系統(tǒng)性紅斑狼瘡患者外周血B細(xì)胞中PD-L1的表達(dá)及臨床意義

陸 燕，覃小升

(來(lái)賓市興賓區(qū)人民醫(yī)院檢驗(yàn)科,廣西來(lái)賓 546100)

系統(tǒng)性紅斑狼瘡(SLE)是我國(guó)最常見(jiàn)的自身免疫系統(tǒng)疾病，也是一種累及機(jī)體多系統(tǒng)、多臟器的疾病[1]。SLE可導(dǎo)致機(jī)體多種臟器功能障礙，SLE患者病情活動(dòng)度不同，預(yù)后不同[2]。狼瘡性腎炎(LN)是我國(guó)最常見(jiàn)繼發(fā)性的腎小球疾病，是由于自身抗體產(chǎn)生導(dǎo)致腎臟免疫復(fù)合物形成和沉積，免疫復(fù)合物通過(guò)經(jīng)典和旁路途徑激活補(bǔ)體系統(tǒng)造成腎臟損傷[3-4]。血清中程序性死亡分子1(PD-1)與其配體(PD-L1)組成的信號(hào)途徑是對(duì)T細(xì)胞激活的調(diào)節(jié)和T細(xì)胞耐受的維持有重要的臨床意義[5]。積極評(píng)價(jià)SLE患者病情嚴(yán)重程度和腎臟損傷情況具有重要的臨床意義，本研究探討了SLE患者外周血B細(xì)胞中PD-L1水平與患者腎臟損傷及病情的關(guān)系，現(xiàn)將研究結(jié)果報(bào)道如下。

1 資料與方法

1.1一般資料 選擇2015年5月至2017年5月在本院診斷為SLE的50例患者為研究對(duì)象，SLE的診斷參照中華醫(yī)學(xué)會(huì)指定的相關(guān)診斷標(biāo)準(zhǔn)。納入標(biāo)準(zhǔn)：(1)確診為SLE；(2)依從性好，同意進(jìn)行本研究的，能完成隨訪。排除標(biāo)準(zhǔn)：(1)既往合并高血壓、糖尿病、冠心病、甲狀腺疾病、肝臟疾病等其他慢性疾病的患者；(2)精神異常或合并其他認(rèn)知功能障礙的患者；(3)合并其他自身免疫系統(tǒng)疾病或其他可能導(dǎo)致患者腎臟功能損傷疾病的患者；(4)合并妊娠、哺乳或其他認(rèn)知功能障礙的患者；(5)近期使用了激素或免疫抑制劑治療或其他可能影響病情評(píng)價(jià)藥物的患者。納入研究的50例SLE患者中，男6例，女44例；平均(34.2±6.5)歲；體質(zhì)量指數(shù)(BMI)為(22.5±3.5)kg/m2。根據(jù)SLE疾病活動(dòng)指數(shù)分級(jí)(SLEDAI)將SLE患者分為SLE活動(dòng)期組(25例)和SLE非活動(dòng)期組(25例)，SLE活動(dòng)期組SLEDAI評(píng)分≥10分，SLE非活動(dòng)組SLEDAI評(píng)分<10分。SLE活動(dòng)期患者中，男2例，女23；平均(35.6±6.7)歲，SLE非活動(dòng)期組中，男4例，女21例，平均(33.8±6.3)歲。另選擇同期20例健康成人作為對(duì)照組，其中男3例，女17例；平均(34.8±6.2)歲；BMI(22.7±3.2)kg/m2；兩組性別、年齡、BMI等比較，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)，具有可比性。

1.2觀察指標(biāo) (1)腎臟損傷評(píng)價(jià)：本研究中所有LN患者均經(jīng)皮腎穿刺進(jìn)行腎臟病理活檢，根據(jù)腎穿刺活檢結(jié)果分為Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ、Ⅴ、Ⅵ型狼瘡；(2)外周血B細(xì)胞PD-L1表達(dá)水平檢測(cè)：采用收集患者和健康人外周血單個(gè)核細(xì)胞制備單核細(xì)胞懸液加入2支試管中，分別加入FITC標(biāo)記的抗人PD-L1抗體(anti-HPD-L1-FITC)和PE標(biāo)記的抗人CD19抗體(anti-HCD19-PE)(均購(gòu)自ATCC公司),1 000 r/min 離心5 min，棄上清液，4%多聚甲醛固定后加入300 μL PBS 上機(jī)采用流式細(xì)胞儀進(jìn)行分析，以雙色點(diǎn)圖分析B淋巴細(xì)胞PD-L1的表達(dá)。

2 結(jié) 果

2.1不同病情的SLE患者B細(xì)胞中CD19+、CD19+/PD-L1水平比較 SLE活動(dòng)期組患者CD19+水平均高于SLE非活動(dòng)期組和對(duì)照組，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)；SLE活動(dòng)期患者CD19+/PD-L1水平均高于非活動(dòng)期患者和對(duì)照組患者，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)，見(jiàn)表1。

