人| 国产免费福利视频在线观看| 日韩中字成人| 黄色怎么调成土黄色| 亚洲欧美一区二区三区国产| 老汉色∧v一级毛片| 女人被躁到高潮嗷嗷叫费观| 午夜免费观看性视频| 人人妻人人澡人人爽人人夜夜| 久久99精品国语久久久| 欧美中文综合在线视频| 精品国产国语对白av| 老司机亚洲免费影院| 妹子高潮喷水视频| 欧美av亚洲av综合av国产av | 成年动漫av网址| 国产一区二区三区综合在线观看| 男女边摸边吃奶| 成人手机av| 婷婷色综合大香蕉| 国产极品粉嫩免费观看在线| 久久久久视频综合| 制服人妻中文乱码| 亚洲婷婷狠狠爱综合网| 国产老妇伦熟女老妇高清| 国产 精品1| 美女视频免费永久观看网站| 涩涩av久久男人的天堂| 久久久久久久久久久免费av| 又大又黄又爽视频免费| 黄色怎么调成土黄色| 亚洲五月色婷婷综合| 一区二区日韩欧美中文字幕| 黑丝袜美女国产一区| 婷婷色综合大香蕉| 97在线视频观看| 一级毛片我不卡| 丝袜喷水一区| 18在线观看网站| 青春草亚洲视频在线观看| 一区二区三区激情视频| 亚洲成人av在线免费| 七月丁香在线播放| 欧美黄色片欧美黄色片| 亚洲天堂av无毛| 日日爽夜夜爽网站| 97在线人人人人妻| 欧美日韩一区二区视频在线观看视频在线| 日韩伦理黄色片| 观看美女的网站| 三上悠亚av全集在线观看| 国产男女超爽视频在线观看| 欧美少妇被猛烈插入视频| 欧美成人午夜精品| 久久久久久久久久久免费av| 高清av免费在线| 国产成人aa在线观看| 欧美激情 高清一区二区三区| 国产精品无大码| 国产免费视频播放在线视频| 精品亚洲成国产av| 最近最新中文字幕大全免费视频 | av免费在线看不卡| 狂野欧美激情性bbbbbb| 伦理电影大哥的女人| 波多野结衣一区麻豆| av又黄又爽大尺度在线免费看| 国产精品久久久久久精品电影小说| 国产精品麻豆人妻色哟哟久久| 国产成人精品久久久久久| www.精华液| 亚洲精品成人av观看孕妇| 亚洲成av片中文字幕在线观看 | 天堂俺去俺来也www色官网| 在线天堂中文资源库| 免费观看a级毛片全部| 男男h啪啪无遮挡| 乱人伦中国视频| 精品国产一区二区三区久久久樱花| xxx大片免费视频| 在现免费观看毛片| 亚洲精品国产av蜜桃| 亚洲成av片中文字幕在线观看 | 啦啦啦啦在线视频资源| 日本免费在线观看一区| 黄片播放在线免费| 精品亚洲成a人片在线观看| 亚洲一码二码三码区别大吗| 啦啦啦在线免费观看视频4| videos熟女内射| 边亲边吃奶的免费视频| 久久精品久久精品一区二区三区| 91成人精品电影| 久久久久久久久久久久大奶| 黄色毛片三级朝国网站| 久久久精品免费免费高清| 国产 一区精品| 色播在线永久视频| 国产av一区二区精品久久| 两性夫妻黄色片| 91精品伊人久久大香线蕉| av在线老鸭窝| 欧美人与性动交α欧美精品济南到 | 亚洲国产欧美网| 午夜影院在线不卡| 男女下面插进去视频免费观看| 欧美精品av麻豆av| 女人高潮潮喷娇喘18禁视频| 在线观看免费日韩欧美大片| 精品少妇内射三级| 国产又色又爽无遮挡免| 日韩中字成人| 亚洲欧美精品综合一区二区三区 | 成人影院久久| 日韩制服丝袜自拍偷拍| 天天操日日干夜夜撸| 亚洲国产精品一区三区| 