子宮內(nèi)膜癌患者血清LncRNA ROR與miR-29的差異性表達(dá)及二者的診斷價(jià)值研究

陳 佳，許贇興

(南通大學(xué)附屬海安醫(yī)院輸血科，江蘇海安 226600)

子宮內(nèi)膜癌好發(fā)于圍絕經(jīng)期和絕經(jīng)后女性[1]，是最常見(jiàn)的女性生殖系統(tǒng)腫瘤之一。每年有近200 000的新發(fā)子宮內(nèi)膜癌病例，是常見(jiàn)婦科惡性腫瘤病死率僅次于卵巢癌和宮頸癌的第三位[2]。目前子宮內(nèi)膜癌早期臨床表現(xiàn)不典型，導(dǎo)致許多患者就診時(shí)病情已發(fā)展至中晚期。此外，子宮內(nèi)膜癌的診斷主要依靠診斷性刮宮，該操作為有創(chuàng)性檢查，會(huì)給患者造成一定的痛苦，不宜在人群中普及，嚴(yán)重影響患者預(yù)后[3]。尋找有效、穩(wěn)定的生物學(xué)標(biāo)志物無(wú)疑可為子宮內(nèi)膜癌的治療贏得時(shí)間，對(duì)提高患者生存率，改善其生存質(zhì)量具有重要意義。

研究發(fā)現(xiàn)，長(zhǎng)鏈非編碼RNA ROR(lncRNA ROR)與微小RNA 29(miR-29)可通過(guò)表觀遺傳調(diào)控參與各種生理病理過(guò)程，并與腫瘤的發(fā)生、發(fā)展及轉(zhuǎn)移密切相關(guān)[4-5]。本次實(shí)驗(yàn)通過(guò)比較分析子宮內(nèi)膜癌患者與健康女性血清LncRNA ROR和miR-29水平，分析二者與子宮內(nèi)膜癌的臨床病理特征之間的關(guān)系及對(duì)子宮內(nèi)膜癌的診斷及發(fā)病風(fēng)險(xiǎn)預(yù)測(cè)價(jià)值。

1 材料與方法

1.1一般資料 選取2013年2月至2017年2月在本院經(jīng)病理學(xué)/細(xì)胞學(xué)確診的子宮內(nèi)膜癌患者230例作為病例組。其中子宮內(nèi)膜樣腺癌149例，黏液性腺癌45例，漿液性腺癌26例，透明細(xì)胞性腺癌10例；TNM分期Ⅰ～Ⅱ期87例，Ⅲ～Ⅳ期143例。子宮內(nèi)膜癌的組織學(xué)類型和分期參照FIGO2009年手術(shù)病理分期[6]。同期收取250例于本院健康體檢者作為對(duì)照組。兩組研究對(duì)象的年齡、BMI、吸煙史、飲酒史和生育史等一般資料差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)，具有可比性，見(jiàn)表1。本研究的開(kāi)展經(jīng)醫(yī)院倫理委員會(huì)批準(zhǔn)。

表1 兩組研究對(duì)象一般資料比較

1.2血清LncRNA ROR與miR-29水平檢測(cè) 受試者禁食10 h以上，次日清晨由專業(yè)醫(yī)護(hù)人員使用含促凝劑采血管抽取靜脈血10 mL，血液標(biāo)本在1 h內(nèi)于4 ℃條件下以12 000 g離心力離心15 min，收集血清進(jìn)行相關(guān)指標(biāo)檢測(cè)。血清總RNA的提取按照血液RNA提起試劑盒(中國(guó)Bioteke公司)說(shuō)明書步驟進(jìn)行。取上述提取的RNA，使用去除基因組逆轉(zhuǎn)錄試劑盒(中國(guó)Takara公司)逆轉(zhuǎn)錄為cDNA。采用實(shí)時(shí)熒光定量PCR(RT-PCR)法檢測(cè)血清LncRNA ROR、miR-29及內(nèi)參基因GAPDH表達(dá)水平。檢測(cè)過(guò)程中所用引物序列。見(jiàn)表2。 采用2-ΔΔCt法計(jì)算目的基因的相對(duì)表達(dá)量，△Ct值=目的基因Ct值-GAPDH Ct值。血清LncRNA ROR與miR-29基因擴(kuò)增曲線和熔解曲線峰型單一，說(shuō)明引物沒(méi)有非特異性擴(kuò)增，如圖1。

