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    復(fù)合型β-甘露聚糖酶的開發(fā)及其對(duì)斷奶仔豬生長性能和血清生化指標(biāo)的影響

    2019-03-13 09:35:00余璐璐宋全芳張廣民孟慶剛黃雪石
    飼料工業(yè) 2019年4期
    關(guān)鍵詞:聚糖中性酸性

    ■余璐璐 宋全芳 嚴(yán) 峰 張廣民 孟慶剛 黃雪石

    (1.天津挑戰(zhàn)博德生物技術(shù)有限公司,天津 301900;2.天津博菲德生物科技有限公司,天津 301900;3.阜新蒙古族自治縣阜新鎮(zhèn)動(dòng)物衛(wèi)生監(jiān)督所,遼寧阜新 123100;4.阜新蒙古族自治縣獸藥飼料畜產(chǎn)品安全監(jiān)測(cè)所,遼寧阜新 123100)

    近年來由于畜禽養(yǎng)殖中抗生素的濫用,造成畜禽體內(nèi)藥物殘留、腸道微生態(tài)的破壞,畜禽免疫力的降低等,特別是畜禽產(chǎn)品中的藥物殘留問題,對(duì)人體健康產(chǎn)生巨大威脅,而純生物制劑產(chǎn)品——酶制劑作為抗生素的替代產(chǎn)品,已經(jīng)成為當(dāng)今飼料工業(yè)中應(yīng)用較為廣泛的一類產(chǎn)品。

    β-甘露聚糖酶是一種以內(nèi)切方式降解甘露聚糖的水解酶,屬于半纖維素酶類。畜禽動(dòng)物體內(nèi)不含消化甘露聚糖的消化酶系,在飼料中添加β-甘露聚糖酶能夠降解植物性飼料原料中的抗?fàn)I養(yǎng)成分,促進(jìn)畜禽生長性能的提升[1],而且其產(chǎn)生的甘露寡糖(MOS)可以調(diào)節(jié)畜禽腸道內(nèi)的微生態(tài)平衡,促進(jìn)腸道健康[2]。當(dāng)前對(duì)β-甘露聚糖酶的應(yīng)用開發(fā)主要有動(dòng)物試驗(yàn)和體外消化試驗(yàn)(胃蛋白酶-胰酶兩步法),因體外消化試驗(yàn)時(shí)間周期短,效果穩(wěn)定等優(yōu)點(diǎn)因此普遍應(yīng)用在產(chǎn)品的前期篩選中。本研究旨在通過體外仿生消化法對(duì)酸性及中性β-甘露聚糖酶的不同活力組合進(jìn)行篩選開發(fā)出復(fù)合型β-甘露聚糖酶,并驗(yàn)證其對(duì)斷奶仔豬生長性能及血清生化指標(biāo)的影響,為β-甘露聚糖酶在斷奶仔豬上的應(yīng)用提供參考。

    1 材料與方法

    1.1 材料與儀器

    酸性和中性β-甘露聚糖酶及酶活力檢測(cè)方法均由天津挑戰(zhàn)博德生物技術(shù)有限公司提供;單胃動(dòng)物仿生消化系統(tǒng)(SDS-Ⅲ),湖南中本智能科技發(fā)展有限公司。

    1.2 試驗(yàn)設(shè)計(jì)

    體外仿生消化試驗(yàn)采用單因素試驗(yàn)設(shè)計(jì),共分為6個(gè)組別(酸性、中性β-甘露聚糖酶的總添加活性4 U/g),對(duì)照組為不加酶組,5個(gè)加酶組,酸性與中性β-甘露聚糖酶活力比例分別為0∶100、25∶75、50∶50、75∶25、100∶0,消化底物為試驗(yàn)基礎(chǔ)日糧,每個(gè)組別5個(gè)重復(fù),每個(gè)重復(fù)1根消化管。消化結(jié)束后以DNS法檢測(cè)消化液中還原糖釋放量。胃緩沖液、小腸緩沖液及體外仿生消化法操作過程參照《一種飼料可消化碳水化合物總量的仿生消化測(cè)定方法》[3]進(jìn)行配制及操作。