丝袜喷水一区| 日本午夜av视频| 人妻人人澡人人爽人人| 伦精品一区二区三区| 日韩一卡2卡3卡4卡2021年| 国产片特级美女逼逼视频| 国产精品二区激情视频| xxx大片免费视频| 精品国产超薄肉色丝袜足j| 免费大片黄手机在线观看| 成年女人毛片免费观看观看9 | 青春草亚洲视频在线观看| 丝瓜视频免费看黄片| 在线看a的网站| 美女xxoo啪啪120秒动态图| 亚洲美女搞黄在线观看| 老鸭窝网址在线观看| 精品少妇久久久久久888优播| 国产日韩欧美亚洲二区| 免费人妻精品一区二区三区视频| 亚洲av免费高清在线观看| 尾随美女入室| 777米奇影视久久| 热re99久久精品国产66热6| 成人亚洲欧美一区二区av| 国产精品三级大全| 老女人水多毛片| 亚洲av中文av极速乱| 亚洲精品av麻豆狂野| 国产免费又黄又爽又色| 少妇被粗大猛烈的视频| 一级黄片播放器| 午夜福利在线免费观看网站| 黄片播放在线免费| 午夜免费观看性视频| 日韩精品有码人妻一区| 亚洲三区欧美一区| 成人毛片60女人毛片免费| xxxhd国产人妻xxx| 少妇被粗大的猛进出69影院| 成年女人毛片免费观看观看9 | 国产免费视频播放在线视频| a级片在线免费高清观看视频| 国产国语露脸激情在线看| 亚洲国产色片| 久久久国产精品麻豆| 国产精品免费大片| 亚洲美女搞黄在线观看| 91aial.com中文字幕在线观看| 最近手机中文字幕大全| 看十八女毛片水多多多| √禁漫天堂资源中文www| 久久久久久久大尺度免费视频| 欧美xxⅹ黑人| 久久97久久精品| 亚洲少妇的诱惑av| 午夜福利在线观看免费完整高清在| 免费黄频网站在线观看国产| 另类亚洲欧美激情| 亚洲av日韩在线播放| 国产一区亚洲一区在线观看| 啦啦啦在线免费观看视频4| 极品少妇高潮喷水抽搐| 精品人妻熟女毛片av久久网站| 99国产综合亚洲精品| 亚洲精品乱久久久久久| 观看美女的网站| 成年人午夜在线观看视频| 男女无遮挡免费网站观看| 国产精品国产三级专区第一集| 国产免费一区二区三区四区乱码| 国产在线视频一区二区| 亚洲国产精品一区三区| 日韩视频在线欧美| av免费在线看不卡| 伊人久久大香线蕉亚洲五| 麻豆av在线久日| 国语对白做爰xxxⅹ性视频网站| 宅男免费午夜| 国产成人精品婷婷| 丝瓜视频免费看黄片| 欧美亚洲 丝袜 人妻 在线| 欧美日韩国产mv在线观看视频| 熟女av电影| 亚洲综合色网址| 亚洲精品国产av蜜桃| 婷婷色麻豆天堂久久| 一本久久精品| 免费高清在线观看日韩| 亚洲,一卡二卡三卡| 成人午夜精彩视频在线观看| 可以免费在线观看a视频的电影网站 | 国产 精品1| 欧美日韩综合久久久久久| 青青草视频在线视频观看| 久久狼人影院| 精品午夜福利在线看| 18禁观看日本| 国产精品一国产av| 人妻系列 视频| 午夜福利在线观看免费完整高清在| 日日摸夜夜添夜夜爱| 国产成人午夜福利电影在线观看| 亚洲欧洲日产国产| 青春草视频在线免费观看| 亚洲欧洲国产日韩| 纯流量卡能插随身wifi吗| 男的添女的下面高潮视频| 9色porny在线观看| 伊人久久大香线蕉亚洲五| 久久国产精品男人的天堂亚洲| 久久久a久久爽久久v久久| 国产欧美亚洲国产| 国产极品粉嫩免费观看在线| 成人漫画全彩无遮挡| 