3種方法聯(lián)合檢測在老年梅毒診斷中的應(yīng)用價值

趙彩亮

【摘 要】：目的：研究3種方法聯(lián)合檢測在老年梅毒診斷中的應(yīng)用價值。方法：本次研究選取的研究對象為2015年1月1日至2017年12月31日期間在我院進行治療的老年梅毒患者100例，所有患者均接受梅毒螺旋體酶聯(lián)免疫吸附試驗（TP-ELISA）、梅毒螺旋體明膠凝集法（TPPA）、甲苯胺紅不加熱血清試驗 （TRUST） 。對比三種檢查方法的診斷結(jié)果。結(jié)果：聯(lián)合檢測的梅毒陽性率高于TP-ELISA、TPPA、TRUST單一檢測數(shù)據(jù)，差異具有統(tǒng)計學意義（P<0.05）。結(jié)論：3種方法聯(lián)合檢測可提高老年梅毒患者的診斷準確性，臨床應(yīng)用價值較高。

【關(guān)鍵詞】：梅毒；梅毒螺旋體明膠凝集法；甲苯胺紅不加熱血清試驗；梅毒螺旋體酶聯(lián)免疫吸附試驗

【中圖分類號】R759.1 【文獻標識碼】B 【文章編號】1005-0019（2019）05--01

梅毒是一種由梅毒螺旋體感染引起的系統(tǒng)性傳染病，一般經(jīng)性接觸、血液兩種途徑傳播。梅毒患者的臨床表現(xiàn)存在復雜性，誤診、漏診率較高。早期診斷梅毒可避免患者的系統(tǒng)和器官出現(xiàn)不可逆損傷，目前臨床用于檢測梅毒的血清學方法較多，如快速血漿反應(yīng)素環(huán)狀卡片試驗（RPR）、TP-ELISA、TRUST、TPPA、膠體金法 （TPAb）等，本文旨在分析三種血清學方法聯(lián)合應(yīng)用在梅毒診斷中的效果，擇取我院收治的老年梅毒患者100例開展本次研究，正文詳細內(nèi)容如下：

1 資料和方法

1.1 資料

研究對象：我院收治的老年梅毒患者100例（屬于2015年1月1日至2017年12月31日期間）。納入標準：所有患者均經(jīng)臨床確診為梅毒，并同WS273-2007 中國衛(wèi)生行業(yè)標準梅毒診斷標準相符合。排除標準：患有精神疾病的患者；患有系統(tǒng)性免疫疾病、HIV陽性的患者；合并嚴重器質(zhì)性疾病或?qū)η嗝顾孛舾械幕颊?。男、女性患者的比例分別為55例、45例；年齡范圍：60-89歲，年齡平均值（77.85±2.91）歲。病程為4周-5年，平均時間為（2.45±0.28）年。

1.2 方法

TP-ELISA檢測方法：抗原為經(jīng)純化處理的梅毒螺旋體的重組蛋白，使用對固相板條進行包被處理。對抗人體免疫球蛋白G抗體進行梅毒血清及辣根過氧化物酶標記處理，使用TP-ELISA相關(guān)試劑盒測定血清特異性梅毒抗體數(shù)量，嚴格按照試劑盒說明書進行操作。

先采用西門子xp化學發(fā)光免疫分析儀對梅毒血清進行檢測，結(jié)果為陽性，則采用TPPA檢測進行驗證：使用微量滴管將血清稀釋液滴入微量反應(yīng)板第1孔中，共計4滴（100μl），第2孔至第4孔均滴一滴（25μl）。使用微量移液管取樣品25μl滴入到第1孔中，再使用微量加樣器或微量移液管以2n的方式從第1孔稀釋到第4孔。使用試劑盒中提供的滴管在第3孔中滴入1滴（25μl）未致敏粒子，在第4孔中加入1滴（25μl）未致敏粒子。使用平板混合器以適當?shù)膹姸冗M行混合，時間為30s，加蓋后在室溫（15℃-30℃）下水平放置2h。在觀察鏡上觀察和記錄其反應(yīng)圖像，利用免疫稀釋判定裝置進行測定。對照試驗：可對每例樣品未致敏粒子的反應(yīng)進行確認則為（-）；可確認每次檢查中血清稀釋液和致敏粒子以及未致敏粒子的反應(yīng)則為（-）（介質(zhì)對照）。陽性對照血清調(diào)制成抗體效價為1：320。

