寬葉打碗花全草的脂溶性化學(xué)成分研究

石舒雅，梁惠嫻，尹永芹，陳艷芬，郭麗冰

(廣東藥科大學(xué)中藥學(xué)院，廣東廣州 510006)

寬葉打碗花[Calystegiasepium(L.) R Br]為旋花科打碗花屬多年生草本植物，又名旋花、狗狗秧、鼓子花、籬天劍、天劍草、籬打碗花、續(xù)筋根等，在全國范圍廣泛分布[1]。寬葉打碗花性涼、味甘，具有清熱解毒之效；民間以其全草或根入藥，可治療小便不利、高血壓，且外用可治丹毒和創(chuàng)傷等?！侗静菥V目》中記載，旋花全草甘滑微苦，利雄黃；其花可益氣，去面皯黑色；其根可去腹中寒熱邪氣，亦利小便，續(xù)筋骨，合刀傷，治丹毒，補(bǔ)勞損，益精氣。

目前，國內(nèi)外對(duì)寬葉打碗花的報(bào)道很少，打碗花屬植物的相關(guān)研究也較少[2-7]。為發(fā)掘?qū)捜~打碗花的藥用價(jià)值，并為今后其生物活性研究及質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)建立提供物質(zhì)基礎(chǔ)，本課題組首次對(duì)其化學(xué)成分進(jìn)行了系統(tǒng)研究，從中分離得到11個(gè)化合物，分別鑒定為東莨菪苷(1)、莨菪亭(2)、N-p-香豆酰酪胺(3)、傘形花內(nèi)酯(4)、鄰苯二甲酸二丁酯(5)、鄰苯二甲酸二辛酯(6)、大豆腦苷Ⅰ(7)、去氫催吐蘿芙木醇(8)、(6R,7aR)-表地芰普內(nèi)酯(9)、綠原酸甲酯(10)以及β-谷甾醇(11)。以上所有化合物均為首次從該植物中分離得到。

1 儀器與材料

BrukerAV Ⅲ 500 MHz型核磁共振儀(瑞士布魯克拜厄斯賓有限公司)；薄層色譜硅膠G、硅膠GF254板、柱色譜硅膠(青島海洋化工廠)；LC-6AD半制備液相色譜儀(日本島津公司)；Sephadex LH-20(美國GE公司)；RE-3000B旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀(上海亞榮化學(xué)儀器廠)；用于半制備液相和制備液相的試劑為色譜純，其他均為分析純。

寬葉打碗花藥材于2015年8月采自吉林省磐石市煙筒山鎮(zhèn)前山屯荒地，經(jīng)廣東藥科大學(xué)李書淵教授鑒定為旋花科打碗花屬植物寬葉打碗花[Calystegiasepium(L.) R Br]全草，標(biāo)本(編號(hào)：Q-K201508001)存放于廣東藥科大學(xué)中藥學(xué)院中藥化學(xué)教研室。

2 提取與分離

寬葉打碗花藥材干燥全草10 kg，體積分?jǐn)?shù)95%乙醇加熱回流提取3次，每次2 h，減壓回收乙醇，得到粗浸膏853 g。依次用石油醚、三氯甲烷、乙酸乙酯及正丁醇萃取，減壓回收各部位溶劑，得到石油醚萃取部位(150 g)、三氯甲烷萃取部位(76 g)、乙酸乙酯萃取部位(52 g)、正丁醇萃取部位(224 g)。

石油醚部位浸膏(150 g)采用硅膠柱色譜(200～300目)依次用石油醚-乙酸乙酯(體積比25∶1、15∶1、10∶1、5∶1、1∶1、0∶1)及純甲醇洗脫，得到7個(gè)餾分(Fr.1-Fr.7)。Fr.1(3.5 g)反復(fù)經(jīng)過硅膠柱色譜分離及重結(jié)晶得到化合物11(20 mg)。Fr.2(12.7 g)經(jīng)中壓反相ODS柱色譜(甲醇-水系統(tǒng))分離，經(jīng)TLC檢測(cè)餾分并進(jìn)行合并得3個(gè)亞餾分(Fr.2a-Fr.2c)，F(xiàn)r.2c(5.2 g)利用ODS柱色譜(甲醇-水系統(tǒng))分離純化，并結(jié)合HPLC以及制備液相(流動(dòng)相：體積分?jǐn)?shù)88%甲醇)分離，得到化合物5(6 mg)和化合物6(8 mg)。Fr.3(128 mg)經(jīng)半制備液相(流動(dòng)相：體積分?jǐn)?shù)90%甲醇)分離，得到化合物7(12 mg)。