少妇熟女欧美另类| 欧美+日韩+精品| 两性夫妻黄色片| 好男人视频免费观看在线| 国产精品久久久av美女十八| 亚洲精品自拍成人| 国产1区2区3区精品| 十八禁高潮呻吟视频| 午夜福利网站1000一区二区三区| 国产97色在线日韩免费| 国语对白做爰xxxⅹ性视频网站| 新久久久久国产一级毛片| 午夜福利在线观看免费完整高清在| 国产精品欧美亚洲77777| 国产精品国产三级国产专区5o| 久久毛片免费看一区二区三区| 久久久久久久久久久久大奶| 多毛熟女@视频| 男人爽女人下面视频在线观看| 在线观看免费视频网站a站| 亚洲av国产av综合av卡| 亚洲情色 制服丝袜| 天堂俺去俺来也www色官网| 国产免费现黄频在线看| 亚洲欧洲精品一区二区精品久久久 | 亚洲综合精品二区| 成人亚洲精品一区在线观看| 日日爽夜夜爽网站| 五月开心婷婷网| 人人妻人人添人人爽欧美一区卜| 在线观看免费视频网站a站| 久久久久视频综合| 国产成人精品一,二区| 久久这里只有精品19| 久久久久久久大尺度免费视频| 国产精品成人在线| 国产精品一二三区在线看| 麻豆av在线久日| 黄色视频在线播放观看不卡| 国产女主播在线喷水免费视频网站| 天天躁日日躁夜夜躁夜夜| 国产欧美亚洲国产| 亚洲 欧美一区二区三区| 国产精品二区激情视频| 亚洲精品久久午夜乱码| 国产一区二区三区综合在线观看| 一区二区三区四区激情视频| 国产一区二区三区综合在线观看| 亚洲色图综合在线观看| 成年人免费黄色播放视频| 成人18禁高潮啪啪吃奶动态图| 日韩一区二区视频免费看| 777米奇影视久久| 波多野结衣av一区二区av| 精品一区二区三区四区五区乱码 | 精品卡一卡二卡四卡免费| 国产精品国产av在线观看| 精品国产乱码久久久久久小说| 曰老女人黄片| 少妇被粗大的猛进出69影院| 日韩制服骚丝袜av| 亚洲av在线观看美女高潮| 免费播放大片免费观看视频在线观看| 日韩制服丝袜自拍偷拍| 亚洲综合色惰| 亚洲国产毛片av蜜桃av| 成年女人毛片免费观看观看9 | 色婷婷久久久亚洲欧美| 1024香蕉在线观看| 亚洲综合色惰| 国产无遮挡羞羞视频在线观看| 国产熟女欧美一区二区| 制服人妻中文乱码| 男女午夜视频在线观看| 成人黄色视频免费在线看| 亚洲国产色片| 亚洲人成77777在线视频| 欧美少妇被猛烈插入视频| 欧美亚洲日本最大视频资源| 亚洲精品久久成人aⅴ小说| 超色免费av| 国产精品一区二区在线不卡| 国产精品久久久久成人av| 国产淫语在线视频| 婷婷色麻豆天堂久久| 99九九在线精品视频| 亚洲三级黄色毛片| 丝袜人妻中文字幕| 欧美少妇被猛烈插入视频| videos熟女内射| 亚洲熟女精品中文字幕| 天天躁日日躁夜夜躁夜夜| 1024香蕉在线观看| 日日撸夜夜添| a 毛片基地| 黄色配什么色好看| 一边摸一边做爽爽视频免费| 久久久久久久久久人人人人人人| 人人妻人人澡人人看| 黄片无遮挡物在线观看| 亚洲成人手机| 亚洲精品久久成人aⅴ小说| 久久99蜜桃精品久久| av电影中文网址| 亚洲精品美女久久久久99蜜臀 | 久久精品熟女亚洲av麻豆精品| 99热国产这里只有精品6| 亚洲欧美精品综合一区二区三区 | 日韩三级伦理在线观看| 免费看av在线观看网站| 永久免费av网站大全| 