遵義地區(qū)犬狂犬病毒血清抗體流行病學(xué)調(diào)查與大學(xué)生對(duì)該病的認(rèn)知情況分析

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狂犬病是世界上影響人類健康最古老的疾病之一，最早的記載見于4300年前美索不達(dá)米亞(古王國(guó)，在今伊拉克境內(nèi))的埃什努納(Eshnunna)法典[1]。該病是由狂犬病病毒(Rabies Virus， RV)引起的一種病毒性動(dòng)物傳染病，它發(fā)生在150多個(gè)國(guó)家和地區(qū)，病死率為100%，是全球不容忽視的公共衛(wèi)生問(wèn)題。據(jù)世界衛(wèi)生組織(World Health Organization，WTO)統(tǒng)計(jì)，全球每年由狂犬病導(dǎo)致的死亡人數(shù)約59 000人(CI:25 000-159 200)，大約每15 min就有一人因狂犬病而失去生命，每1 h就有1 000人接受暴露后治療，死亡病例中，36%位于非洲，60%位于亞洲，其中印度最多，占總數(shù)1/3，而中國(guó)則以每年約兩千人死亡數(shù)字位居第二[2-3]。雖然一些食肉動(dòng)物和蝙蝠種群是狂犬病毒的天然宿主，但全球95%的人狂犬病病例是由犬咬傷傳播感染[4]。

近年來(lái)，歐美國(guó)家及包括中國(guó)在內(nèi)的亞洲國(guó)家均開展過(guò)關(guān)于犬狂犬病病的血清流行病學(xué)調(diào)查，調(diào)查結(jié)果存在較大差異。目前，我國(guó)新疆[5]、四川[6]、呼和浩特[7]、南京[8]、廈門[9]等省市已有犬狂犬病血清學(xué)調(diào)查的文獻(xiàn)報(bào)道，但遵義地區(qū)犬狂犬病的感染情況未見文獻(xiàn)報(bào)道，因此，本試驗(yàn)開展有關(guān)犬狂犬病的流行病學(xué)調(diào)查，以了解本地區(qū)人群對(duì)狂犬病的認(rèn)識(shí)程度，摸清遵義地區(qū)犬狂犬病的流行情況，為本地區(qū)犬狂犬病的綜合防治及預(yù)警監(jiān)測(cè)提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。

1 材料與方法

1.1主要試驗(yàn)盒 RV生物素雙抗原夾心ELISA試劑盒(Canine RV-Ab ELISA KIT，10-77-138，201710)，購(gòu)自上海酶聯(lián)生物科技有限公司。

1.2問(wèn)卷調(diào)查 采用網(wǎng)絡(luò)問(wèn)卷(問(wèn)卷星)對(duì)遵義地區(qū)大學(xué)生開展有關(guān)狂犬病的社會(huì)問(wèn)卷調(diào)查，共收集647份有效問(wèn)卷，問(wèn)題涉及性別、年級(jí)、專業(yè)、犬狂犬病基本知識(shí)、犬咬傷后傷口處理措施等。

1.3血清樣品 采集及處理 2016年6月至2017年6月于遵義地區(qū)寵物醫(yī)院采集422份犬血清樣品，其中297份來(lái)自寵物犬，125份來(lái)自流浪犬，雄性占58.06%(245/422)，雌性占41.94%(177/422)。血液樣品經(jīng)3 000 r/min離心10 min后取血清于2 mL的EP管中，置于-20 ℃冰箱保存待用。并對(duì)犬的基本信息進(jìn)行歸納統(tǒng)計(jì)，包括犬品種、性別、年齡、既往病史、疫苗注射情況等。

1.4RV血清抗體檢測(cè) 血清樣品采用ELISA試劑盒檢測(cè)RV抗體，根據(jù)說(shuō)明書要求操作。每板設(shè)陰性對(duì)照2孔、陽(yáng)性對(duì)照2孔、空白對(duì)照1孔。以空白對(duì)照調(diào)零，在450 nm波長(zhǎng)依序測(cè)量各孔的吸光度(OD450值)。結(jié)果判定：試驗(yàn)有效性：陽(yáng)性對(duì)照孔平均值≥1.00; 陰性對(duì)照平均值≤0.10，臨界值計(jì)算：臨界值=陰性對(duì)照孔平均值+0.15，陰性判定：樣品OD450值<臨界值者為犬RV陰性，陽(yáng)性判定：樣品OD450值≥臨界值者為犬RV陽(yáng)性。