三氯甲烷萃取部位76 g，用硅膠(200～300目)柱層析進(jìn)行分離，以二氯甲烷-甲醇為系統(tǒng)梯度洗脫，得到7個(gè)餾分(Fr.1-Fr.7)。Fr.2(3.6 g)經(jīng)SephadexLH-20柱色譜，甲醇洗脫，采用TLC檢測(cè)跟蹤合并，并結(jié)合HPLC以及制備液相(流動(dòng)相：體積分?jǐn)?shù)45%甲醇)分離，得到化合物8(5 mg)和化合物9(10 mg)。Fr.4(15.2 g)經(jīng)ODS柱色譜(甲醇-水系統(tǒng))分離，得3個(gè)亞餾分(Fr.4a-Fr.4c)，F(xiàn)r.4b(283 mg)經(jīng)半制備液相(流動(dòng)相：體積分?jǐn)?shù)35%甲醇)分離，得到化合物3(10 mg)和化合物10(13 mg)。Fr.5(2.4 g)經(jīng)SephadexLH-20柱層析，甲醇洗脫，經(jīng)TLC檢測(cè)餾分并進(jìn)行合并，得到3個(gè)亞餾分(Fr.5a-Fr.5c)，F(xiàn)r.5a(124 mg)經(jīng)制備薄層色譜，得到化合物1(12 mg)；Fr.5c(1.8 g)經(jīng)反復(fù)重結(jié)晶，得到化合物2(18 mg)。Fr.6(2.8 g)經(jīng)SephadexLH-20柱層析，甲醇洗脫，分離得到化合物4(10 mg)。

3 結(jié)構(gòu)鑒定

化合物1：白色無定型粉末，mp 220～222 ℃，溶于甲醇。1H-NMR(500 MHz,DMSO)δ:3.83(s,-OCH3),6.32(1H,d,J=9.5 Hz,H-3),7.96(1H,d,J=9.5 Hz,H-4),7.15(1H,s,H-5),7.29(1H,s,H-8),5.36(1H,d,J=5.1 Hz,H-1′),3.29(1H,d,J=3.5 Hz,H-2′),3.44(1H,d,J=7.0 Hz,H-3′),3.70(1H,d,J=5.4 Hz,H-4′),4.59(1H,s,H-5′),5.17(1H,m,H-6′a),5.09(1H,m,H-6′b)。13C-NMR(125 MHz,DMSO)δ:160.5(C-2),113.3(C-3),146.0(C-4),109.69(C-5),144.25(C-6),149.9(C-7),103.0(C-8),148.9(C-9),112.2(C-10),99.6(C-1′),73.1(C-2′),77.1(C-3′),69.6(C-4′),76.8(C-5′),60.7(C-6′),56.1(—OCH3)。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)[8]報(bào)道的一致，故鑒定化合物1為東莨菪苷(scopolin)。

化合物2：淡黃色針晶，mp 203～204 ℃，溶于三氯甲烷、二氯甲烷和甲醇。1H-NMR(500 MHz,DMSO)δ:6.21(1H,d,J=9.0 Hz,H-3),7.90(1H,m,H-4),7.21(1H,s,H-5),6.76(1H,s,H-8),3.36(3H,s,OCH3)。13C-NMR(125 MHz,DMSO)δ:160.6(C-2),111.3(C-3),144.8(C-4),109.5(C-5),145.3(C-6),150.9(C-7),102.6(C-8),149.1(C-9),112.8(C-10),55.7(OCH3)。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)[9]報(bào)道的一致，故鑒定化合物2為莨菪亭(scopoletin)。

