腫痛熏洗液對(duì)肛腸手術(shù)后疼痛模型大鼠血清一氧化氮、前列腺素E2及白細(xì)胞介素-10水平的影響▲

馮予希 李五生 蔣青峰 李時(shí)超

(西南醫(yī)科大學(xué)附屬中醫(yī)醫(yī)院肛腸科，四川省瀘州市 646000，電子郵箱：fyx669986@126.com)

機(jī)體在不良刺激影響下，致痛物質(zhì)(如緩激肽、組胺 、5-羥色胺、NO與前列腺素等)被組織釋放，致敏疼痛感受器，痛覺(jué)信息傳導(dǎo)入感覺(jué)中樞后形成疼痛意識(shí)[1]。疼痛為肛腸手術(shù)后廣泛存在的并發(fā)癥，可引發(fā)尿潴留、排便困難、出血、水腫等其他并發(fā)癥，嚴(yán)重影響手術(shù)質(zhì)量、創(chuàng)面恢復(fù)以及患者生活質(zhì)量。腫痛熏洗液為我院李五生教授應(yīng)用于臨床多年的經(jīng)驗(yàn)方，其主要成分有酒黃連、酒黃芩、黃柏、白頭翁等，具有明顯的鎮(zhèn)痛作用，且無(wú)明顯的毒副反應(yīng)[2]。本研究觀察腫痛熏洗液對(duì)肛腸手術(shù)后疼痛模型大鼠血清NO、前列腺素E2(prostaglandin E2，PGE2)及白細(xì)胞介素-10(interleukin-10，IL-10)水平的影響，探討其鎮(zhèn)痛機(jī)理。

1 材料與方法

1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物 健康清潔級(jí)SD大鼠40只，雌雄各半，體重為(200.0±20.0)g，鼠齡6～8，購(gòu)自西南醫(yī)科大學(xué)動(dòng)物實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心[合格證號(hào)：SYXK(川)2013-17]，并飼養(yǎng)于該實(shí)驗(yàn)中心動(dòng)物房。雌雄分籠飼養(yǎng)，飲冷開(kāi)水，自由攝食，適應(yīng)性喂養(yǎng)3 d后開(kāi)始實(shí)驗(yàn)。

1.2 實(shí)驗(yàn)藥物及試劑 (1)腫痛熏洗液:由西南醫(yī)科大學(xué)附屬中醫(yī)院制劑室煎藥熬制，藥物組成包括酒黃連10 g、黃柏30 g、炒梔子20 g、酒黃芩15 g、白頭翁15 g、秦皮10 g、草紅藤30 g、紫花地丁30 g、敗醬草30 g、苦參30 g、白芷12 g、生大黃20 g、當(dāng)歸10 g、肉桂10 g、木香10 g。(2)馬應(yīng)龍麝香痔瘡膏(武漢馬應(yīng)龍藥業(yè)集團(tuán)股份有限公司生產(chǎn)，國(guó)藥準(zhǔn)字：Z42021920；批號(hào)：170438)。(3)PGE2、IL-10酶聯(lián)免疫吸附測(cè)定試劑盒均購(gòu)自上海橋杜生物技術(shù)有限公司(PGE2貨號(hào)：RA20017；IL-10貨號(hào)：RA200951)。NO檢測(cè)試劑盒購(gòu)自蘇州宇恒生物科技有限公司(貨號(hào)：RA20010)。(4)2%戊巴比妥鈉由西南醫(yī)科大學(xué)實(shí)驗(yàn)室代購(gòu)。

1.3 實(shí)驗(yàn)器材 手術(shù)包(包括眼科手術(shù)刀、鑷子、剪刀等)、千分之一電子天平(SHIMADZU AUY220)、高速離心機(jī)(上海艾研生物科技有限公司)、酶標(biāo)儀(美國(guó)Bio-Rad公司)、毛細(xì)玻璃管、-80℃冰箱、數(shù)顯恒溫水浴鍋(常州諾基儀器有限公司，型號(hào)：HHS.21-4)等。

