太白楤木總皂苷對無水乙醇致大鼠胃潰瘍的預(yù)防作用▲

范 妤 郭東艷 李 濤

(陜西中醫(yī)藥大學(xué)基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)院，咸陽市 712046，電子郵箱：806919125@qq.com)

胃潰瘍是消化性潰瘍中最常見的類型。胃黏膜上皮的完整性、黏膜細胞更新、表皮生長因子、黏液-碳酸氧鹽屏障、黏膜血流、前列腺素等因素構(gòu)成了黏膜的防御屏障，幽門螺桿菌感染、應(yīng)激、藥物等因素是導(dǎo)致潰瘍的攻擊因子，保護胃黏膜的防御因子失衡是胃潰瘍發(fā)生的主要原因[1-2]。中醫(yī)藥在防治胃潰瘍方面具有獨特優(yōu)勢。太白楤木是來五加科楤木屬植物，藥用根皮，也稱楤木白皮、飛天蜈蚣七，是“秦嶺七藥”之一。太白楤木根皮具有祛風(fēng)除濕、清熱鎮(zhèn)痛、活血散瘀功效[3]。太白楤木總皂苷(total saponin ofAraliataibaiensis，TSAT)是本實驗室從太白楤木根皮中經(jīng)提取純化得到的皂苷類物質(zhì)[4-6]。在前期實驗基礎(chǔ)上，本研究通過建立無水乙醇誘發(fā)大鼠胃潰瘍模型，探討太白楤木總皂苷對胃潰瘍的預(yù)防作用，為“七藥”資源藥理作用的開發(fā)提供參考。

1 材料與儀器

1.1 實驗動物 36只雌性SD大鼠，體重(200±20)g，購于第四軍醫(yī)大學(xué)動物試驗中心，動物合格號：SCXK(軍)2012-0007。適應(yīng)性飼養(yǎng)7 d后用于實驗。

1.2 實驗藥物及試劑 太白楤木藥材購于陜西省眉縣藥材公司，經(jīng)陜西中醫(yī)藥大學(xué)高級實驗師鑒定為五加科植物太白楤木根皮；TSAT是根皮提取物，淡黃色粉末，氣微，味微苦，含總皂苷80%，避光室溫下保存?？偟鞍锥吭噭┖小+-K+-ATP酶活力測試盒均購自南京建成生物工程研究所(生產(chǎn)批號：20180128，20180131)，其他試劑均為分析純。

1.3 儀器 RM2235組織切片機(德國徠卡公司)，Centrifuge 5417R臺式冷凍高速離心機(德國Eppendorf公司)，Model680酶標儀(北京伯樂生命科學(xué)發(fā)展有限公司)，ZEISS科研級顯微鏡(德國卡爾·蔡司公司)。

1.4 實驗方法

1.4.1 實驗分組與給藥方法：使用隨機數(shù)字表將36只雌性SD大鼠分為空白組、模型組、胃康靈組以及低、中、高劑量TSAT組，每組6只?？瞻捉M和模型組均給予0.9%生理鹽水灌胃，胃康靈組給予胃康靈膠囊(黑龍江葵花藥業(yè)股份有限公司，批號：20170920)0.5 g/kg灌胃，低、中、高劑量TSAT組分別給予3、6、12 g/kg的TSAT灌胃(給藥劑量參照成人用量，按人與大鼠間等效劑量公式折算)。體積灌胃 10 ml/kg，1次/d，連續(xù)7 d。第6天起禁食不禁水 24 h，于末次給藥1 h后，除空白組外，其余各組均予10 ml/kg無水乙醇灌胃，1 h后水合氯醛麻醉。

1.4.2 取材：麻醉后，從腹主動脈收集血液，4℃下3 000 r/min離心10 min，分離血清，-20℃冰箱保存。自胸骨劍突下沿腹中線開腹，暴露胃，結(jié)扎賁門與幽門后取出胃，檢測胃液pH后，沿胃大彎剪開，純凈水輕輕洗出胃內(nèi)容物，濾紙吸干，平鋪于玻璃板上。一般觀察后將部分胃組織浸泡于10%甲醛溶液中固定，將其余部分置于-80℃冰箱保存。

1.4.3 胃液pH值測定：取兩滴胃液滴于pH試紙上，測定其pH值。

1.4.4 胃組織病理學(xué)檢查：用10%甲醛固定大鼠胃組織48 h，制作4 μm石蠟切片，蘇木精-伊紅(hematoxylin-eosin staining，HE)染色，光鏡下觀察拍照，觀察胃黏膜病理形態(tài)學(xué)改變。

1.4.5 胃黏膜組織H+-K+-ATP酶活性檢測：取胃組織制備胃黏膜組織勻漿，測定總蛋白和胃黏膜組織H+-K+-ATP酶活力，均嚴格按照試劑盒說明書操作。

1.5 統(tǒng)計學(xué)分析 應(yīng)用SSPS 18.0軟件進行統(tǒng)計分析。計量資料以(x±s)表示，組間比較采用方差分析。以P<0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié) 果