表2 引物序列

注：A圖為L(zhǎng)ncRNA ROR擴(kuò)增曲線；B圖為L(zhǎng)ncRNA ROR熔解曲線；C圖為miR-29擴(kuò)增曲線；D圖為miR-29熔解曲線

2 結(jié) 果

2.1兩組研究對(duì)象血清LncRNA ROR、miR-29水平比較 病例組的血清LncRNA ROR、miR-29水平明顯高于對(duì)照組，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。如表3。

表3 兩組研究對(duì)象血清LncRNA ROR、miR-29水平比較

2.2血清 LncRNA ROR、miR-29水平與子宮內(nèi)膜癌患者臨床病理特征之間的關(guān)系 血清 LncRNA ROR、miR-29水平與子宮內(nèi)膜癌患者的年齡、BMI、吸煙史、飲酒史、生育史、組織學(xué)類型等因素差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)，而不同子宮內(nèi)膜癌的TNM分期差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)，在Ⅰ～Ⅱ期患者中差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。如表4。

表4 血清 LncRNA ROR、miR-29水平與子宮內(nèi)膜癌患者臨床病理特征的關(guān)系

圖2 血清LncRNA ROR與miR-29對(duì)子宮內(nèi)膜癌鑒別診斷的ROC曲線分析

2.3血清LncRNA ROR與miR-29對(duì)子宮內(nèi)膜癌的鑒別診斷價(jià)值 血清LncRNA ROR和miR-29區(qū)分子宮內(nèi)膜癌和健康人群的AUC分別為：0.791(95%CI：0.730～0.921，P<0.001)和0.861(95%CI：0.800～0.922，P<0.001)，對(duì)應(yīng)的靈敏度/特異度分別為：77.9%/82.6%、85.3%/68.5%。聯(lián)合血清LncRNA ROR和miR-29區(qū)分子宮內(nèi)膜癌和健康人群的AUC為0.907(95%CI：0.812～0.961，P<0.001)，靈敏度為83.7%，特異性92.8%。聯(lián)合檢測(cè)時(shí)，鑒別子宮內(nèi)膜癌的特異性顯著提高，見(jiàn)圖2。

2.4風(fēng)險(xiǎn)評(píng)估 單因素分析顯示，血清高LncRNA ROR和miR-29水平是子宮內(nèi)膜癌發(fā)病的危險(xiǎn)因素；多因素分析顯示，校正年齡、BMI、吸煙史、飲酒史和生育史等因素影響后，血清高LncRNA ROR和miR-29水平是子宮內(nèi)膜癌發(fā)病的獨(dú)立危險(xiǎn)因素，見(jiàn)表5。

