白花敗醬石油醚部位化學(xué)成分研究

吳 娟，王國凱，鄔家成，韓 婧，劉勁松

(1.安徽中醫(yī)藥大學(xué)藥學(xué)院 現(xiàn)代中藥安徽省重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，安徽 合肥 230012；2.安徽中醫(yī)藥大學(xué)醫(yī)藥信息工程學(xué)院，安徽 合肥 230012)

白花敗醬為敗醬科敗醬屬植物白花敗醬Patriniavillosa(Thunb.)Juss的全草，又名苦薺公、苦益菜等，資源豐富[1]。其始載于《神農(nóng)本草經(jīng)》，具有清熱解毒、利濕排膿、活血化瘀、鎮(zhèn)心安神的功效[2]，民間常用于治療闌尾炎、肺膿癰、結(jié)核瘰疬、癰腫瘡毒、腸炎、痢疾等[3]?；瘜W(xué)成分表明，白花敗醬主要含有環(huán)烯醚萜、黃酮、三萜、木脂素、甾醇等[4-6]。為了充分利用和開發(fā)白花敗醬的豐富資源，闡明其藥效物質(zhì)基礎(chǔ)，本實(shí)驗(yàn)對其95%乙醇提取物石油醚萃取部位化學(xué)成分進(jìn)行研究，以期尋找活性更好的化合物。

1 儀器與試藥

1.1 儀器 核磁光譜為Bruker AM-400、DRX-500核磁共振儀：德國布魯克公司；分析或半制備型HPLC為Waters1525型高效液相色譜儀：美國Waters公司；AutoSpec-3000質(zhì)譜儀：VG儀器公司。

1.2 試藥 白花敗醬藥材于2018年9月采于安徽金寨，經(jīng)安徽中醫(yī)藥大學(xué)楊青山老師鑒定為敗醬科白花敗醬Patriniavillosa(Thunb.)Juss干燥地上部分。柱層析及薄層硅膠：青島海洋化工廠；MCI填充材料MCI-gel CHP-20P：日本三菱公司；Sephadex LH-20凝膠材料：GE公司；所用試劑均為分析純。

2 提取分離

藥材36 kg以95%乙醇滲漉提取，減壓濃縮，得浸膏2.8 kg，浸膏加水混懸，依次經(jīng)過石油醚、乙酸乙酯、正丁醇萃取，分別回收溶劑，得石油醚萃取部分477 g。經(jīng)硅膠柱層析，石油醚-丙酮系統(tǒng)(1∶0—0∶1，V/V)梯度洗脫，共得到B1—B9流分。B5經(jīng)反復(fù)硅膠柱層析石油醚-丙酮(10∶1—0∶1，V/V)洗脫，得化合物2(21 mg)。B8流分經(jīng)石油醚-丙酮反復(fù)硅膠柱層析及Sephadex LH-20(氯仿-甲醇 1∶1，V/V)純化，得化合物5(6 mg)、化合物1(15 mg)。制備高效液相色譜(乙腈-水，55∶45—70∶30，V/V，25 min)，得化合物8(5 mg)。B9流分經(jīng)MCI柱(甲醇-水，40∶60—100∶1，V/V)洗脫，再經(jīng)反復(fù)硅膠柱色譜二氯甲烷-甲醇(10∶1—0∶1，V/V)洗脫及Sephadex LH-20柱色譜(甲醇)純化，得化合物7(25 mg)、化合物6(7 mg)、化合物4(5 mg)。制備高效液相色譜(乙腈-水，45∶55—60∶40，V/V，20 min)，純化得化合物3(5 mg)。

3 結(jié)構(gòu)鑒定

3.1 化合物1 白色粉末，易溶于甲醇。ESI-MSm/z455 [M-H]-；1H NMR(400 MHz，CD3OD)δ：5.25(1H，t，J=8.0 Hz，H-12)，3.18(1H，dd，J=4.4，10.8 Hz，H-18)，1.14(3H，s，H-26)，1.00(3H，br s，H-30)，0.99(3H，br s，H-23)，0.98(3H，br s，H-27)，0.91(3H，d，J=4.0 Hz，H-29)，0.87(3H，s，H-25)，0.80(3H，s，H-24)；13C NMR(125 MHz，CD3OD)δ：181.7(C-28)，139.6(C-13)，126.9(C-12)，79.7(C-3)，56.7(C-5)，54.4(C-18)，34.3(C-7)，31.8(C-21)，29.2(C-15)，28.8(C-23)，27.9(C-2)，25.3(C-16)，24.3(C-29)，24.0(C-27)，21.6(C-30)，19.5(C-6)，17.6(C-11)，17.7(C-26)。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)[7]報(bào)道一致，鑒定該化合物為熊果酸。