1.5數(shù)據(jù)分析 運(yùn)用SPSS24.0版比率分析不同變量置信區(qū)間，交叉表卡方檢驗(yàn)分析寵物犬、流浪犬以及犬性別之間RV抗體陽(yáng)性率是否存在差異，以P<0.05認(rèn)為差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié) 果

2.1犬血清來(lái)源信息統(tǒng)計(jì)結(jié)果 422份犬血清來(lái)源信息詳見表1、表2。調(diào)查發(fā)現(xiàn)，297例寵物犬中192例接種過(guò)狂犬疫苗、65例未接種狂犬疫苗、40例狂犬疫苗接種信息不詳，125例流浪犬免疫信息不詳。

2.2RV血清抗體檢測(cè)結(jié)果 RV血清抗體檢測(cè)結(jié)果顯示，犬RV血清抗體的總陽(yáng)性率為43.36%(183/536)，雄性陽(yáng)性率為41.63%(95%CI0.35-0.48)，雌性陽(yáng)性率為45.76%(95%CI0.38-0.53)，犬性別之間RV抗體陽(yáng)性率無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(χ2=0.714,P>0.05)；寵物犬RV抗體陽(yáng)性率為56.57%(95%CI0.51-0.62)，其中接種過(guò)狂犬疫苗的寵物犬其RV抗體陽(yáng)性率為77.08%(148/192)，未接種狂犬疫苗或接種信息不詳寵物犬RV抗體陽(yáng)性率為19.06%(20/105)，流浪犬RV抗體陽(yáng)性率為12%(95%CI0.06-0.18)，寵物犬RV抗體陽(yáng)性率顯著大于流浪犬(χ2=71.143,P<0.05)，詳見表3、表4。

2.3問(wèn)卷調(diào)查結(jié)果 本次調(diào)查共收集調(diào)查問(wèn)卷647份，其中，男性占44.36%(287/647)，女性占55.64%(360/647)，醫(yī)學(xué)類專業(yè)人數(shù)占61.67%(399/647)，非醫(yī)學(xué)類專業(yè)人數(shù)占38.33%(248/647)，調(diào)查人數(shù)性別與年級(jí)分布情況詳見圖1。

調(diào)查人群中，45.75%(296/647)的人曾被犬咬傷或抓傷過(guò)，傷人動(dòng)物犬中，自家寵物犬占34.12%(101/296)，他家寵物犬占57.43%(170/296)，流浪犬占5.07%(15/296)，不清楚者占3.38%(10/296)，詳見圖2。曾被犬咬傷或抓傷的調(diào)查者中，60.47%(179/296)的人認(rèn)為處理傷口的最佳方式是用肥皂水或清水徹底沖洗傷口，39.19%(116/296)的人認(rèn)為是采用酒精或碘伏消毒傷口，高達(dá)77.36%(229/296)的人認(rèn)為應(yīng)在24 h內(nèi)接種狂犬疫苗。

被調(diào)查者中當(dāng)被問(wèn)及犬接種狂犬疫苗后，被其咬傷的人是否有必要接種人用狂犬疫苗時(shí)，90.11%(583/647)的調(diào)查者認(rèn)為有必要、僅有4.95%(32/647)的認(rèn)為沒(méi)有必要、4.95%(32/647)不清楚。

表1 犬樣本基本信息統(tǒng)計(jì)表Tab.1 Statistical table of basic information of dog samples

表2 犬品種信息統(tǒng)計(jì)表Tab.2 Statistics table of dog variety information

表3 不同性別犬RV抗體陽(yáng)性率Tab.3 Positive rate of RV antibody in different sex dogs

表4 不同來(lái)源犬RV抗體陽(yáng)性率Tab.4 Positive rate of RV antibody in dogs from different sources