表5 血清LncRNA ROR和miR-29水平對(duì)子宮內(nèi)膜癌的發(fā)病風(fēng)險(xiǎn)預(yù)測(cè)價(jià)值

3 討 論

子宮內(nèi)膜癌是全球最常見(jiàn)的惡性腫瘤之一，具有發(fā)病率高、侵襲性強(qiáng)以及預(yù)后差等特點(diǎn)，是威脅人群健康的主要疾病之一[2]。生物標(biāo)志物是血液、尿液或者組織中能檢測(cè)疾病狀態(tài)的分子指標(biāo)，可用于疾病的檢測(cè)與評(píng)估[7]。生物標(biāo)志物在體液中的濃度變化可以為臨床提供疾病的進(jìn)展情況，理想情況下，生物標(biāo)志物應(yīng)具有檢測(cè)早期小塊腫瘤的高靈敏度、高特異度，并且在非腫瘤患者體內(nèi)不會(huì)增加。目前，對(duì)于子宮內(nèi)膜癌的診斷仍然缺乏有效指標(biāo)，導(dǎo)致這類患者預(yù)后較差[8]，而生物標(biāo)志物的早期檢測(cè)可顯著提高子宮內(nèi)膜癌患者的生存率。CA125是子宮內(nèi)膜癌的輔助診斷指標(biāo)之一，但由于CA125在非生殖系統(tǒng)腫瘤如淋巴瘤與子宮內(nèi)膜異位癥等良性疾病中也可出現(xiàn)增高，導(dǎo)致其靈敏度不足，特異度較低，限制了該指標(biāo)在臨床上的應(yīng)用[9-10]。ZHOU等[11]的研究發(fā)現(xiàn)，利用酶聯(lián)免疫吸附法檢測(cè)血清CA125在區(qū)分子宮內(nèi)膜癌患者與健康人群中的靈敏度/特異度僅有63.2%/69.4%，此種情況下，尋找其他更可靠的生物學(xué)標(biāo)志物對(duì)子宮內(nèi)膜異位癥的早期干預(yù)及預(yù)后的提高具有重要意義。

LncRNA ROR與miR-29已被報(bào)道參與了多種腫瘤的發(fā)病過(guò)程[4-5]。研究發(fā)現(xiàn)，LncRNA ROR可通過(guò)抑制miRNA-145介導(dǎo)的子宮內(nèi)膜干細(xì)胞分化過(guò)程而促進(jìn)子宮內(nèi)膜癌的發(fā)生[12]，而miR-29則可誘導(dǎo)子宮內(nèi)膜癌組織新生血管形成，增加癌組織血供，以促進(jìn)腫瘤的生長(zhǎng)及轉(zhuǎn)移[13]，而目前尚無(wú)關(guān)于二者應(yīng)用于子宮內(nèi)膜癌診斷的相關(guān)報(bào)道。本研究發(fā)現(xiàn)子宮內(nèi)膜癌患者的血清LncRNA ROR和miR-29水平顯著高于正常女性，且在疾病早期即出現(xiàn)明顯增高，提示二者對(duì)子宮內(nèi)膜癌具有早期診斷價(jià)值。ROC分析結(jié)果表明，血清LncRNA ROR和miR-29鑒別診斷子宮內(nèi)膜癌的靈敏度與特異度均顯著高于CA125，而聯(lián)合檢測(cè)二者時(shí)，特異度顯著優(yōu)于單項(xiàng)指標(biāo)檢測(cè)的特異度。此外，血清高LncRNA ROR與miR-29水平，均是子宮內(nèi)膜癌發(fā)病的獨(dú)立危險(xiǎn)因素，該結(jié)果提示二者不僅對(duì)子宮內(nèi)膜癌的早期診斷有重要意義，對(duì)該疾病的發(fā)病風(fēng)險(xiǎn)評(píng)估亦具有潛在價(jià)值。

本研究存在以下不足之處：(1)收集的病例數(shù)有限，未來(lái)仍需更多多中心大樣本研究來(lái)驗(yàn)證本次研究的結(jié)果；(2)未對(duì)LncRNA ROR與miR-29參與子宮內(nèi)膜癌發(fā)病的潛在機(jī)制進(jìn)行深入探究，未來(lái)可設(shè)計(jì)相應(yīng)的細(xì)胞及動(dòng)物實(shí)驗(yàn)進(jìn)行深入挖掘。

本次研究首次對(duì)子宮內(nèi)膜癌患者血清LncRNA ROR與miR-29的差異性表達(dá)及二者的診斷、發(fā)病風(fēng)險(xiǎn)預(yù)測(cè)價(jià)值進(jìn)行探究，并發(fā)現(xiàn)聯(lián)合檢測(cè)二者對(duì)子宮內(nèi)膜癌具有較高的早期診斷與風(fēng)險(xiǎn)預(yù)測(cè)價(jià)值。