3.2 化合物2 無色針狀結(jié)晶，易溶于氯仿。1H NMR(400 MHz，CDCl3)δ：5.35(1H，m，H-6)，3.52(1H，m，H-3)，1.00(3H，s，H-19)，0.91(3H，d，J=6.4 Hz，H-21)，0.86(3H，t，J=6.4 Hz，H-29)，0.84(3H，d，J=6.6 Hz，H-26)，0.82(3H，d，J=6.6 Hz，H-27)，0.66(3H，s，H-18)。與豆甾醇對照品共薄層，在3種溶劑系統(tǒng)下展開行為一致，鑒定該化合物為豆甾醇。

3.3 化合物3 無色結(jié)晶，易溶于氯仿、甲醇。ESI-MSm/z443 [M+Na]+；1H NMR(400 MHz，CDCl3)δ：6.90(2H，d，J=2.0 Hz，H-5，5′)，6.88(2H，s，H-1，1′)，6.83(2H，dd，J=1.6，8.2 Hz，H-2，2′)，4.74(2H，d，J=3.6 Hz，H-7，7′)，4.25(2H，m，H-9α，9α′)，3.98(6H，m，4，4′-OCH3)，3.91(6H，s，H-9β，9β′)，3.10(2H，m，H-8，8′)；13C NMR(125 MHz，CDCl3)δ：146.7(C-4，4′)，145.2(C-3，3′)，132.9(C-6，6′)，119.0(C-1，1′)，114.3(C-2)，108.6(C-5，5′)，85.9(C-7，7′)，71.7(C-9，9′)，56.0(4，4′-OCH3)，54.2(C-8，8′)。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)[8-9]報(bào)道一致，鑒定該化合物為松脂素。

3.4 化合物4 白色固體，易溶于氯仿。ESI-MSm/z261 [M+Na]+；1H NMR(400 MHz，CDCl3)δ：5.02(1H，s，H-15)，4.74(1H，s，H-15)，3.71(1H，t，J=9.6 Hz，H-6)，3.42(1H，dd，J=4.7，11.5 Hz，H-1)，2.33(1H，m，H-3a)，2.24(1H，m，H-11)，2.06(1H，m，H-3b)，1.91(1H，m，H-9a)，1.86(1H，m，H-2b)，1.74(1H，d，J=9.9 Hz，H-5)，1.55(1H，m，H-2a)，1.52(1H，m，H-8b)，1.30(1H，m，H-7)，1.27(1H，m，H-8a)，1.21(1H，m，H-9b)，0.95(3H，d，J=7.0 Hz，H-12)，0.86(3H，d，J=7.0 Hz，H-13)，0.70(3H，s，H-14)；13C NMR(125 MHz，CDCl3)δ：146.2(C-4)，107.8(C-15)，79.0(C-1)，67.0(C-6)，55.9(C-5)，49.3(C-7)，41.7(C-10)，36.3(C-9)，35.1(C-3)，31.9(C-2)，26.0(C-11)，21.1(C-12)，18.1(C-8)，16.2(C-13)，11.6(C-14)。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)[10]報(bào)道一致，鑒定該化合物為ent-eudesm-4(15)-ene-1β，6α-diol。

3.5 化合物5 無色針狀結(jié)晶，易溶于氯仿。ESI-MSm/z413[M+Na]+；1H NMR(400 MHz，CDCl3)δ：5.16(2H，m，H-7，22)，5.02(1H，dd，J=8.6，15.2 Hz，H-23)，3.60(1H，m，H-3)，1.03(3H，d，J=7.4 Hz，H-21)；13C NMR(125MHz，CDCl3)δ：139.6(C-8)，138.2(C-22)，129.4(C-23)，117.5(C-7)，71.1(C-3)，55.9(C-17)，55.1(C-14)，51.3(C-24)，49.5(C-9)，43.3(C-13)，40.9(C-20)，40.3(C-5)，39.5(C-12)，38.0(C-4)，37.2(C-1)，34.2(C-10)，31.9(C-25)，31.5(C-2)，29.6(C-6)，28.5(C-16)，25.4(C-28)，23.0(C-15)，21.6(C-11)，21.4(C-21)，21.1(C-27)，19.0(C-26)，13.1(C-19)，12.3(C-29)，12.1(C-18)。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)[11]報(bào)道一致，確定該化合物為波甾醇。