    動(dòng)物試驗(yàn)于挑戰(zhàn)集團(tuán)安慶豬場(chǎng)進(jìn)行,選取剛斷奶的杜長大三元雜交健康仔豬300頭(體重?zé)o顯著差異,斷奶日齡相差不超過3 d),公母混合,隨即分到4個(gè)處理中,添加復(fù)合型β-甘露聚糖酶活力分別為0、2 000、4 000、6 000 U/kg,每個(gè)處理5個(gè)重復(fù),每個(gè)重復(fù)15頭豬,試驗(yàn)開始前進(jìn)行7 d預(yù)飼,正式試驗(yàn)時(shí)間為28 d。試驗(yàn)基礎(chǔ)日糧參照 NRC(1998)營養(yǎng)需求推薦及飼養(yǎng)標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行配制,日糧組成及營養(yǎng)水平見表1。

    表1 基礎(chǔ)日糧組成及營養(yǎng)水平(風(fēng)干基礎(chǔ))

    1.3 飼養(yǎng)管理及測(cè)定指標(biāo)

    按照試驗(yàn)豬場(chǎng)的飼養(yǎng)管理規(guī)程及免疫程序進(jìn)行飼養(yǎng),分別于試驗(yàn)第1 d和28 d清晨進(jìn)行空腹稱重,以重復(fù)為單位,記錄每日的耗料量;自由采食和飲水,每天觀察記錄仔豬的腹瀉狀況,通過記錄試驗(yàn)期間飼料消耗及體重計(jì)算出仔豬的平均日增重、平均日采食量和料重比。

    分別于試驗(yàn)第1 d和28 d稱重后,每欄隨機(jī)挑選公母豬各1頭,前腔靜脈采血(不加抗凝劑),4 000 r/min離心10 min分離血清,-20℃保存待測(cè)。根據(jù)試劑盒(羅氏公司提供)說明,用羅氏cobas?c 311全自動(dòng)生化分析儀測(cè)定血清中血糖(GLU)、尿素氮(UN)、白蛋白(ALB)、總蛋白(TP)、免疫球蛋白A(IgA)和免疫球蛋白G(IgG)的含量。

    1.4 統(tǒng)計(jì)分析

    試驗(yàn)數(shù)據(jù)用SPSS 16.0統(tǒng)計(jì)軟件中的單因素方差分析法進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析,結(jié)果用“平均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)誤”表示。

    2 結(jié)果

    2.1 復(fù)合型β-甘露聚糖酶不同比例組合對(duì)還原糖釋放量的影響(見表2)

    表2 復(fù)合型β-甘露聚糖酶對(duì)還原糖釋放量的影響

    由表2結(jié)果可知,添加β-甘露聚糖酶能顯著促進(jìn)仔豬日糧的還原糖釋放量,且顯著高于對(duì)照組(P<0.05);同時(shí)發(fā)現(xiàn),酸性與中性β-甘露聚糖酶的不同比例組合對(duì)還原糖釋放量的效果均高于單酶添加效果,說明二者之間存在協(xié)同增效效應(yīng);酸性與中性β-甘露聚糖酶 0∶100、25∶75、50∶50、75∶25、100∶0的比例添加與不加酶組相比提高量分別為3.36%、5.30%、7.64%、6.79%、4.78%,結(jié)果表明,酸性與中性β-甘露聚糖酶活力比例為50∶50時(shí),對(duì)還原糖釋放提高量最為明顯,所以在乳仔豬動(dòng)物試驗(yàn)酸性與中性β-甘露聚糖酶酶活添加比例以50∶50進(jìn)行。

    2.2 復(fù)合型β-甘露聚糖酶對(duì)斷奶仔豬生長性能的影響(見表3)

