豬用滅活疫苗回溫對(duì)比試驗(yàn)

寧慧波 魏國(guó)春 周克鋼于 朋

（1海博萊生物科技咨詢 （北京）有限公司，北京 100086；2中國(guó)農(nóng)業(yè)大學(xué)動(dòng)物醫(yī)學(xué)院，北京 100193）

近年來我國(guó)養(yǎng)豬業(yè)取得了重大發(fā)展，產(chǎn)業(yè)模式正處于深刻的變化之中，集約化、規(guī)?；潭冗M(jìn)一步提高，健康養(yǎng)殖、肉品安全也受到越來越多的關(guān)注。在我國(guó)，疾病仍是制約養(yǎng)豬生產(chǎn)的重要因素之一。除了做好豬群的飼養(yǎng)管理、生物安全和保健等工作外，還要對(duì)豬群進(jìn)行免疫接種，提高豬群抵抗外界疾病的能力，使得豬群能夠健康成長(zhǎng)。不同的豬場(chǎng)應(yīng)根據(jù)當(dāng)?shù)亓餍胁W(xué)調(diào)查情況及其他因素，制定合理的免疫程序。當(dāng)然，豬群免疫接種成功與否受多種因素的影響，其中包括疫苗的科學(xué)使用。滅活疫苗的儲(chǔ)存條件通常為2～8℃，科學(xué)回溫操作，降低注射應(yīng)激，是確保疫苗科學(xué)免疫的第一步。

1 回溫的概念

滅活疫苗通常儲(chǔ)存于2～8℃冰箱，將疫苗從冰箱中取出，放置室溫或水浴中讓疫苗溫度回升到30～35℃，以利于免疫注射。

2 回溫的目的

2.1 減少冷刺激

滅活疫苗的儲(chǔ)存溫度（通常2～8℃）與動(dòng)物正常體溫（約38℃）差距較大，對(duì)疫苗回溫可以大大減少對(duì)免疫動(dòng)物的冷刺激，尤其是對(duì)妊娠母豬及哺乳仔豬。

2.2 操作方便

疫苗佐劑種類繁多，其中油性及脂類佐劑黏度相對(duì)較大，一定溫度內(nèi)，其黏度隨著溫度升高而下降，回溫可提高疫苗通針性，提高免疫注射效率。

2.3 利于吸收，提升效果

滅活疫苗注射到肌肉內(nèi)，注射點(diǎn)通常會(huì)形成短時(shí)間的炎癥反應(yīng)，有的甚至?xí)纬捎矇K或腫塊?；販乜梢蕴嵘呙缱魟┑牧魃⑿裕蟠蠼档妥⑸洳课坏难装Y反應(yīng)的程度。同時(shí)促進(jìn)疫苗的吸收，進(jìn)一步提升疫苗效果。

3 回溫的程度

疫苗的溫度與動(dòng)物體溫差距越小，疫苗對(duì)機(jī)體的刺激就越小。在保證不損壞疫苗質(zhì)量的前提下，建議將疫苗回溫至30～35℃。

4 回溫的方法

4.1 手握回溫法

注射疫苗前，將疫苗放在手中，手握一會(huì)兒后注射，以減少疫苗對(duì)豬的刺激。但是此方法實(shí)際操作中可行性不高，一方面無法判定回溫的程度，另一方面在大批量回溫時(shí)也不具有可操作性。

4.2 自然回溫法

將疫苗放置于室溫下，讓其自然升高溫度。該方法受環(huán)境溫度、疫苗規(guī)格影響較大。環(huán)境溫度越高，回溫速度越快；但冬季北方室溫較低，不利于疫苗回溫；疫苗規(guī)格越大，回溫速度越慢。所以該方法對(duì)于不同室溫下不同規(guī)格的疫苗回溫難以進(jìn)行定量操作。

4.3 電熱恒溫法

通過恒溫箱控制面板設(shè)置溫度，保證箱內(nèi)溫度恒定，從冰箱取出疫苗放置于恒溫箱，利用加熱的循環(huán)空氣對(duì)疫苗進(jìn)行回溫。此方法相對(duì)室溫回溫法具有可量性與可控性。

4.4 恒溫水浴法

該方法適用于批量回溫，將水浴鍋調(diào)溫至回溫溫度，然后把疫苗放于鍋內(nèi)，利用加熱的水浴對(duì)疫苗進(jìn)行回溫。

5 回溫試驗(yàn)

5.1 材料與方法

5.1.1 材料

⑴滅活疫苗

疫苗A（20mL、100mL、250mL），疫苗B（20mL、100 mL），疫苗 C（20 mL、100 mL），疫苗 D（40 mL）；所有疫苗瓶均為塑料材質(zhì)。