圖1 問(wèn)卷調(diào)查人數(shù)信息統(tǒng)計(jì)Fig.1 Information statistics table of questionnaire survey

圖2 被犬咬傷人數(shù)情況統(tǒng)計(jì)表Fig.2 Statistics on the number of bites by dogs

3 討 論

3.1遵義地區(qū)RV血清學(xué)調(diào)查 本次調(diào)查共收集犬血清422份，422份血清來(lái)源犬中貴賓、雪納瑞、博美分別占35.07%(148/422)、12.32%(52/422)、10.66%(45/422)，3種小型犬種共占58.06%(245/422)，由此可見，小型犬種深受遵義地區(qū)寵物主喜愛。犬血清RV抗體檢測(cè)發(fā)現(xiàn)，RV抗體總陽(yáng)性率為40%(12/536)，寵物犬、流浪犬、雄性犬、雌性犬的RV抗體陽(yáng)性率分別為56.57%(168/297)、12%(15/125)、41.63%(102/245)、45.76%(81/177)，犬性別與RV抗體陽(yáng)性差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P=0.398)，寵物犬與流浪犬RV抗體陽(yáng)性差異存在統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P=0.001)，調(diào)查結(jié)果與國(guó)內(nèi)某些省市陽(yáng)性率相比，高于廣州(59.05%)[10]、廣西(67.57%)[11]、雅安(77.68%)[12]，低于新疆(55.53%)[13]、長(zhǎng)沙(65.4%)[14]，與國(guó)外調(diào)查結(jié)果相比存在差異，例如，Kartskhia[15]等調(diào)查發(fā)現(xiàn)，格魯吉亞地區(qū)犬RV抗體陽(yáng)性率高達(dá)98.3%(237/241)，其狂犬疫苗覆蓋率達(dá)65%(373/572)；Peres等[16]檢測(cè)發(fā)現(xiàn)巴西圣保羅州農(nóng)村地區(qū)51只犬中，68%的犬RV抗體滴度處于保護(hù)水平(≥0.5 UI/mL)，32%的犬低于保護(hù)水平；Pimburage等[17]對(duì)斯里蘭卡卡魯塔拉區(qū)510例犬肌肉接種單價(jià)RV滅活疫苗，在接種后0 d，30 d，180 d，360 d采用RFFIT進(jìn)行RV抗體檢測(cè)，結(jié)果發(fā)現(xiàn)，單劑量的狂犬疫苗不能使40.42%的流浪狗與57.14%未接種過(guò)疫苗的幼年犬產(chǎn)生免疫保護(hù)水平的抗體滴度，犬只有在多次疫苗接種后才能使抗體滴度高于保護(hù)水平；Saeki等[18]對(duì)日本216只幼犬(<91 d)進(jìn)行RV抗體檢測(cè)，結(jié)果顯示，216只幼犬中僅有34只超過(guò)中和抗體效價(jià)的8倍，如忽略母源抗體存在的可能，幼犬單劑量的疫苗免疫不能使抗體效價(jià)達(dá)到持續(xù)或足夠的水平；我國(guó)蔣碧美等[19]研究發(fā)現(xiàn)，犬全年免疫一次狂犬疫苗的抗體合格率達(dá)不到WHO推薦的標(biāo)準(zhǔn)(全年維持在70%以上)，而實(shí)行春秋兩季2次免疫，能有效提高犬RV的抗體保護(hù)水平。由此可知，犬進(jìn)行狂犬疫苗接種后，部分犬不能產(chǎn)生免疫保護(hù)水平的抗體滴度，要使抗體效價(jià)達(dá)到足夠水平必須連續(xù)接種狂犬疫苗。檢測(cè)用犬的來(lái)源與檢測(cè)結(jié)果密切相關(guān)，此次調(diào)查犬血清標(biāo)本數(shù)僅為422例，檢測(cè)結(jié)果只能反映本次調(diào)查情況。