    表3 復(fù)合型β-甘露聚糖酶對(duì)斷奶仔豬生長性能的影響

    根據(jù)體外仿生消化試驗(yàn)結(jié)果,斷奶仔豬試驗(yàn)中酸性與中性β-甘露聚糖酶活力組成以50∶50進(jìn)行添加。由表3可知,添加一定量的復(fù)合型β-甘露聚糖酶能夠改善斷奶仔豬的生長性能,4 000 U/kg復(fù)合型β-甘露聚糖酶和6 000 U/kg復(fù)合型β-甘露聚糖酶與對(duì)照相比,能顯著提高斷奶仔豬末重、日均采食量、日增重(P<0.05);2 000 U/kg復(fù)合型β-甘露聚糖酶與對(duì)照相比,對(duì)斷奶仔豬末重、日均采食量、日增重均無明顯差異(P>0.05);β-甘露聚糖酶的不同添加水平對(duì)料重比均無明顯影響(P>0.05);同時(shí)發(fā)現(xiàn),2 000、4 000、6 000 U/kg三種劑量添加均能顯著降低仔豬腹瀉(P<0.05)。

    2.3 復(fù)合型β-甘露聚糖酶對(duì)斷奶仔豬血清生化指標(biāo)的影響(見表4)

    表4 復(fù)合型β-甘露聚糖酶對(duì)斷奶仔豬血清生化參數(shù)的影響

    由表4可見,與對(duì)照組相比,在試驗(yàn)第28 d時(shí)日糧添加4 000、6 000 U/kg復(fù)合型β-甘露聚糖酶顯著增加了斷奶仔豬血清中GLU和TP含量(P<0.05);但添加不同劑量的復(fù)合型β-甘露聚糖酶對(duì)斷奶仔豬血清中ALB、UN、IgA和IgG含量無顯著差異(P>0.05)。與添加2 000 U/kg復(fù)合型β-甘露聚糖酶相比,在試驗(yàn)第28 d時(shí)日糧添加4 000 U/kg和6 000 U/kg復(fù)合型β-甘露聚糖酶對(duì)斷奶仔豬血清中血糖有增加的趨勢(shì),且有顯著性差異(P<0.05)。其他各組間無顯著差異(P>0.05)。

    3 討論

    3.1 復(fù)合型β-甘露聚糖酶體外作用效果評(píng)估

    近年來飼料酶制劑的體外評(píng)估已取得一定的進(jìn)展,趙敏(2007)以“胃蛋白酶-胰液素”體外消化法評(píng)估NSP酶對(duì)畜禽日糧的作用效果,結(jié)果表明NSP酶對(duì)畜禽日糧代謝能具有明顯的遞增效應(yīng)[4]。何科林(2012)利用體外消化法篩選出NSP酶在玉米-豆粕和玉米-小麥日糧中最適添加量及酶譜,在動(dòng)物試驗(yàn)中取得了較為理想的效果[5]。廖睿(2016)研究表明利用仿生消化法測(cè)定飼糧還原糖釋放量的方法可以有效地評(píng)估NSP酶的效果[6]。本研究體外仿生消化試驗(yàn)結(jié)果(見表2)也顯示,添加β-甘露聚糖酶對(duì)日糧還原糖釋放量提高量達(dá)3.36%以上,這也表明了β-甘露聚糖酶能夠提高畜禽對(duì)日糧的利用效率。畜禽的消化生理?xiàng)l件要求飼用酶制劑要同時(shí)適應(yīng)胃液中較強(qiáng)的酸性環(huán)境和小腸的中性環(huán)境才能發(fā)揮較好的作用效果,而β-甘露聚糖酶的較多的發(fā)酵菌種和表達(dá)系統(tǒng)來源導(dǎo)致其不同的酶學(xué)性質(zhì),包括最適pH值、等電點(diǎn)以及酶切位點(diǎn)等。歐陽海燕等(2017)發(fā)現(xiàn)不同菌種來源NSP酶的水解產(chǎn)物均有差異,且不同菌種來源NSP酶具有協(xié)同增效作用[7]。本研究發(fā)現(xiàn),復(fù)合型β-甘露聚糖酶對(duì)日糧還原糖釋放量的作用效果均高于單酶效果,表明了酸性與中性β-甘露聚糖酶具有協(xié)同增效的效果,且以50∶50復(fù)合情況下對(duì)還原糖釋放提高量最為明顯,達(dá)到了7.64%。