⑵試驗(yàn)器械

恒溫箱，水浴鍋，溫度計(jì)，計(jì)時(shí)器。

5.1.2 方法

將疫苗從冰箱（5℃）取出，把溫度計(jì)插入疫苗瓶，分別利用自然回溫法、電熱恒溫法、恒溫水浴法，觀測(cè)疫苗的溫度達(dá)到設(shè)定溫度所需要的時(shí)間。

5.2 試驗(yàn)結(jié)果

⑴不同規(guī)格及品種滅活疫苗在25℃室溫條件下自然回溫曲線，如圖1。

圖1 滅活疫苗25℃室溫自然回溫曲線圖

⑵不同規(guī)格及品種滅活疫苗在35℃電熱恒溫條件下回溫曲線，如圖2。

圖2 滅活疫苗35℃電熱恒溫回溫曲線圖

⑶不同規(guī)格及品種滅活疫苗在25℃恒溫水浴條件下回溫曲線，如圖3。

⑷不同規(guī)格及品種滅活疫苗在30℃恒溫水浴條件下回溫曲線，如圖4。

⑸不同規(guī)格及品種滅活疫苗在35℃恒溫水浴條件下回溫曲線，如圖5。

5.3 結(jié)果分析

結(jié)果顯示：疫苗回溫時(shí)間與包裝大小及回溫溫度有關(guān)，包裝越小、回溫溫度越高，則回溫時(shí)間越短。從3種回溫方式對(duì)比來看：25℃室溫條件下自然回溫方式回溫速度最慢，對(duì)于包裝較大的疫苗，回溫至室溫的時(shí)間要超過6個(gè)小時(shí)。25℃條件下，恒溫水浴比室溫自然回溫方式回溫速度要快5～6倍。35℃條件下，恒溫水浴比電熱恒溫方式回溫速度約快1倍。從4種疫苗對(duì)比來看，由于4種疫苗選用不同的佐劑，回溫時(shí)間疫苗A＞疫苗B＞疫苗C＞疫苗D，但同等包裝的A、B、C 3種疫苗回溫時(shí)間差異并不顯著。從回溫曲線趨勢(shì)來看，疫苗溫度在回溫前期上升得較快，離回溫溫度5℃時(shí)，曲線呈快速上升趨勢(shì)，表明回溫速度明顯下降。由于疫苗瓶導(dǎo)熱介質(zhì)的存在，較大包裝疫苗的最終溫度很難達(dá)到設(shè)定的溫度，一般離設(shè)定溫度有0.5～1℃的差距。

圖3 滅活疫苗25℃恒溫水浴回溫曲線圖

圖4 滅活疫苗30℃恒溫水浴回溫曲線圖

圖5 滅活疫苗35℃恒溫水浴回溫曲線圖

6 討論

近年來與疫苗頻繁打交道的養(yǎng)豬人，對(duì)佐劑越來越熟悉。佐劑從最初只在研發(fā)人員圈內(nèi)打轉(zhuǎn)的一個(gè)話題，變成了在養(yǎng)殖端也不得不關(guān)注的一個(gè)詞匯。它成了疫苗廠家宣傳產(chǎn)品的重點(diǎn)，也成了養(yǎng)殖戶選擇疫苗時(shí)，在抗原含量、純凈度和穩(wěn)定性之外要考慮的第4大因素。

佐劑是一種化學(xué)物質(zhì)，其與抗原物質(zhì)混合后，可以改變抗原物理性狀，延緩抗原釋放，延長(zhǎng)作用時(shí)間，從而更有效地刺激免疫系統(tǒng)[1-2]；刺激單核巨噬細(xì)胞和抗原呈遞細(xì)胞（APC）增強(qiáng)其對(duì)抗原的吞噬和遞呈能力[3-5]；刺激淋巴細(xì)胞增生和分化，從而增強(qiáng)和擴(kuò)大免疫應(yīng)答的效應(yīng)[6-7]；改變免疫反應(yīng)及抗體的產(chǎn)生類型[8]。總的來說，佐劑既是一種緩釋劑也是一種免疫增強(qiáng)劑，通過非特異性途徑增強(qiáng)機(jī)體免疫應(yīng)答，用于增強(qiáng)機(jī)體對(duì)特定疾病的免疫反應(yīng)。

佐劑的開發(fā)及利用主要圍繞以下幾點(diǎn)目的：一是增強(qiáng)高純度或重組抗原的免疫原性；二是減少達(dá)到有效免疫保護(hù)所需的抗原量和免疫次數(shù)；三是增強(qiáng)新生、老年以及免疫抑制豬群的免疫接種效果；四是作為抗原遞呈系統(tǒng)為免疫途徑的抗原吸收階段創(chuàng)造條件[9-10]。