好男人视频免费观看在线| 国产伦理片在线播放av一区| 爱豆传媒免费全集在线观看| 国产精品久久久久久久久免| 电影成人av| 王馨瑶露胸无遮挡在线观看| 中文字幕人妻丝袜一区二区 | 在线观看美女被高潮喷水网站| 一区福利在线观看| 成人漫画全彩无遮挡| 精品少妇黑人巨大在线播放| 一二三四中文在线观看免费高清| 大陆偷拍与自拍| 2021少妇久久久久久久久久久| 男女下面插进去视频免费观看| 国产成人aa在线观看| 丝袜人妻中文字幕| 女人被躁到高潮嗷嗷叫费观| 日日撸夜夜添| 久久婷婷青草| 黄片播放在线免费| 国产免费现黄频在线看| 亚洲四区av| 美女大奶头黄色视频| 在线免费观看不下载黄p国产| 最新的欧美精品一区二区| 天堂俺去俺来也www色官网| 波多野结衣一区麻豆| 自线自在国产av| 桃花免费在线播放| 秋霞伦理黄片| 人人妻人人添人人爽欧美一区卜| 色94色欧美一区二区| 国产在视频线精品| 国产精品 国内视频| 麻豆精品久久久久久蜜桃| av免费观看日本| 亚洲图色成人| 国产男人的电影天堂91| 国产又色又爽无遮挡免| 亚洲,一卡二卡三卡| 久久久久久久久久人人人人人人| 男人爽女人下面视频在线观看| 麻豆av在线久日| 亚洲精品中文字幕在线视频| 久久久精品国产亚洲av高清涩受| 日韩视频在线欧美| 9色porny在线观看| 90打野战视频偷拍视频| 亚洲av免费高清在线观看| 男女边摸边吃奶| 欧美亚洲日本最大视频资源| 国产成人免费观看mmmm| 成人午夜精彩视频在线观看| 最近中文字幕高清免费大全6| 日韩熟女老妇一区二区性免费视频| 午夜福利影视在线免费观看| 日韩av不卡免费在线播放| 韩国高清视频一区二区三区| 精品一区二区三区四区五区乱码 | 国产精品久久久久久精品电影小说| 丝袜人妻中文字幕| 免费黄网站久久成人精品| 精品一区二区三区四区五区乱码 | 亚洲国产看品久久| 大码成人一级视频| 久久av网站| 国产成人a∨麻豆精品| 亚洲第一区二区三区不卡| 国产精品久久久久久精品电影小说| 欧美日韩成人在线一区二区| 久久久久久久国产电影| 亚洲av福利一区| 亚洲精品一二三| 91在线精品国自产拍蜜月| 国产男女超爽视频在线观看| 欧美精品亚洲一区二区| 中文字幕人妻熟女乱码| 欧美精品高潮呻吟av久久| 国产精品免费大片| 亚洲成av片中文字幕在线观看 | 蜜桃在线观看..| 久久97久久精品| 香蕉丝袜av| 97人妻天天添夜夜摸| 欧美亚洲 丝袜 人妻 在线| 侵犯人妻中文字幕一二三四区| 看十八女毛片水多多多| 精品人妻偷拍中文字幕| 一级毛片我不卡| 精品少妇黑人巨大在线播放| 熟女少妇亚洲综合色aaa.| 国产深夜福利视频在线观看| 成人手机av| 国产乱来视频区| 成人亚洲精品一区在线观看| 久久综合国产亚洲精品| 久久精品aⅴ一区二区三区四区 | 少妇猛男粗大的猛烈进出视频| 国产av码专区亚洲av| a级毛片黄视频| 中文欧美无线码| 久久精品国产鲁丝片午夜精品| 可以免费在线观看a视频的电影网站 | 天天躁狠狠躁夜夜躁狠狠躁| 男女国产视频网站| 亚洲精品美女久久av网站| 国语对白做爰xxxⅹ性视频网站| 男女啪啪激烈高潮av片| 韩国精品一区二区三区| 国产精品 欧美亚洲| 精品酒店卫生间| 热99国产精品久久久久久7| 