根據(jù)貴州統(tǒng)計(jì)年鑒顯示近兩年貴州狂犬病死亡人數(shù)僅為112人(2015年62人， 2016年50人)[20]，而本地區(qū)犬RV的總陽(yáng)性率高達(dá)43.36%(183/536)，如果高陽(yáng)性率表明犬高的狂犬病病毒感染率，而死亡人數(shù)與犬RV高陽(yáng)性率之間存在偏差，可能推測(cè)本地區(qū)犬RV抗體陽(yáng)性率要明顯低于43.36%，因?yàn)閷櫸锶形唇臃N狂犬疫苗或接種信息不詳?shù)娜?RV陽(yáng)性率為19.06%)與流浪犬(RV陽(yáng)性率為12%)的陽(yáng)性率很可能是與RV疫苗免疫有關(guān)，寵物犬中疫苗接種信息不詳不代表其實(shí)際未進(jìn)行過(guò)RV疫苗免疫，且由于流浪犬RV免疫背景無(wú)法知曉，在成為流浪犬之前寵物主也可能已經(jīng)對(duì)其進(jìn)行過(guò)RV疫苗免疫。

3.2問(wèn)卷調(diào)查分析 問(wèn)卷調(diào)查發(fā)現(xiàn)，647人中曾被犬咬傷或抓傷的占45.75%(296/647)，其中，91.55%(271/296)的人是被寵物犬所傷，8.45%(25/296)的人被流浪犬或不明身份犬所傷，說(shuō)明寵物犬是仍然是傳播RV的一個(gè)嚴(yán)重威脅。647人中77.28%(500/647)的人認(rèn)為實(shí)驗(yàn)過(guò)程中被犬咬傷或抓傷最有可能患狂犬病，56.41%(365/647)的人知道被犬咬傷或抓傷應(yīng)立即使用肥皂水或清水徹底沖洗傷口，75.89%(491/647)的人知道RV主要入侵人體的神經(jīng)系統(tǒng)，77.43%(501/647)的人認(rèn)為被犬咬傷后應(yīng)在24 h以內(nèi)進(jìn)行狂犬疫苗接種，說(shuō)明在校大學(xué)生對(duì)狂犬病相關(guān)知識(shí)具有一個(gè)較高的認(rèn)知水平。

調(diào)查發(fā)現(xiàn)，39.41%(255/647)的寵物主未對(duì)其寵物犬進(jìn)行狂犬疫苗的免疫接種，這種情況對(duì)于人與犬狂犬病的預(yù)防是極為不利的，而在狂犬病多發(fā)的非洲國(guó)家，犬狂疫苗覆蓋率低，也是其狂犬病多發(fā)的原因之一。例如，非洲馬拉維每年因狂犬病發(fā)生死亡的人數(shù)接近500人，全國(guó)40萬(wàn)多只犬中，僅有0.5%的犬接種過(guò)狂犬疫苗[3, 21]；Garba[22]調(diào)查發(fā)現(xiàn)尼日利亞尼日爾州犬與人的比例為1∶5.4，該州732 476只犬中大約30.4%的犬從未接種過(guò)狂犬疫苗；坦桑尼亞?wèn)|部農(nóng)村社區(qū)人群中，以往的大規(guī)模疫苗接種運(yùn)動(dòng)只覆蓋了狗群的24.4%[23]。

3.3狂犬病的流行與控制 雖然狂犬病對(duì)公共健康造成嚴(yán)重威脅，但在亞洲和非洲國(guó)家，狂犬病仍然是一種易被忽視的疾病。家養(yǎng)犬是狂犬病控制的主要目標(biāo)，是RV傳播給人類和其他家畜的主要宿主，但在犬狂犬病疫情控制較好的歐洲、北美、澳大利亞及部分拉丁美洲國(guó)家狂犬病的傳染原為蝙蝠、狐、貓鼬、豺、狨猴和浣熊等野生動(dòng)物，而被犬咬傷患狂犬病死亡的病例十分罕見[24]，在美國(guó)犬已不是RV的主要宿主。美國(guó)2003年至2014年7月間僅報(bào)告了33例人類狂犬病死亡的病例，絕大多數(shù)是因?yàn)榻佑|了蝙蝠等野生動(dòng)物而導(dǎo)致的，2015年10月，一名77歲的懷俄明州居民因蝙蝠咬傷感染狂犬病而死亡，這是自2012年以來(lái)美國(guó)第1例國(guó)內(nèi)感染病例[25-26]。Klevar等[27]認(rèn)為搜救犬的跨境運(yùn)輸也可能導(dǎo)致狂犬病在歐洲的傳播，檢測(cè)發(fā)現(xiàn)從東歐進(jìn)口到挪威的搜救犬(已接種狂犬疫苗)53.33%(40/75)未能產(chǎn)生足夠的抗體滴度(≤0.5 IU/mL)。