    3.2 甘露聚糖酶對(duì)乳仔豬生長性能及腹瀉率的影響

    β-甘露聚糖酶降低甘露聚糖等的抗?fàn)I養(yǎng)作用主要表現(xiàn)在破壞植物性飼料原料的細(xì)胞壁結(jié)構(gòu),使其包裹的營養(yǎng)物質(zhì)釋放出來;降低消化道內(nèi)的食糜黏度,有利于營養(yǎng)物質(zhì)的進(jìn)一步消化吸收;將甘露聚糖降解為甘露寡糖(MOS),提高畜禽免疫力,有利于腸道內(nèi)有益菌的增殖[8-10]。Pettey等(2002)研究表明,在仔豬日糧中添加β-甘露聚糖酶能顯著提高仔豬采食量,促進(jìn)仔豬日增重,提高豬的生長性能[11]。本試驗(yàn)在仔豬日糧中分別添加2 000、4 000、6 000 U/kg的復(fù)合型β-甘露聚糖酶均能提高其采食量、日增重,且對(duì)采食量、日增重的改善程度隨β-甘露聚糖酶添加量的增加而提高。李學(xué)儉(2012)研究表明在仔豬日糧中添加β-甘露聚糖酶能顯著降低仔豬腹瀉[12],而本研究中三種添加量的復(fù)合型β-甘露聚糖酶均能顯著降低仔豬腹瀉率,與現(xiàn)有研究結(jié)果是相一致的,這可能與甘露聚糖酶作用于日糧釋放出的甘露寡糖對(duì)畜禽體內(nèi)微生態(tài)平衡的調(diào)節(jié)有關(guān)。

    3.3 復(fù)合型β-甘露聚糖酶對(duì)斷奶仔豬血清生化指標(biāo)的影響

    血液生化參數(shù)可反映動(dòng)物機(jī)體的營養(yǎng)水平和健康狀況,其中血液中GLU是動(dòng)物機(jī)體主要的能量來源,其含量高低與動(dòng)物采食量、機(jī)體營養(yǎng)狀況和應(yīng)激水平呈正相關(guān),血漿TP和ALB含量可反映機(jī)體對(duì)蛋白質(zhì)的吸收和代謝狀況[13]。本試驗(yàn)中,日糧添加4 000、6 000 U/kg復(fù)合型β-甘露聚糖酶可顯著提高斷奶仔豬血清中血糖和總蛋白含量,這說明日糧添加β-甘露聚糖酶對(duì)改善斷奶仔豬對(duì)營養(yǎng)物質(zhì)的消化吸收利用能力有促進(jìn)作用,這與高玉紅等(2000)的研究結(jié)果基本一致[14]。血漿UN可反映機(jī)體蛋白質(zhì)合成或分解能力,其含量高低可用于評(píng)價(jià)動(dòng)物機(jī)體蛋白質(zhì)代謝和飼糧氨基酸的平衡狀況,IgA和IgG含量可反映動(dòng)物機(jī)體的免疫水平。本試驗(yàn)中,日糧添加不同劑量復(fù)合型β-甘露聚糖酶對(duì)仔豬血清中UN、IgA和IgG含量無顯著影響,但尿素氮有降低趨勢(shì),表明斷奶仔豬對(duì)蛋白質(zhì)的利用增強(qiáng),但呂秋鳳等(2011)研究表明日糧添加復(fù)合酶制劑可提高斷奶仔豬后期血清中IgA含量[15],這可能與酶的添加劑量、組成等有關(guān),其具體原因有待進(jìn)一步深入研究。

    4 結(jié)論

    ①將酸性β-甘露聚糖酶、中性β-甘露聚糖酶以50∶50的酶活比例組成的復(fù)合型β-甘露聚糖酶對(duì)仔豬日糧有最佳的作用效果;

    ②復(fù)合型甘露聚糖酶在仔豬日糧中的添加量在4 000~6 000 U/kg時(shí),能顯著提高仔豬的生長性能,降低仔豬腹瀉率,并顯著提高血清中血糖和總蛋白含量,促進(jìn)機(jī)體代謝。

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