動(dòng)物疫苗佐劑的種類包括礦物油、植物油、氫氧化鋁、多聚合成樹脂、左旋咪唑[11-12]、維生素E、蜂膠、人參皂苷[13-16]等。部分佐劑如礦物油、植物油、氫氧化鋁等，其本身不具有免疫原性，更多的起到延緩抗原釋放的作用。常見液態(tài)佐劑可分為水性佐劑和油性佐劑，人參皂苷為新型水性佐劑，油性佐劑包括水包油型（O/W）、油包水型（W/O）、水包油包水型（W/O/W）和油包水包油型（O/W/O）。如果從通針性和免疫刺激角度來看，水性佐劑要優(yōu)于油性佐劑。

佐劑的選擇取決于疫苗的種類和特定疾病的防控要求。由于不同的微生物抗原性大相徑庭，因此對(duì)佐劑的要求也不同，比如細(xì)小病毒有較強(qiáng)的抗原性，其免疫力將持續(xù)很長(zhǎng)時(shí)間，對(duì)佐劑無特殊要求；而豬肺炎支原體免疫原性較弱，臨床感染早、發(fā)病進(jìn)程長(zhǎng)，因此對(duì)佐劑的要求也更高，通常需要特殊佐劑甚至是復(fù)合或多重佐劑來提高抗原的緩釋作用并增強(qiáng)豬體的非特異性免疫力；由于豬群中大腸桿菌和波氏桿菌的廣泛存在，其引發(fā)的仔豬早發(fā)性腹瀉和萎縮性鼻炎給臨床生產(chǎn)帶來很大的損失。通常給生產(chǎn)母豬產(chǎn)前接種疫苗，依靠母源抗體保護(hù)仔豬。為了進(jìn)一步提升母源抗體的水平，通過人參皂苷和氫氧化鋁這種組合佐劑的使用，來獲得更佳的細(xì)胞和體液免疫反應(yīng)[17-20]。

盡管佐劑具有增強(qiáng)免疫的作用，但其同時(shí)也具有一定副作用。尤其對(duì)于一些油性佐劑，一方面其在低溫的條件下較為粘稠，另一方面其在緩慢釋放抗原的同時(shí)會(huì)引發(fā)注射部位局部性刺激，如疼痛、炎癥、腫脹、壞死、潰瘍等，同時(shí)也會(huì)包括系統(tǒng)性的刺激，如發(fā)燒、過敏反應(yīng)等，從而導(dǎo)致豬只精神沉郁、采食量下降、甚至流產(chǎn)現(xiàn)象的發(fā)生。對(duì)于注射部位形成膿包或壞死的豬，其肉質(zhì)也會(huì)受到影響。所以臨床使用疫苗時(shí)，建議先采取疫苗回溫操作，降低疫苗的冷刺激及降低佐劑的粘稠性，同時(shí)使得抗原與佐劑混合得更均勻，更好地增加抗原的表面積，從而提升疫苗的免疫效果。

傳導(dǎo)、對(duì)流、輻射是熱傳導(dǎo)的3種形式。熱傳導(dǎo)速度快慢與導(dǎo)熱介質(zhì)和受熱物體的大小有關(guān)。導(dǎo)熱介質(zhì)按照導(dǎo)熱性能來對(duì)比，液體（水）＞空氣，所以試驗(yàn)中同等溫度（35℃）條件下，恒溫水浴回溫速度快于恒溫箱回溫，并且疫苗包裝越大，回溫時(shí)間差別越大。

目前養(yǎng)豬越來越規(guī)模化，疾病也越來越復(fù)雜化，要想更好防控豬病，必須科學(xué)合理使用疫苗。滅活疫苗的回溫操作，是確保疫苗科學(xué)使用的第一步。本試驗(yàn)中詳細(xì)對(duì)比了3種回溫方式。結(jié)果表明水浴回溫速度最快，不同佐劑疫苗的回溫速度差距并不明顯。為了實(shí)行統(tǒng)一的標(biāo)準(zhǔn)化操作，提高回溫效率，減少外界壞境溫度及人為經(jīng)驗(yàn)的影響，建議采用35℃恒溫水浴對(duì)滅活疫苗進(jìn)行回溫，對(duì)于20～40 mL包裝的疫苗建議回溫15～20 min，100 mL包裝的疫苗建議回溫45～50 min，250 mL及以上包裝的疫苗建議回溫時(shí)間超過100 min。