1.4 實(shí)驗(yàn)方法

1.4.1 動(dòng)物分組及造模：將40只大鼠按隨機(jī)數(shù)字表法分為正常組、模型組、生理鹽水組、馬應(yīng)龍麝香痔瘡膏組及腫痛熏洗液組，每組8只(每組大鼠雌雄各半)。除正常組大鼠外，其余4組大鼠根據(jù)文獻(xiàn)[3]進(jìn)行造模。按0.25 ml/100 g腹腔注射2%戊巴比妥鈉麻醉大鼠后，將其仰臥固定于實(shí)驗(yàn)動(dòng)物臺(tái)，肛周及鼠尾近端備皮，將鼠尾近端包括肛周進(jìn)行消毒，待肛門(mén)松弛后，以肛緣為界，切開(kāi)皮膚至直腸黏膜，切口修剪成三角形缺損，底寬約1.0 cm，高約2.0 cm，深至皮下深筋膜層。造模成功后，繼續(xù)雌雄分籠飼養(yǎng)飲冷開(kāi)水，自由攝食。

1.4.2 創(chuàng)面換藥：造模成功后，馬應(yīng)龍麝香痔瘡膏組給予創(chuàng)面均勻涂抹馬應(yīng)龍麝香痔瘡膏(0.18 g/kg)，然后用厚度約1mm紗布覆蓋并予以膠布固定，2次/d。生理鹽水組、腫痛熏洗液組分別給予生理鹽水(25 ml/kg)及腫痛熏洗液(25 ml/kg)熏蒸，蒸汽溫度為(37.0±1.0)℃ ，將大鼠放入自制動(dòng)物熏蒸裝置，開(kāi)啟數(shù)顯恒溫水浴鍋，待蒸汽溫度達(dá)到熏蒸要求后開(kāi)始熏蒸，20 min/次，2次/d。正常組與模型組不做處理。

1.4.3 標(biāo)本采集與保存：于給藥3 d后，末次換藥后1 h采集大鼠尾靜脈采血1～2 ml，靜置30 min后室溫下2 000 r/min離心15 min，取上清液置于于無(wú)菌管，-20℃冰箱中保存?zhèn)溆谩?/p>

1.4.4 檢測(cè)指標(biāo)：按試劑盒說(shuō)明檢測(cè)各組大鼠血清PGE2、IL-10水平。采用雙管測(cè)定，取平均值后用標(biāo)準(zhǔn)物的濃度與A值計(jì)算出標(biāo)準(zhǔn)曲線的直線回歸方程式，將樣品的A值代入方程式，計(jì)算出樣品濃度，再乘以稀釋倍數(shù)，即為樣品的實(shí)際濃度。按檢測(cè)試劑盒說(shuō)明檢測(cè)各組大鼠血清NO水平，通過(guò)分光光度法比色,在波長(zhǎng)546 nm下測(cè)定吸光度,并制作標(biāo)準(zhǔn)曲線，通過(guò)曲線可求得樣品中NO水平。

1.5 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析 采用SPSS 17.0軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析。計(jì)量資料用(x±s)表示，多組間比較采用方差分析，兩兩比較采用SNK-q法檢驗(yàn)。以P<0.05表示差異統(tǒng)計(jì)學(xué)有意義。

2 結(jié) 果

模型組、生理鹽水組、馬應(yīng)龍麝香痔瘡膏組、腫痛熏洗液組血清IL-10水平均低于正常組，血清PGE2、NO水平均高于正常組(均P<0.05)。馬應(yīng)龍麝香痔瘡膏組、腫痛熏洗液組血清IL-10水平均高于模型組與生理鹽水組，血清PGE2、NO水平均低于模型組與生理鹽水組(均P<0.05)。腫痛熏洗液組血清IL-10水平高于馬應(yīng)龍痔瘡膏組(P<0.05)，而腫痛熏洗液組與馬應(yīng)龍麝香痔瘡膏組血清PGE2、NO水平比較，差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(均P>0.05)。見(jiàn)表1。

表1 5組大鼠血清NO、PGE2及IL-10水平比較(x±s)

