不同血液檢測模式下核酸檢測試劑有效利用率結果分析

(開封市中心血站，河南 開封 475004)

血液以及血液相關的生物制品不但可以治病救人，也可以作為許多傳染病的載體，如人類免疫缺陷病毒(HIV)、丙型肝炎病毒(HCV)、乙型肝炎病毒(HBV)等均可引起傳染病的流行，給個人、家庭以及社會帶來極大危害，因此血液以及血液相關的生物制品的安全性備受關注[1]。核酸檢測技術(NAT)的引入，可直接檢測病毒，從而彌補了病毒血清學檢測的不足，并且降低了輸血后感染的風險[2]。某血站從2017年全面開展了NAT檢測，對血清陰性的獻血者分別使用了不同的自動核酸檢測系統(tǒng)進行檢測，研究結果報告如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料

收集2017年1月～2018年3月來自某血站的129 955例無償獻血者血液標本。所有無償獻血者均符合我國《獻血者健康檢查要求》[3]的標準，第一支采用EDTA-K2真空抗凝管采血5ml，用于ELISA檢測；第二支采用EDTA-K2帶分離膠真空抗凝管采血5mL，用于NAT檢測；所有標本均在冷鏈保證下4 h內完成離心，存放于2～8℃環(huán)境下,72 h內完成檢測，實際利用率=(實際測試量/實際標定測試量)×100%。

1.2 儀器與試劑

核酸檢測系統(tǒng)：NAI篩查和確證系統(tǒng)采用羅氏Cobas s201核酸檢測系統(tǒng)(美國羅氏公司)，全自動核酸擴增系統(tǒng)：Hamilton STAR全自動混樣儀、Cobas Taqmen Analyzer核酸擴增檢驗儀、Cobas Ampilp rep核酸提取儀，試劑：Cobas TaqScreen MPX；ELISA采用Freeedom evo 200 全自動加樣儀，篩查劑:HBsAg、抗-HCV及抗-HIV；BEPⅢ酶免疫分析儀；KUBOAT 8420低速離心機；MPR2141OR冰箱。

1.3 方法

NAT檢測：采用CHITAS BSS1200(核酸匯集+提取)+ABI 7500(核酸擴增)技術對樣本混合檢測，每個一級混樣池包含6個納入NAT檢測的無償獻血樣本，取每個樣本中的167μL血漿到一級混樣池，采用全自動混樣儀加樣，應用MGP磁珠分離技術原理于全自動核酸提取儀中提取核酸，采用核酸擴增檢驗儀進行HBV、HCV、HIV靶序列擴增檢驗，觀察并記錄服務器所判讀的結果。酶聯(lián)免疫吸附測定(ELISA)：采用TECAN全自動加樣儀自動加樣，兩種試劑的2次檢測采用FAME進行(均嚴格按儀器和試劑盒的要求進行操作)，每組檢測均設置對照，且每一級混樣池均含內對照(IC)，將全自動核酸提取和擴增檢測系統(tǒng)檢出的陽性、混樣池拆分為6個組，組成該一級混樣池的原始樣本做單樣本檢，檢測為陰性判定為NAT陰性，陽性判定為NAT陽性。

1.4 統(tǒng)計學方法

選用統(tǒng)計學軟件SPSS19.0對研究數(shù)據進行分析和處理，計數(shù)資料采取%表示，行χ2檢驗，以P<0.05為差異有統(tǒng)計學意義。

2 結果

2.1 NAT總體檢測結果

共完成NAT檢測129 955例 ，有反應性199例，陽性率為0.15%(199/129 955)，混樣陽性的進行拆分單檢，有反應性55性例，拆分陽性反應率為27.64%(55/199)，其中HBV DNA占NAT拆分陽性率的90.91%(50/55)，HCV RNA 2例，HIV RNA 3例，試劑總的損耗率為0.22%(296/129 955)，實際測試量為129 659例，利用率為99.77%(129 659/129 955)。

