急性髓性白血病外周血T淋巴細(xì)胞亞群的研究

陳榮伴 鄒茂權(quán) 梁惠如 譚美仲 蔡美霞

急性髓性白血病是一種血液疾病，是由于骨髓積累大量白血病細(xì)胞，正常造血功能受到抑制，臨床表現(xiàn)為貧血、發(fā)熱、骨骼疼、出血等，具有較高的發(fā)病率[1]。引發(fā)白血病的因素有很多，如病毒因素、化學(xué)因素、放射因素等，隨著人們生活方式與飲食方式的改變[2]，急性髓性白血病的發(fā)病率不斷增加。機(jī)體在正常狀態(tài)下，免疫細(xì)胞可對(duì)突變腫瘤細(xì)胞進(jìn)行清除，促進(jìn)機(jī)體維護(hù)正常的生理功能[3]，免疫功能與白血病發(fā)生與發(fā)展密切相關(guān)。對(duì)于發(fā)生白血病后的機(jī)體免疫細(xì)胞功能與細(xì)胞數(shù)量并非完全清楚，為了對(duì)此有更好的了解，本文將以我院2016年4月—2018年4月急性髓性白血病患者為對(duì)象，探究急性髓性白血病外周血T淋巴細(xì)胞亞群的研究。

1 資料與方法

1.1 一般資料

選取2016年4月—2018年4月30例血液科急性髓性白血病患者，作為研究組，選取同期50例體檢健康者，作為參照組。其中參照組患者中，男女患者分別為27例與23例，年齡為18～46歲，平均年齡為（32.73±5.35）歲。研究組患者中，男女患者分別為18例與12例，年齡為19～46歲，平均年齡為（32.89±5.21）歲。納入標(biāo)準(zhǔn)：（1）資料齊全；（2）以1986年《全國(guó)血液學(xué)家綜合國(guó)內(nèi)外關(guān)于急性白血病分型》為診斷標(biāo)準(zhǔn)，研究組確診為該疾??；（3）認(rèn)知正常；（4）符合本次研究的標(biāo)準(zhǔn)，均熟知本次研究的標(biāo)準(zhǔn)，并表示自愿參加。排除標(biāo)準(zhǔn)：（1）研究組：藥物過敏，精神障礙，其他惡性腫瘤；免疫性疾??；不配合研究者。（2）參照組：不配合研究者。在統(tǒng)計(jì)軟件SPSS 19.0中將研究組和參照組患者的基本信息輸入，組間差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，P＞0.05。

1.2 方法

檢測(cè)方法：所有試驗(yàn)者晨起空腹，抽取3 mL靜脈血，取無菌乙二胺四乙酸二鈉抗凝管將其置入，混勻，并備用。于血氧采集后的2 h內(nèi)，取無菌PBS緩沖溶液按照1∶1的比例對(duì)抗凝血進(jìn)行稀釋，對(duì)單個(gè)細(xì)胞核使用淋巴細(xì)胞分離液進(jìn)行分析，取DMEM細(xì)胞培養(yǎng)液，將細(xì)胞濃度調(diào)整至2×106個(gè)/mL。隨后，抽取上述的細(xì)胞懸液100μL，加入CD3抗體、CD4抗體、CD8抗體，在4℃的避光環(huán)境下靜置0.5 h，進(jìn)行離心操作，設(shè)定參數(shù)800 rpm，時(shí)間10 min，使用PBS緩沖液進(jìn)行洗滌，共計(jì)2次，將上清取出，加入染色緩沖液適量，行上流式細(xì)胞儀進(jìn)行分析。

1.3 觀察指標(biāo)

對(duì)比治療前、完全緩解者、健康者的CD3+百分比、CD4+百分比、CD8+百分比，以及CD4+/CD8+比值，進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析。

表1 治療前、完全緩解者、健康者的CD3+、CD4+、CD8+、CD4+/CD8+比值比較 （±s）

表1 治療前、完全緩解者、健康者的CD3+、CD4+、CD8+、CD4+/CD8+比值比較 （±s）

注：研究組與參照組患者相比，t=8．108 7，6．821 9，6．358 9，3．303 7，aP＜ 0．05。研究組與完全緩解組患者相比，t=7．293 8，6．265 9，5．927 7，2．924 7，aP＜ 0．05

組別 n CD3+（%） CD4+（%） CD8+（%） CD4+/CD8+比值研究組 30 31．67±20．89a 18．27±12．69a 14．88±3．17a 1．23±0．87a參照組 50 64．82±15．51 40．43±14．82 24．37±7．78 1．79±0．64完全緩解 23 70．45±16．67 42．75±15．76 25．68±9．32 1．82±0．48

CD3+百分比、CD4+百分比、CD8+百分比：取標(biāo)本放于高倍鏡下進(jìn)行觀察，計(jì)數(shù)100～200個(gè)單數(shù)細(xì)胞核，對(duì)陽(yáng)性細(xì)胞的百分率進(jìn)行計(jì)算。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