2.1 各組大鼠胃黏膜大體形態(tài) 空白組大鼠胃黏膜表面光滑，呈淡粉紅色；模型組大鼠胃黏膜呈深紅色，腫脹，沿縱行皺襞可見條索樣出血；胃康靈組大鼠胃黏膜腫脹，有散在點狀出血；與模型組比較，各劑量TSAT組大鼠胃黏膜出血及損傷程度減輕。見圖1。

2.2 各組大鼠胃黏膜的組織學(xué)形態(tài) 空白組大鼠胃壁黏膜層連續(xù)，胃小凹清晰，胃黏膜上皮及胃底腺結(jié)構(gòu)完整；模型組大鼠胃黏膜層薄，上皮和固有層部分缺失，伴水腫，可見出血及壞死組織；胃康靈組胃黏膜較完整，出血及壞死均較模型組減輕；與模型組比較，TSAT各劑量組胃黏膜損傷均有不同程度減輕，胃黏膜較完整，出血及壞死組織減少。見圖2。

2.3 各組大鼠胃液pH值及H+-K+-ATP酶活性比較 模型組大鼠胃液pH值高于空白組(P<0.05)，胃康靈組、中劑量及高劑量TSAT組胃液pH值均低于模型組(P<0.05)。模型組大鼠胃黏膜組織H+-K+-ATP酶活性低于空白組(均P<0.05)；胃康靈組及各劑量TSAT組胃黏膜組織H+-K+-ATP酶活性均高于模型組(均P<0.05)。見表1。

表1 各組大鼠胃液pH值及H+-K+-ATP酶活性比較(x±s)

注：與空白對照組相比，#P<0.05；與模型組相比，*P<0.05。

3 討 論

胃潰瘍是消化系統(tǒng)的常見病，病因復(fù)雜多樣，目前認為其發(fā)病與胃黏膜攻擊因子和防御因子平衡失調(diào)密切相關(guān)。胃潰瘍以上腹部疼痛或不適、腹脹、反酸、惡心、嘔吐等為主要臨床特征，嚴重者可并發(fā)胃出血、穿孔等[7]。理想胃潰瘍動物模型的建立是研究該疾病的病因及病機、尋找治療藥物的重要途徑。乙醇誘導(dǎo)的急性胃潰瘍模型制備方法可靠，周期短，損傷機制明確，有利于研究藥物對胃潰瘍防治機制的研究[8]。本實驗利用無水乙醇誘導(dǎo)大鼠胃潰瘍模型，結(jié)果顯示，肉眼觀察模型組大鼠胃黏膜可見散在出血點、條索樣出血帶和點狀潰瘍面，鏡下觀察可見胃黏膜組織破損、不完整，伴出血和炎細胞浸潤，這表明胃潰瘍大鼠模型復(fù)制成功。

從中藥及天然藥物中尋找療效確切、成分單一、易于觀察的有效活性成分是防治胃潰瘍的有效途徑之一，也被眾多學(xué)者所重視。胃康靈膠囊是純中藥制劑，具有鎮(zhèn)痛、抗炎、止血作用，其能夠抑制胃酸分泌，促進組織再生，加速胃黏膜修復(fù)及潰瘍的早期愈合，是目前臨床常用的治療胃潰瘍藥物[9]。因此本實驗以胃康靈膠囊為陽性對照，觀察TSAT對胃潰瘍的預(yù)防效果。結(jié)果顯示，與模型組比較，高、中、低劑量TSAT組大鼠胃黏膜潰瘍面積顯著減小，出血減少，腫脹減輕，胃黏膜層較完整，提示預(yù)防應(yīng)用TSAT可減輕無水乙醇誘導(dǎo)的胃黏膜損傷。

H+-K+-ATP酶對胃酸的分泌及胃的消化功能具有重要的生理意義。H+-K+-ATP酶定位于胃黏膜固有層壁細胞胞膜上，是第二類質(zhì)子泵，可通過自身磷酸化與去磷酸化完成H+/K+電中性跨膜離子的轉(zhuǎn)運，將壁細胞內(nèi)的質(zhì)子輸送到膜外行使其泌酸功能。檢測胃黏膜組織中H+-K+-ATP酶的活性可以直接反映胃酸分泌水平[10-11]。本實驗結(jié)果顯示，胃康靈組、中劑量及高劑量TSAT組胃液pH值均低于模型組(P<0.05)，胃康靈組及各劑量TSAT組胃黏膜組織H+-K+-ATP酶活性均高于模型組(均P<0.05)。這提示TSAT能夠降低胃液pH值，從而促進壁細胞分泌HCl；且在修復(fù)受損胃黏膜促進潰瘍愈合的過程中，可通過提高壁細胞膜H+-K+-ATP酶活性，恢復(fù)其泌酸功能，改善胃液pH水平。

綜上所述，預(yù)防應(yīng)用TSAT可減輕無水乙醇誘導(dǎo)的胃黏膜損傷，同時可以提高胃黏膜中壁細胞膜H+-K+-ATP酶活性，改善壁細胞分泌功能，恢復(fù)胃液pH值。