黃體酮聯(lián)合間苯三酚對先兆流產(chǎn)患者SOCS3 表達(dá)及圍生兒結(jié)局的影響

趙駿達(dá) 郭春鳳 馬俊旗

新疆醫(yī)科大學(xué)第一附屬醫(yī)院婦科，新疆烏魯木齊 830011

先兆流產(chǎn)是孕婦常見的病理妊娠癥，先兆流產(chǎn)的發(fā)生因素眾多，工作壓力、生活壓力、遺傳、孕婦身體狀況及環(huán)境都可引發(fā)，近年來先兆流產(chǎn)的發(fā)生率有升高的趨勢［1］。臨床上通常采用一些激素類藥物進(jìn)行治療，黃體酮能夠補(bǔ)充孕激素，有效阻止早期流產(chǎn)或先兆流產(chǎn)的發(fā)生［2-3］。間苯三酚是一種親肌性、非阿托品、非罌粟堿類純平滑肌解痙藥，可抑制孕期子宮收縮且不良反應(yīng)較少［4］。細(xì)胞因子信號轉(zhuǎn)導(dǎo)負(fù)調(diào)控因子3（suppressors of cytokine signaling 3，SOCS3）是一種參與機(jī)體多種生理調(diào)節(jié)反應(yīng)的蛋白質(zhì)分子，能夠促進(jìn)滋養(yǎng)細(xì)胞及T 細(xì)胞的增殖分化，對于正常妊娠具有十分重要的作用［5］。但臨床上，黃體酮聯(lián)合間苯三酚治療先兆流產(chǎn)對患者SOCS3 及圍生兒結(jié)局影響的探究較少［6］。因此，本研究觀察黃體酮聯(lián)合間苯三酚治療先兆流產(chǎn)患者的臨床效果，分析患者SOCS3 表達(dá)及圍生兒結(jié)局，以期為先兆流產(chǎn)的臨床治療提供依據(jù)。

1 資料與方法

1.1 一般資料

選取2015 年6 月～2017 年6 月新疆醫(yī)科大學(xué)第一附屬醫(yī)院（以下簡稱“我院”）婦科就診的先兆流產(chǎn)患者94 例，依照隨機(jī)數(shù)表法將其分為觀察組和對照組，每組47 例。觀察組年齡21～37 歲，平均（28.7±3.3）歲；孕次1～5 次，平均（2.8±0.2）次；孕齡6～13 周，平均（8.9±1.4）周。對照組年齡20～38 歲，平均（28.1±3.6）歲；孕次1～5 次，平均（2.6±0.2）次；孕齡6～12 周，平均（8.7±1.5）周。兩組年齡、孕次、孕齡等一般資料比較，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05），具有可比性。本研究經(jīng)我院醫(yī)學(xué)倫理委員會(huì)批準(zhǔn)，所有患者對研究內(nèi)容知情且簽署知情同意書，可以配合完成隨訪。

納入標(biāo)準(zhǔn)：①符合《婦產(chǎn)科學(xué)》［7］中先兆流產(chǎn)的診斷標(biāo)準(zhǔn)；②孕齡＜14 周；③臨床有下腹墜痛、腰痛、停經(jīng)后陰道出血等癥狀；④經(jīng)相關(guān)檢查為宮內(nèi)妊娠，停經(jīng)時(shí)間、子宮大小均正常，妊娠物無排出，胎膜未破，宮頸口未張開。排除標(biāo)準(zhǔn)：①肝腎功能異?；虼嬖谄渌髻|(zhì)性病變；②惡性腫瘤患者；③神經(jīng)體系、血液體系等系統(tǒng)性病變者；④存在宮內(nèi)發(fā)育遲緩、胎盤早剝及感染患者；⑤習(xí)慣性流產(chǎn)患者。

1.2 方法

對照組給予黃體酮單一治療，即黃體酮軟膠囊（浙江醫(yī)藥股份有限公司，規(guī)格0.1 g，生產(chǎn)批號：150901）口服，300 mg/d，3 次/d。維生素E 軟膠囊（國藥控股星鯊制藥有限公司，規(guī)格50 mg，生產(chǎn)批號：10851002）口服，100 mg/d，2 次/d。觀察組在對照組基礎(chǔ)上給予間苯三酚注射液（寧波天真制藥有限公司，規(guī)格：4 mL：40 mg，生產(chǎn)批號：20150400）肌肉注射，40 mg/d。兩組均治療1 周。

1.3 觀察指標(biāo)