注：與正常組比較，*P<0.05；與模型組比較，#P<0.05；與生理鹽水組比較，aP<0.05；與馬應(yīng)龍痔瘡膏組比較，bP<0.05。

3 討 論

手術(shù)創(chuàng)傷可刺激炎性因子產(chǎn)生，進(jìn)而提高機(jī)體疼痛敏感性，導(dǎo)致肛腸疾病患者術(shù)后出現(xiàn)急慢性疼痛[4-5]。研究表明，NO與一氧化氮合成酶是影響痛覺(jué)調(diào)控的重要因素，大量的一氧化氮合酶陽(yáng)性神經(jīng)元存在于許多動(dòng)物和人類的隔區(qū)[6]。PGE2為花生四烯酸環(huán)氧合酶的代謝產(chǎn)物，是細(xì)胞生長(zhǎng)因子和調(diào)節(jié)因子，也是重要的疼痛遞質(zhì)之一[7]。研究表明，IL-10的鎮(zhèn)痛作用機(jī)制可能為抑制致炎致痛的NO及PEG2的產(chǎn)生，阻斷細(xì)胞因子的級(jí)聯(lián)反應(yīng)，進(jìn)而保護(hù)脊髓神經(jīng)元[8-9]。因此，IL-10、PGE2、NO常作為評(píng)價(jià)肛腸疾病術(shù)后炎癥反應(yīng)程度的指標(biāo)。

中醫(yī)學(xué)認(rèn)為，肛門(mén)局部血瘀氣滯、濕熱下注為肛腸疾病術(shù)后疼痛的機(jī)理[10]。有研究表明，藥物的有效成分易通過(guò)肛門(mén)局部吸收而參與血液循環(huán)，經(jīng)新陳代謝加快組織修復(fù)，改善疼痛、腫脹等不良癥狀[11]。中藥熏洗可改善局部血液循環(huán)，發(fā)揮藥物清熱解毒、行氣活血、消腫止痛的作用。腫痛熏洗液為我院長(zhǎng)期應(yīng)用于臨床且療效顯著的經(jīng)驗(yàn)方，全方以黃連解毒湯(黃連、黃柏、黃芩、梔子)為君藥，發(fā)揮清熱燥濕、瀉火解毒之功，現(xiàn)代藥理研究表明，黃連解毒湯具有抗菌、抗炎、抗氧化、抗血栓等作用[12]。白頭翁、紫花地丁、敗醬草為臣藥，配合君藥以清熱解毒、祛瘀止痛；同時(shí)以苦參、白芷、秦皮為臣藥，清除體內(nèi)之腸風(fēng)，發(fā)揮祛風(fēng)止癢、收斂生肌等功效，防治術(shù)后肛門(mén)的局部瘙癢感；生大黃、當(dāng)歸為佐助藥，既逐瘀通經(jīng)止痛，又可活血補(bǔ)血；肉桂為反佐藥，通過(guò)補(bǔ)火助陽(yáng)，反佐清熱解毒類藥物的寒涼之性；木香為使藥，調(diào)暢人體氣機(jī)，行氣止痛。諸藥合用，共湊清熱燥濕、益氣活血化瘀、消腫止痛的作用[13]。本課題組前期研究已證實(shí)腫痛熏洗液具有明確的鎮(zhèn)痛促愈作用，且無(wú)明顯的毒副反應(yīng)。本研究結(jié)果顯示，馬應(yīng)龍痔瘡膏組、腫痛熏洗液組血清IL-10水平均高于模型組與生理鹽水組，血清PGE2、NO水平均低于模型組與生理鹽水組(均P<0.05)，腫痛熏洗液組血清IL-10水平高于馬應(yīng)龍痔瘡膏組(P<0.05)。說(shuō)明腫痛熏洗液能夠通過(guò)降低肛腸術(shù)后疼痛模型大鼠血清PGE2、NO水平，提高大鼠血清IL-10水平。

綜上所述，腫痛熏洗液可能上調(diào)抗炎性細(xì)胞因子IL-10水平，降低致痛物質(zhì)PGE2、NO水平，從而抑制疼痛因子及炎癥反應(yīng)，減輕肛腸術(shù)后疼痛。