免费人妻精品一区二区三区视频| 国产深夜福利视频在线观看| 欧美少妇被猛烈插入视频| 欧美激情 高清一区二区三区| 毛片一级片免费看久久久久| 边亲边吃奶的免费视频| 亚洲精品中文字幕在线视频| 国产精品人妻久久久影院| 午夜福利,免费看| 性色avwww在线观看| 久久久亚洲精品成人影院| 天天躁夜夜躁狠狠躁躁| 久久久久国产一级毛片高清牌| 一本一本久久a久久精品综合妖精 国产伦在线观看视频一区 | 秋霞伦理黄片| 亚洲,一卡二卡三卡| 精品国产乱码久久久久久男人| 国产乱来视频区| 日日撸夜夜添| 免费在线观看完整版高清| 人妻人人澡人人爽人人| 久久精品亚洲av国产电影网| 午夜福利视频在线观看免费| 人人澡人人妻人| 狠狠婷婷综合久久久久久88av| 青春草国产在线视频| 极品人妻少妇av视频| 国产又色又爽无遮挡免| 天天躁日日躁夜夜躁夜夜| 欧美日韩成人在线一区二区| 免费黄频网站在线观看国产| 亚洲国产精品一区三区| 香蕉丝袜av| 亚洲精品在线美女| 久久久精品国产亚洲av高清涩受| 久久久欧美国产精品| 热re99久久国产66热| 欧美精品人与动牲交sv欧美| 久久久久久久大尺度免费视频| 久久久久国产一级毛片高清牌| 亚洲精品美女久久久久99蜜臀 | 王馨瑶露胸无遮挡在线观看| 成人毛片a级毛片在线播放| 青春草国产在线视频| 18禁裸乳无遮挡动漫免费视频| 国产精品二区激情视频| 女性被躁到高潮视频| 看非洲黑人一级黄片| 一区二区日韩欧美中文字幕| 王馨瑶露胸无遮挡在线观看| 欧美亚洲 丝袜 人妻 在线| 丝袜喷水一区| 久久午夜福利片| 亚洲激情五月婷婷啪啪| 新久久久久国产一级毛片| 久久综合国产亚洲精品| 免费女性裸体啪啪无遮挡网站| 国产亚洲一区二区精品| 亚洲国产欧美在线一区| 黄色一级大片看看| 免费黄色在线免费观看| 中国三级夫妇交换| 亚洲在久久综合| av女优亚洲男人天堂| 久久久精品国产亚洲av高清涩受| 宅男免费午夜| 在现免费观看毛片| 一区在线观看完整版| 新久久久久国产一级毛片| 在线观看美女被高潮喷水网站| 亚洲一码二码三码区别大吗| 熟妇人妻不卡中文字幕| 国产精品一区二区在线不卡| 成年美女黄网站色视频大全免费| 国产精品蜜桃在线观看| 激情五月婷婷亚洲| 丝袜美腿诱惑在线| 香蕉精品网在线| 欧美国产精品一级二级三级| 丝袜美腿诱惑在线| 如何舔出高潮| 男女国产视频网站| 狠狠婷婷综合久久久久久88av| 晚上一个人看的免费电影| 黑人猛操日本美女一级片| 欧美日韩综合久久久久久| 国产精品久久久久久精品古装| 欧美精品国产亚洲| 国产精品一区二区在线观看99| 久久久精品区二区三区| 最近最新中文字幕免费大全7| 国产在线视频一区二区| 一级a爱视频在线免费观看| 亚洲一级一片aⅴ在线观看| 国产欧美亚洲国产| 99热全是精品| av又黄又爽大尺度在线免费看| 看十八女毛片水多多多| 激情视频va一区二区三区| 国产男女内射视频| 免费高清在线观看日韩| 999精品在线视频| 欧美少妇被猛烈插入视频| 狠狠婷婷综合久久久久久88av| 久久久久久久国产电影| 亚洲av电影在线观看一区二区三区| 久久99一区二区三区| 亚洲av在线观看美女高潮| 日本av手机在线免费观看| 男女边摸边吃奶| 国产日韩欧美在线精品|