2.2 ELISA總體檢測結果

共完成ELISA檢測129 955例 ，有反應性180例，陽性率為0.14%(180/129 955)，混樣陽性的進行拆分單檢，有反應性50性例，拆分陽性反應率為27.78%(50/180)，其中HBV DNA占拆分陽性率的80.00%(40/50)，HCV RNA 3例，HIV RNA 7例，試劑總的損耗率為0.22%(296/129 955)，實際測試量為129 655例，利用率為99.77%(129 659/129 955)。

2.3 未能完全使用的296套試劑原因分析

未能完全使用的296套試劑中混檢假陽性率占13.51%，無效孔、日常內部質控和每季度進行的實驗室內部空氣監(jiān)測均占20.27%，參加衛(wèi)生部室間質評占16.89%，內部質控失控導致的整個批次無效占29.05% 。見表1。

表1 未能完全使用的296套試劑原因分析 n(%)

3 討論

輸血相關傳染病的預防和控制是全社會關注的焦點之一[1]。NAT是一種新興的血液傳染病檢測方法，其主要原理是：利于化學、物理、生物學等方法，通過其附帶信號、靶核酸直接擴增的方法，將看不見的極微量的核酸變成直觀的可視信號或光、電，從而判斷是否存在相應的病原體[2]。2010年，國家衛(wèi)生與計劃生育委員會確定在全國15家供血機構開展NAT試點工作，以保證血液檢測質量。NAT檢驗技術被越來越多的國家和地區(qū)采用，能夠降低HBV、HCV、HIV的傳播風險，提高臨床輸血的安全性[3，4]。

有研究表明NAT可明顯縮短病毒檢測的窗口期，且不受病毒差異等和個體免疫因素的影響。由于自動化NAT系統(tǒng)的試劑價格較高，因此如何在確保檢測質量的情況下降低檢測成本，提高利用率，為大家所關注。本研究結果顯示試劑總的利用率為99.77%，有反應性199例，陽性率為0.15%，混樣陽性的進行拆分單檢，有反應性55性例，拆分陽性反應率為27.64%，其中HBV DNA占NAT拆分陽性率的90.91%，提示這部分獻血者具有比正常獻血者HBV感染的風險更高，對非反應的試劑，要求采用更合理的檢測策略。ELISA檢測陽性率為0.14%，其中HBV DNA混檢陽性率為0.03%，HCV RNA 3例，HIV RNA 7例，提示對ELISA對HBV感染的陽性檢出率較低，ELISA操作步驟復雜，影響反應因素較多，因此對HBV感染的陽性檢出率較低，本研究結果顯示試劑損耗率為0.28%，而影響試劑損耗的因素有： 混檢假陽性率、無效孔、日常內部質控(包括陰陽性對照和室內質控各一孔/每批次)、參加衛(wèi)生部室間質評、每季度進行的實驗室內部空氣監(jiān)測、內部質控失控導致的整個批次無效。其中內部質控失控導致的整個批次無效占29.05%，對于試劑損耗應該優(yōu)化工作流程，設計好檢測計劃，因NAT的檢測過程非常精密，在使用中，軟件、儀器的硬件均可能導致失敗，從而導致試劑的浪費，消耗未加入檢測試劑的記載時間，最終降低了試劑的利用率，因此，為提高試劑的利用率，需要根據實際檢測量與廠家密切聯(lián)系，加強儀器保養(yǎng)，提高操作的熟練度和標本管理能力，注重實驗室的防治污染，做好實驗室環(huán)境以及儀器的內部清潔、消毒工作，以防治污染導致無效檢測。

綜上所述，不同血液檢測模式下核酸檢測試劑有效利用率無明顯差異，應用NAT可降低輸血風險，尤其對HBV感染的陽性檢出率較高。同時核酸檢測試劑的成本頗高，因此減少試劑的浪費十分重要，需研究更好的辦法來提高試劑的利用率。