TRUST檢測方法：①編號：將樣品對應(yīng)試驗卡按需編號。②加樣：分別在相應(yīng)的試驗卡膝圈內(nèi)加入待測樣品或陰、陽性對照50μl，并在圈中均勻涂開。③加抗原：使用專用塑料滴管吸取抗原，分別垂直滴加一滴（20μl）于圈內(nèi)血清中。④反應(yīng)：在23-29℃的條件下，按每分鐘100轉(zhuǎn)搖動卡片8min，對應(yīng)下方標準圖觀察結(jié)果。⑤如需進行效價測定，可將待測血清使用生理鹽水做倍比系列稀釋（1：2、1：4、1：8、1：16……1：2n），按照上述定性方法進行試驗。

TPPA檢測、TRUST檢測結(jié)果均為陽性后，進行滴度試驗。TRUST滴度：以呈現(xiàn)明顯凝聚反應(yīng)的最高稀釋度作為該標本的凝集效價。

1.3 觀察指標

計算三種方法的梅毒檢測陽性率。

1.4 統(tǒng)計學處理

將兩組各項觀察指標數(shù)據(jù)錄入統(tǒng)計學軟件SPSS21.0中進行處理，用[n（%）]的形式表示計數(shù)資料，卡方檢驗，差異具有統(tǒng)計學意義的標準為P<0.05。

2 結(jié)果

TP-ELISA、TPPA對比梅毒檢測陽性率差異不大（P>0.05），但均比TRUST檢測數(shù)據(jù)高（P<0.05），聯(lián)合檢測的梅毒陽性率均比單一檢測數(shù)據(jù)高（P<0.05）。

3 討論

患者在感染梅毒螺旋體后，機體會產(chǎn)生特異性抗體[1]，其中IgM在機體短期存在，IgG則存在時間長（可終生存在）。臨床將IgM作為梅毒早期感染的標志物。在感染2-4周便可檢出IgM。

TP-ELISA法是通過雙抗原夾心法對特異性TP抗體進行檢測，同時還可檢測到IgM、IgG抗體，可檢出梅毒各期。且基因重組后的TP47抗原包被結(jié)合特異性TP抗體可促使梅毒檢測的靈敏度提高[2]。TPPA法將TP毒株制備成抗原，與致敏粒子結(jié)合成凝集狀顆粒對血清梅毒螺旋體抗體進行檢測，還可對抗體效價進行測定，生物因素不會對檢測結(jié)果產(chǎn)生影響[3]，雖然TPPA法的診斷效能比TP-ELISA法更高，但是在臨床操作時，技術(shù)難度大且檢測時間長，易出現(xiàn)誤差，而TP-ELISA法利用酶的放大系統(tǒng)有助于檢測靈敏度的提高，檢測出梅毒螺旋體抗體的時間早于TPPA法。TRUST法的梅毒檢測靈敏度、特異性均不如上述兩種方法，且梅毒感染早期，患者機體產(chǎn)生的反應(yīng)素未達到TRUST的檢測限，故此容易出現(xiàn)漏診情況及假陰性結(jié)果。而本次通過聯(lián)合三種血清學檢測方法提高了梅毒檢測陽性率，減少了誤診、漏診情況的發(fā)生。

總而言之，TP-ELISA法聯(lián)合TPPA法、TRUST法對老年梅毒患者進行檢測具有較高的梅毒檢出率，便于臨床及時診治患者。

參考文獻

朱建奎.RPR、TRUST、TPPA、ELISA、TPAb五項聯(lián)合在檢測梅毒早期患者中的臨床應(yīng)用[J].中國實用醫(yī)藥，2016，11（15）：100-101.

王春陽，鄒學森.梅毒特異性與梅毒非特異性聯(lián)合檢測對臨床的指導意義[J].吉林醫(yī)學，2016，37（6）：1400-1401.

韓紅星，李小勇，李冉冉，等.TRUST和TPPA聯(lián)合檢測梅毒的臨床應(yīng)用價值[J].海南醫(yī)學，2017，28（12）：2044-2045.

葉霞，徐清芳，魏靖，等.TP-ELISA、TPPA、RPR聯(lián)合檢測在梅毒診斷中的應(yīng)用價值[J].熱帶醫(yī)學雜志，2017，17（5）：639-642.