將研究中的各項(xiàng)數(shù)據(jù)結(jié)果輸入軟件SPSS 19.0進(jìn)行證實(shí)，計(jì)數(shù)資料以（%）表示，組間予以χ2檢驗(yàn)，計(jì)量資料以（±s）表示，組間予以t檢驗(yàn)， P＜0.05，則表示差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

研究組30例患者在經(jīng)過系列放療后，完全緩解共23例。對(duì)比參照組與研究組的CD3+、CD4+、CD8+、CD4+/CD8+比值，研究組明顯低于參照組，組間差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。對(duì)比參照組與完全緩解組患者的CD3+、CD4+、CD8+、CD4+/CD8+比值，組間差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。對(duì)比研究組與完全緩解組患者的CD3+、CD4+、CD8+、CD4+/CD8+比值，研究組明顯低于完全緩解組，組間差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。如表1。

3 討論

白血病又稱血癌，屬于惡性腫瘤的一種，治療困難，難以治愈，分為急性白血病與慢性白血病，其中急性白血病具有發(fā)病迅速、病程短等特點(diǎn)，慢性疾病病程長(zhǎng)[4]。急性隨性白血病的病因不明[5]，與多種因素有關(guān)，如病毒感染、化學(xué)物質(zhì)、免疫功能、遺傳因素、電離輻射等。大量臨床實(shí)踐表明，T淋巴細(xì)胞對(duì)腫瘤發(fā)生、發(fā)展與治療具有重要作用。又有研究表明，急性隨性白細(xì)胞患者多伴隨T淋巴細(xì)胞亞群的數(shù)量改變與功能損害[6]。臨床為此展開大量體外實(shí)驗(yàn)，表明CD4細(xì)胞能夠非特異性或者特異性對(duì)腫瘤細(xì)胞進(jìn)行殺死。不管免疫刺激因子是否存在，CD4細(xì)胞與白血病細(xì)胞放置于一起，并經(jīng)過幾天的孵育以后，均表現(xiàn)出特異性的抗白血病細(xì)胞毒的作用[7]?？蓪?duì)此結(jié)果證實(shí)的直接依據(jù)為淋巴細(xì)胞在去除后行骨髓抑制，白血病容易復(fù)發(fā)；在對(duì)骨髓移植后的復(fù)發(fā)者使用CD4淋巴細(xì)胞輸注后，得到完全緩解。由此可得出，CD4細(xì)胞參與白血病的控制[8]，且具有重要意義。有研究提出，免疫缺陷患者極易并發(fā)腫瘤，高達(dá)10%，與白血病引發(fā)免疫功能異常可能存在相關(guān)性，對(duì)其發(fā)病機(jī)制、免疫監(jiān)護(hù)功能障礙進(jìn)行推測(cè)[9]，無法捕捉、消滅和區(qū)別與不正常細(xì)胞之間存在的關(guān)系。T淋巴細(xì)胞屬于免疫效應(yīng)細(xì)胞，也是免疫調(diào)節(jié)細(xì)胞，為細(xì)胞免疫中重要族群之一。臨床以人體成熟T淋巴細(xì)胞表明的表達(dá)，將CD分子分為CD3+、CD4+、CD8+[10]，其數(shù)量與比值對(duì)免疫內(nèi)環(huán)境維持穩(wěn)定具有重要意義。

近年來，有研究表明，淋巴細(xì)胞參與了機(jī)體造血過程，血液病的發(fā)生與發(fā)展均對(duì)淋巴細(xì)胞亞群產(chǎn)生影響，使其發(fā)生變化。部分研究中顯示，急性隨性白血病患者的T淋巴細(xì)胞亞群存在改變，其中包括比例、功能與數(shù)量，這充分說明了髓性白血病患者的免疫功能存在缺陷[11]。

本次研究結(jié)果顯示，研究組30例急性髓性白血病治療前的CD3+、CD4+、CD8+、CD3+/CD4+比值低于50例健康者，組間差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）；在經(jīng)過系列化療后，23例急性髓性白血病患者完全緩解，其CD3+、CD4+、CD8+、CD3+/CD4+比值明顯高于治療前，且與健康組相比，具有可比性。對(duì)此結(jié)果進(jìn)行分析，急性髓性白血病患者機(jī)體免疫力表現(xiàn)為抑制，細(xì)胞免疫功能明顯紊亂[12]，在病情緩解的同時(shí)，T淋巴細(xì)胞亞群數(shù)量逐漸恢復(fù)，直至正常。由此可見，急性髓性白血病病情與T淋巴細(xì)胞亞群數(shù)量與比例存在相關(guān)性，同時(shí)T淋巴細(xì)胞亞群能夠作為判斷白血病抗腫瘤的免疫情況有效指標(biāo)之一，促進(jìn)患者免疫功能調(diào)節(jié)，從而輔助疾病治療。

綜上所述：急性髓性白血病T淋巴細(xì)胞亞群具有明顯變化，在經(jīng)過有效治療后恢復(fù)正常，證明了白血病發(fā)生、發(fā)展與轉(zhuǎn)歸均影響細(xì)胞免疫。