1.3.1 SOCS3 mRNA 水平測定 治療1 周后，兩組在無菌環(huán)境下采集絨毛與蛻膜組織，磷酸鹽緩沖液（PBS）洗滌干凈后，-80℃冰箱保存待測。50 mg 絨毛與蛻膜組織加入1 mL Trizol，搖勻后提取總RNA，試劑盒（生產(chǎn)批號：127805）購自美國Invitrogen 公司，采用逆轉(zhuǎn)錄-聚合酶鏈反應(yīng)法（RT-PCR）。RT 試劑盒購自Fermantas Life Siencens 公司，操作嚴(yán)格按照試劑盒說明書進(jìn)行。上 游引物序 列：5′-CGCCTCAAGACCTTCAGCTC-3′，下游引物序列：5′-CTGATCCAGGAACTCCCGAA-3′，擴(kuò)增片段長度為650 bp。GAPDH 基因上游引物序列：5′-CAAGGTCATCCATGACAACTTTG-3′，下游引物：5′-GTCCACCACCCTGTTGCTGTAG-3′，由上海博亞生物技術(shù)有限公司合成。

SOCS3 擴(kuò)增體系：Oligo 18 primer 1 μL，10 mm dNTP Mix 2 μL，Revert AidTMM-MulV RT 1 μL，5×反應(yīng)緩沖液4 μL，Inhibitor Ribolock RNase 1 μL，總RNA 2 μL，加入Depc Water 至20 μL。

SOCS3 擴(kuò)增條件：預(yù)變性95℃，5 min；變性94℃，35 s；退火59℃，40 s；延伸72℃，35 s，共35 循環(huán)。最后延伸72℃，7 min。

1.3.2 SOCS3 蛋白水平測定 10%甲醛溶液（北京九州柏林生物科技有限公司）固定，石蠟包埋。一抗（兔抗）SOCS3 單克隆抗體、二抗及三抗試劑盒均購自上海生工生物技術(shù)有限公司，按試劑盒說明書進(jìn)行。切片經(jīng)脫蠟、水化和抗原修復(fù)，加入1：400 一抗，4℃下孵育過夜；加入二抗，37℃孵育30 min，二氨基聯(lián)苯胺（DAB）染色，蘇木精復(fù)染，封片觀察。

陽性細(xì)胞數(shù)計(jì)數(shù)和染色程度判斷表達(dá)結(jié)果。光學(xué)顯微鏡全視野觀察，根據(jù)染色細(xì)胞的計(jì)數(shù)占完整上皮細(xì)胞的比例計(jì)分：陽性細(xì)胞數(shù)＜5%記為0 分，5%～25%記1 分，＞25%～75%記2 分；＞75%記3 分。染色強(qiáng)度判定：完全不顯色或顯色不明顯為0 分，淡黃色為1 分，棕黃色為2 分，深棕色為3 分。綜合積分=（染色細(xì)胞分?jǐn)?shù)+染色強(qiáng)度分?jǐn)?shù)）/2。綜合判定標(biāo)準(zhǔn)：積分＜0.5 分為表達(dá)缺失，0.5～1.5 分為表達(dá)下調(diào)，積分＞1.5 分為正常表達(dá)。

1.3.3 妊娠并發(fā)癥發(fā)生情況 隨訪并統(tǒng)計(jì)妊娠并發(fā)癥如妊娠期高血壓、胎盤早剝、胎盤前置、胎盤早破、妊娠期糖尿病的發(fā)生情況。

1.3.4 圍生兒結(jié)局 隨訪并統(tǒng)計(jì)新生兒畸形、足月低體重兒、早產(chǎn)兒、新生兒死亡、1 min Apgar 評分等。評分方法：評分由研究醫(yī)護(hù)人員完成，對新生兒出生1 min進(jìn)行評分，0～3 分為中度窒息，4～7 分為輕度窒息，8～10 分為正常。若新生兒1 min 內(nèi)評分正常而隨后數(shù)分鐘內(nèi)降至7 分或以下，同樣為窒息。

1.4 療效判定標(biāo)準(zhǔn)

治療1 周后，判定兩組治療效果。有效：患者臨床癥狀和體征消失或改善，妊娠繼續(xù)，胎兒發(fā)育良好；無效：妊娠無法正常進(jìn)行，胎兒發(fā)育不良甚至流產(chǎn)。

1.5 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

數(shù)據(jù)輸入采用EpiData 軟件；采用SPSS 19.0 統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)分析，計(jì)量資料用均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（±s）表示，兩組間比較采用t 檢驗(yàn)；計(jì)數(shù)資料用百分率表示，正態(tài)分布的組間比較采用χ2檢驗(yàn)，不符合正態(tài)分布的改用中位數(shù)（M）和四分位數(shù)（P25，P75）表示，兩組間比較采用秩和檢驗(yàn)；引物設(shè)計(jì)采用Primer premier 5.0 軟件輔助完成。以P＜0.05 為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 兩組治療效果比較

治療1 周后，觀察組有效率高于對照組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。見表1。

表1 兩組治療效果比較

2.2 兩組SOCS3 mRNA 水平比較

治療1 周后，觀察組SOCS3 mRNA 水平顯著高于對照組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。見圖1、表2。

圖1 兩組SOCS3 mRNA 水平比較

表2 兩組SOCS3 mRNA 水平比較（±s）

表2 兩組SOCS3 mRNA 水平比較（±s）

注：SOCS3：細(xì)胞因子信號轉(zhuǎn)導(dǎo)負(fù)調(diào)控因子3

2.3 兩組SOCS3 蛋白水平比較

治療1 周后，觀察組SOCS3 蛋白水平顯著高于對照組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。見圖2、表3。