表1 不同組B細(xì)胞中CD19+水平和CD19+/PD-L1水平比較

2.2不同CD19+和CD19+/PD-L1水平的患者腎臟損傷程度的關(guān)系 根據(jù)CD19+和CD19+/PD-L1水平分為低水平和高水平組(以CD19+或CD19+/PD-L1水平的中位數(shù)為參考點(diǎn)，低于其中位數(shù)水平為低水平組，高于其中位數(shù)水平為低水平組)，CD19+高水平和CD19+/PD-L1高水平的患者腎損傷的發(fā)生率更高，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)，見(jiàn)表2。

表2 不同CD19+和CD19+/PD-L1水平的

表3 LN患者腎功能不全發(fā)生的風(fēng)險(xiǎn)因素分析

2.3SLE患者發(fā)生腎功能不全發(fā)生的風(fēng)險(xiǎn)因素分析 以性別、年齡、BMI、尿蛋白定量、腎臟病理分級(jí)、血清中CD19+、CD19+/PD-L1，以腎功能不全為終點(diǎn)事件，采用logistic回歸分析探討結(jié)果提示，CD19+/PD-L1、LN Ⅳ期是LN患者腎功能不全發(fā)生的獨(dú)立危險(xiǎn)因素，見(jiàn)表3。

3 討 論

SLE的發(fā)生、發(fā)展與T細(xì)胞異?；罨凸餐碳っ庖弑磉_(dá)有關(guān)，研究提示PD-1/PD-L1在外周血免疫耐受和自身免疫疾病過(guò)程中有重要的臨床意義，研究證實(shí)PD-1基因過(guò)表達(dá)的小鼠可以誘發(fā)自身免疫性擴(kuò)大性心肌病[6]。PD-1影響T細(xì)胞的生物學(xué)行為，進(jìn)而影響多種細(xì)胞因子的表達(dá)，導(dǎo)致患者T細(xì)胞功能下降[7]，進(jìn)而參與自身免疫系統(tǒng)疾病的發(fā)生、發(fā)展。

SLE是多系統(tǒng)受累的自身免疫系統(tǒng)疾病，臨床表現(xiàn)多種多樣。SLE根據(jù)病情輕重不一，病情穩(wěn)定者可不出現(xiàn)任何臟器損傷情況，病情嚴(yán)重者可累及患者多種臟器，導(dǎo)致患者臟器功能障礙，甚至危及患者生命[8-10]。 狼瘡病情活動(dòng)評(píng)分是評(píng)價(jià)SLE病情的重要指標(biāo)之一，當(dāng)患者病情活動(dòng)時(shí)可出現(xiàn)腎臟損傷、血液系統(tǒng)疾病，甚至狼瘡性腦病。本研究采用SLEDAI對(duì)患者病情進(jìn)行評(píng)分，發(fā)現(xiàn)病情活動(dòng)的患者CD19+細(xì)胞表達(dá)和PD-1水平明顯更高，這就意味著B(niǎo)細(xì)胞表面PD-L1表達(dá)水平可能參與B細(xì)胞的生物學(xué)行為，促進(jìn)免疫損傷的進(jìn)展，進(jìn)而調(diào)控SLE的病情發(fā)展。

LN是導(dǎo)致繼發(fā)性腎損傷的主要疾病，LN是多種免疫復(fù)合物導(dǎo)致腎臟損傷，LN發(fā)病過(guò)程中大量細(xì)胞外基質(zhì)大量沉積、誘發(fā)腎臟病理生理改變[11-13]。LN病情及預(yù)后不一，輕者對(duì)患者關(guān)腎功能無(wú)明顯影響，病情嚴(yán)重者可導(dǎo)致患者腎功能衰竭進(jìn)入尿毒癥甚至導(dǎo)致死亡[14-15]。找到一種無(wú)創(chuàng)評(píng)價(jià)患者腎臟病變程度的評(píng)價(jià)指標(biāo)具有重要的臨床意義。相關(guān)性分析結(jié)果也證實(shí)了外周血中B細(xì)胞含量及PD-L1表達(dá)水平與患者腎臟損情程度密切相關(guān)，PD-L1水平不僅可以用于評(píng)價(jià)SLE病情也可以運(yùn)用于評(píng)價(jià)患者腎臟損傷程度。

4 結(jié) 論

不少SLE患者腎功能損傷最終可能發(fā)展為腎功能不全，本研究探討了SLE患者腎功能不全的危險(xiǎn)因素，結(jié)果發(fā)現(xiàn)B細(xì)胞表達(dá)的PD-L1水平、LN Ⅳ是患者進(jìn)展為腎功能不全的獨(dú)立危險(xiǎn)因素，提示外周血B細(xì)胞的PD-L1水平與患者病情損傷密切相關(guān)，可能成為SLE患者疾病進(jìn)展和預(yù)后的指標(biāo)。