海地是西半球人類與動(dòng)物狂犬病發(fā)病率最高的國(guó)家，由于獸醫(yī)準(zhǔn)入門檻較低、流浪犬較多、動(dòng)物福利水平較低等原因加劇了狂犬病的發(fā)生，Medley等[28]對(duì)海地2013年至2015年間的1 409只瘋狗進(jìn)行了回顧性的評(píng)價(jià)，實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)發(fā)現(xiàn)1 409只瘋狗中48只患有狂犬病，雖然對(duì)所有犬咬傷者進(jìn)行狂犬疫苗接種是減少人類狂犬病死亡的一種非常有效的方法，然而，這可能給遭受低風(fēng)險(xiǎn)暴露的受害者造成不必要的經(jīng)濟(jì)負(fù)擔(dān)，處方過(guò)量也會(huì)導(dǎo)致地區(qū)疫苗供應(yīng)短缺，特別是對(duì)于海地這樣一個(gè)資源短缺的國(guó)家。Schildecker等[29]對(duì)海地2005個(gè)寵物主人進(jìn)行流行病學(xué)調(diào)查，調(diào)查發(fā)現(xiàn)，超過(guò)50%的犬處于放養(yǎng)狀態(tài)，超過(guò)80%的犬主人在為他們的犬咨詢狂犬疫苗接種時(shí)遇到困難，32%的犬在調(diào)查前一年發(fā)生死亡，死亡的犬中18%的犬與狂犬病的癥狀一致，人被犬咬傷十分常見，超過(guò)3%的受訪者在調(diào)查前一年被犬咬傷過(guò)。

世界動(dòng)物衛(wèi)生組織(OIE)將狂犬病列為法定報(bào)告的B類動(dòng)物疫病，目前控制該病的方法主要是向動(dòng)物咬傷者提供有效的暴露后預(yù)防(PEP)，而全球每年因狂犬病而造成的經(jīng)濟(jì)損失高達(dá)86億美元，其中大量資金用于狂犬病暴露人群狂犬病疫苗與免疫球蛋白的注射[30]。2015年12月，WTO、OIE、FAO等組織在瑞士日內(nèi)瓦招開了支持全球狂犬病控制聯(lián)盟(GARC)的重要國(guó)際會(huì)議，制定了消除犬介導(dǎo)的人類狂犬病的框架性協(xié)議，以確保2030年實(shí)現(xiàn)消除狂犬病的目標(biāo)[31]。孟加拉政府已貫徹實(shí)施4種積極策略以保證消除狂犬?。盒麄?、溝通和社會(huì)動(dòng)員、狗咬傷后的現(xiàn)代治療、犬大規(guī)模疫苗接種和犬的種群管理[32]；2010年，在比爾蓋茨和梅琳達(dá)基金會(huì)的支持下，菲律賓維沙揚(yáng)群島開始了狂犬病的清除項(xiàng)目，研究表明對(duì)犬進(jìn)行大規(guī)模的疫苗接種比對(duì)在人身上進(jìn)行治療更具成本效益[33]。

控制和消滅狂犬病不單是一個(gè)純粹的醫(yī)學(xué)問(wèn)題，也是一個(gè)社會(huì)經(jīng)濟(jì)、政治、動(dòng)物福利問(wèn)題，世界范圍內(nèi)消滅狂犬病需要各個(gè)國(guó)家的共同努力，2030年才能實(shí)現(xiàn)消滅狂犬病的目標(biāo)。

利益沖突：無(wú)