2.3 兩組妊娠并發(fā)癥發(fā)生情況比較

兩組妊娠期高血壓、胎盤早剝、胎盤前置、胎盤早破、妊娠期糖尿病發(fā)生情況比較，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。見表4。

表3 兩組SOCS3 蛋白水平比較（±s）

表3 兩組SOCS3 蛋白水平比較（±s）

注：SOCS3：細(xì)胞因子信號轉(zhuǎn)導(dǎo)負(fù)調(diào)控因子3

表4 兩組妊娠期并發(fā)癥發(fā)生情況比較［例（%）］

2.4 兩組圍生兒結(jié)局比較

兩組新生兒畸形、足月低體重兒、早產(chǎn)兒、新生兒死亡率及1 min Apgar 評分比較，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。見表5。

表5 兩組兩組圍生兒結(jié)局比較［例（%）］

3 討論

先兆流產(chǎn)的發(fā)病率高，尤其是有復(fù)發(fā)性流產(chǎn)病史的患者，研究［8-13］顯示該病與胎兒染色體、免疫功能、生殖器官異常等有關(guān)。先兆流產(chǎn)與圍產(chǎn)期出血和低體重新生兒有關(guān)，藥物治療可顯著降低產(chǎn)前出血、宮內(nèi)胎兒生長窘迫或低體重新生兒的發(fā)生率，故研究其臨床效果意義重大［14］。天然孕激素可以增加胎兒的生存率［8］，間苯三酚是一類不具有抗膽堿作用的純平滑肌解痙藥，副作用小，近年應(yīng)用于先兆流產(chǎn)的保胎治療。本研究提示，觀察組臨床效果顯著優(yōu)于對照組，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。黃體酮維持蛻膜反應(yīng)利于妊娠繼續(xù)，降低子宮平滑肌興奮性，效降低母體免疫排斥，利于受精卵著床及胚胎發(fā)育［15-18］。聯(lián)合應(yīng)用間苯三酚能夠緩解腹部墜痛、減少陰道出血。袁少飛等［19］研究發(fā)現(xiàn)，間苯三酚治療可解除平滑肌痙攣，且無母嬰不良影響。

SOCS3 是SOCS 家族的一員，調(diào)控機(jī)體免疫、促進(jìn)細(xì)胞增殖、抵抗細(xì)胞凋亡。SOCS3 在絨毛和蛻膜組織中高表達(dá)，結(jié)束分娩后消失，推測SOCS3 在妊娠維持中發(fā)揮著關(guān)鍵作用［20-21］。本研究提示，觀察組絨毛和蛻膜組織中SOCS3 表達(dá)顯著高于對照組（P＜0.05）。提示黃體酮聯(lián)合間苯三酚能夠顯著提升患者SOCS3 mRNA 水平和蛋白表達(dá)水平，其機(jī)制尚不清楚。妊娠被視為一種特殊的免疫耐受，孕婦免疫調(diào)節(jié)異常是導(dǎo)致先兆流產(chǎn)發(fā)生的重要因素。T 細(xì)胞中Th1 及Th2 平衡是孕婦和胎兒免疫調(diào)節(jié)正常的前提。研究［22］認(rèn)為，先兆流產(chǎn)患者Th1 及Th2 水平顯著失衡，但該表達(dá)失衡可逆轉(zhuǎn)。SOCS3 能夠促進(jìn)Th2 細(xì)胞表達(dá)，抑制Th1細(xì)胞表達(dá)，使得Th2 細(xì)胞處于免疫優(yōu)勢地位，進(jìn)而維護(hù)胎兒的免疫耐受和母胎界面免疫平衡［23］。

本研究提示，兩組妊娠期高血壓、胎盤早剝、胎盤前置、胎盤早破和妊娠期糖尿病發(fā)生情況比較，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。兩組新生兒畸形、足月低體重兒、早產(chǎn)兒、新生兒死亡率及1 min Apgar 評分比較，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。提示黃體酮聯(lián)合間苯三酚治療先兆流產(chǎn)并不增加不良發(fā)應(yīng)，圍生兒結(jié)局無不良影響。

本研究不足之處在于樣本量小，所得結(jié)論代表性有限。進(jìn)一步需探究間苯三酚增加SOCS3 表達(dá)的機(jī)制，以及SOCS3 平衡Th1 及Th2 的機(jī)制。間苯三酚應(yīng)用先兆流產(chǎn)的母胎安全性也還需大量研究證實(shí)，對新生兒成長發(fā)育尚需進(jìn)行長期隨訪，獲得藥物對母胎影響的更全面的資料。以期對臨床診治提供理論依據(jù)。

綜上所述，黃體酮聯(lián)合間苯三酚治療先兆流產(chǎn)臨床效果顯著，顯著改善患者機(jī)體SOCS3 蛋白水平和圍生兒結(jié)局。