化合物3：白色無定型粉末，mp 232～233 ℃，溶于甲醇、二氯甲烷。酪胺單元：1H-NMR(500 MHz,DMSO)δ:3.33(2H,m,H-1),2.62(2H,t,J=7.4 Hz,H-2),7.36(2H,d,J=8.6 Hz,H-2′,6′),6.77(2H,d,J=8.6 Hz,H-3′,5′)。13C-NMR(125 MHz,DMSO)δ:40.7(C-1),34.5(C-2),129.6(C-1′),129.5(C-2′,6′),115.8(C-3′,5′),155.6(C-4′)；香豆酰單元：1H-NMR(500 MHz,DMSO)δ:6.37(1H,d,J=15.7 Hz,H-2),7.29(1H,d,J=15.7 Hz,H-3),7.02(2H,m,H-2′,6′),6.63(2H,m,H-3′,5′),8.00(1H,s,—NH)。13C-NMR(125 MHz,DMSO)δ:165.3(C-2),138.6(C-3),125.9(C-1′),129.6(C-2′,6′),115.1(C-3′,5′),158.8(C-4′)。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)[10]報(bào)道的一致，故鑒定化合物3為N-p-香豆酰酪胺(N-p-ciscoumaroy-tyramine)。

化合物4：白色針狀結(jié)晶，mp 223～225 ℃，溶于甲醇、二氯甲烷。1H-NMR(500 MHz,DMSO)δ:6.18(1H,d,J=9.4 Hz,H-3),7.91(1H,d,J=9.4 Hz,H-4),7.51(1H,d,J=8.5 Hz,H-5),6.77(1H,dd,J=8.5,2.3 Hz,H-6)，6.69(1H,d,J=2.2 Hz,H-8)。13C-NMR(125 MHz,DMSO)δ:161.9(C-7),161.1(C-2),156.1(C-9),145.2(C-4),130.3(C-5),113.8(C-6),112.0(C-3),102.83(C-8),111.9(C-10)。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)[11]報(bào)道的一致，故鑒定化合物4為傘形花內(nèi)酯(umbell-iferone)。

化合物7：白色無定型粉末，mp 179～181 ℃，溶于三氯甲烷、二氯甲烷和甲醇。1H-NMR(500 MHz,DMSO)δ:7.39(1H,d,J=8.5 Hz,N-H),0.86(6H,t,J=7.0 Hz,H-16′,18),1.26(40H,m,H-11～17,3′～15′),1.93(1H,m,H-10),5.60(1H,m,H-9),5.56(1H,m,H-8),1.99(1H,m,H-7),1.99(1H,m,H-6),5.40(1H,m,H-5),5.38(1H,m,H-4),3.98(1H,m,H-3),1.41(1H,m,H-3a),3.83(1H,m,H-2),3.94(1H,dd,J=10.5,5.5 Hz,H-1a),3.52(1H,m,H-1b),1.54(1H,m,H-3′a),3.81(1H,m,H-2′),4.11(1H,d,J=7.5 Hz,H-1″),2.95(1H,m,H-2″),3.13(1H,m,H-3″),3.08(1H,m,H-4″),3.05(1H,m,H-5″),3.67(1H,m,H-6″a),3.42(1H,m,H-6″b)。13C-NMR(125 MHz,DMSO)δ:122.2(C-1a),52.8(C-2),73.4(C-3),131.1(C-4),130.8(C-5),32.1(C-6),32.0(C-7),130.0(C-8),129(C-9),.31.7(C-10),22.1～31.3(C-11～17),13.9(C-18,16′),173.8(C-1′),70.5(C-2′),35.4(C-3a′),22.1～31.3(C-3′),104.0(C-1″),73.4(C-2″),76.9(C-3″),71.0(C-4″),76.5(C-5″),61.0(C-6″)。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)[14]報(bào)道的一致，故鑒定化合物7為大豆腦苷Ⅰ(soya-cerebrosideⅠ)。

化合物8：淡黃色油狀，溶于甲醇、二氯甲烷、石油醚和乙酸乙酯。1H-NMR(500 MHz,DMSO)δ:2.14(1H,d,J=17.0 Hz,H-2a),2.63(1H,d,J=17.0 Hz,H-2b),5.85(1H,s,H-4),5.41(1H,s,—OH),6.96(1H,d,J=16.0 Hz,H-7),6.25(1H,d,J=16.0 Hz,H-8),2.26(1H,s,H-10),0.95(3H,s,H-11),0.91(3H,s,H-12),1.79(3H,s,H-13)。13C-NMR(125 MHz,DMSO)δ:41.4(C-1),49.5(C-2),196.9(C-3),127.0(C-4),161.8(C-5),78.0(C-6),147.5(C-7),130.1(C-8),198.5(C-9),26.7(C-10),22.7(C-11),24.3(C-12),18.7(C-13)。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)[15]報(bào)道的一致，故鑒定化合物8為去氫催吐蘿芙木醇(dehydrovomifoliol)。