3.6 化合物6 無色針狀結(jié)晶，易溶于甲醇。ESI-MSm/z193[M-H]-；1H NMR(400 MHz，CD3OD)δ：7.58(1H，d，J=16.2 Hz，β-H)，7.12(1H，H-2)，7.03(1H，H-6)，6.81(1H，d，J=8.0 Hz，H-5)，6.30(1H，d，J=15.7 Hz，α-H)，3.86(3H，s，3-OCH3)；13C NMR(125 MHz，CD3OD)δ：171.3(C=O)，150.3(C-4)，147.0(C-α)，149.3(C-3)，127.8(C-1)，124.0(C-6)，11.7(C-β)，116.5(C-5)，116.0(C-2)，56.5(OCH3)。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)[12]報(bào)道一致，鑒定該化合物為阿魏酸。

3.7 化合物7 淡黃色粉末，易溶于甲醇。ESI-MSm/z331[M+H]+；1H NMR(500MHz，CD3OD)δ：8.22(1H，d，J=2.2 Hz，H-2′)，7.78(1H，dd，J=2.2，8.4 Hz，H-6′)，7.32(1H，d，J=8.4 Hz，H-5′)，6.83(1H，d，J=2.1 Hz，H-8)，6.68(1H，d，J=2.1 Hz，H-6)，3.91(3H，s，7-OCH3)，3.81(3H，s，3-OCH3)；13C NMR(125 MHz，CD3OD)δ：176.1(C-4)，164.8(C-7)，162.5(C-9)，160.2(C-5)，155.5(C-2)，149.5(C-4′)，146.4(C-3′)，141.5(C-3)，123.0(C-1′)，122.0(C-6′)，116.4(C-2′，C-5′)，108.6(C-10)，97.1(C-6)，96.1(C-8)，60.2(7-OCH3)，56.4(3-OCH3)。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)[13]報(bào)道一致，鑒定該化合物為5，3′，4′-三羥基-3，7-二甲氧基黃酮。

3.8 化合物8 白色粉末，易溶于甲醇。ESI-MSm/z453[M-H]-；1H NMR(400 MHz，CD3OD)δ：6.07(1H，d，J=10.0 Hz，H-11)，5.61(1H，d，J=8.5 Hz，H-11)，3.21(1H，dd，J=6.5，10.0 Hz，H-3)，1.25(1H，s，H-27)，1.05(3H，d，J=7.5 Hz，H-29)，1.05(1H，s，H-25)，0.98(1H，s，H-26)，0.98(3H，d，J=6.0 Hz，H-30)，0.96(3H，s，H-23)，0.80(1H，s，H-24)；13C NMR(125 MHz，CD3OD)δ：182.6(C-28)，135.0(C-12)，129.9(C-11)，91.9(C-13)，79.5(C-3)，61.7(C-18)，56.0(C-5)，54.4(C-9)，46.6(C-17)，43.1(C-19)，43.0(C-14)，41.5(C-8)，40.0(C-4)，39.4(C-1)，39.2(C-20)，37.5(C-10)，32.4(C-22)，32.3(C-7)，31.7(C-21)，28.3(C-23)，27.7(C-2)，26.6(C-15)，23.9(C-16)，19.5(C-30)，19.4(C-25)，18.8(C-6)，18.4(C-26)，18.3(C-29)，15.6(C-24)。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)[14]報(bào)道一致，鑒定該化合物為烏蘇酸內(nèi)酯。

4 討論

本研究對白花敗醬石油醚萃取部位化學(xué)成分進(jìn)行研究，從中分離并鑒定了8個(gè)化合物，分別為熊果酸(化合物1)，豆甾醇(化合物2)，松脂素(化合物3)，ent-eudesm-4(15)-ene-1β，6α-diol(化合物4)，波甾醇(化合物5)，阿魏酸(化合物6)，5，3′，4′-三羥基-3，7-二甲氧基黃酮(化合物7)，烏蘇酸內(nèi)酯(化合物8)?；瘜W(xué)類型豐富，其中化合物3、化合物4、化合物5、化合物7、化合物8為首次從白花敗醬中分離得到。通過上述對化學(xué)成分的進(jìn)一步研究，有利于白花敗醬有效成分的尋找和進(jìn)一步闡明其藥理作用機(jī)制，可以為其深入研究提供參考。