化合物9：無色結(jié)晶，mp 146～148 ℃，溶于甲醇、二氯甲烷。1H-NMR(500 MHz,DMSO)δ:5.78(1H,s,H-3),1.87(d,J=14.5 Hz,H-5),1.43(dd,J=14.0,3.5 Hz,H-5),4.07(1H,m,H-6),4.99(1H,d,J=3.0 Hz,—OH),2.27(1H,d,J=13.0 Hz,H-7),1.64(1H,dd,J=13.5,4.0 Hz,H-7),1.66(3H,s,H-8),1.19(3H,s,H-9),1.37(3H,s,H-10)。13C-NMR(125 MHz,DMSO)δ:170.8(C-2),112.2(C-3),183.2(C-3a),35.4(C-4),46.4(C-5),64.9(C-6),45.1(C-7),85.7(C-7a),26.8(C-8),30.8(C-9),26.1(C-10)。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)[16]報(bào)道的一致，故鑒定化合物9為(6R,7aR)-表地芰普內(nèi)酯[(-)-epiloliolide]。

化合物10：白色無定型粉末，溶于甲醇、二氯甲烷、三氯甲烷。1H-NMR(500 MHz,DMSO)δ:7.38(1H,d,J=15.9 Hz,H-7′),7.03(1H,d,J=1.5 Hz,H-2′),6.97(1H,dd,J=8.2,1.9 Hz,H-6′),6.77(1H,d,J=8.1 Hz,H-5′),6.11(1H,d,J=15.9 Hz,H-8′),5.02(1H,d,J=4.7 Hz,H-3),3.81(1H,m,H-4),3.55(3H,s,—OCH3),3.57(1H,m,H-5),2.02～2.52(m,H-2,6)。13C-NMR(125 MHz,DMSO)δ:73.2(C-1),39.8(C-2),69.5(C-3),71.1(C-4),67.0(C-5),40.0(C-6),173.7(C-7),125.5(C-1′),116.0(C-2′),148.6(C-3′),145.7(C-4′),114.8(C-5′),121.5(C-6′),145.3(C-7′),114.0(C-8′),165.5(C-9′),51.9(—OCH3)。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)[17]報(bào)道的一致，故鑒定化合物10為綠原酸甲酯(methylchlorogenate)。

化合物11：白色針晶，mp 136～138 ℃，溶于石油醚、乙酸乙酯、二氯甲烷，不溶于甲醇；Liebermann-Burchard反應(yīng)呈陽性。與β-谷甾醇對(duì)照品共薄層，斑點(diǎn)顏色及Rf值與對(duì)照品一致；與β-谷甾醇對(duì)照品混合后測(cè)定其混合物的熔點(diǎn)，結(jié)果顯示熔點(diǎn)不下降，故鑒定化合物11為β-谷甾醇(β-sitosterol)。

4 討論

寬葉打碗花目前多被視為雜草，但其全草或根可藥用，而且分布廣泛，資源量大，有著悠久的藥用歷史。目前，對(duì)寬葉打碗花化學(xué)成分和藥理作用的研究甚少，同屬植物的相關(guān)研究也較少[2-7]。本研究對(duì)寬葉打碗花全草的脂溶性成分進(jìn)行分離純化，并根據(jù)化合物的理化性質(zhì)、波譜及光譜數(shù)據(jù)進(jìn)行結(jié)構(gòu)鑒定，共鑒定得到11個(gè)化合物，其中化合物1、3～10為首次從該屬植物中分離得到，豐富了寬葉打碗花化學(xué)組分信息庫，并為寬葉打碗花的藥效研究提供更多的物質(zhì)基礎(chǔ)，為其后續(xù)開發(fā)利用提供科學(xué)依據(jù)。