MT1-MMP、LncRNA SNHG15、YAP聯(lián)合檢測(cè)在甲狀腺癌中的診斷價(jià)值

林 勝

(資陽市第一人民醫(yī)院檢驗(yàn)科，四川資陽 641300)

甲狀腺癌是最常見的一種惡性腫瘤，多發(fā)于兒童或40歲以下的女性，甲狀腺癌生長(zhǎng)較為緩慢，但易出現(xiàn)局部或淋巴轉(zhuǎn)移，并且臨床預(yù)后差異較大，目前缺乏有效的診斷手段[1]。模型基質(zhì)金屬蛋白酶1(MT1-MMP)、長(zhǎng)鏈非編碼RNASNHG 15(LncRNASNHG 15)以及Yes 相關(guān)蛋白(YAP)均在甲狀腺癌組織中異常表達(dá)，對(duì)癌細(xì)胞的增殖、凋亡具有調(diào)控作用，但關(guān)于三者對(duì)甲狀腺癌診斷價(jià)值的研究較少[2-4]。本文主要探究MT1-MMP、LncRNA SNHG15、YAP對(duì)甲狀腺癌的診斷價(jià)值。

1 資料與方法

1.1一般資料 選擇2015年7月至2017年7月于本院進(jìn)行治療的甲狀腺癌患者共186例作為觀察組，包括男58例，女128例，乳頭狀癌112例、濾泡狀癌41例、未分化癌17例和髓樣癌16例。患者年齡21～68歲，平均(42.54±3.26)歲。 選擇同期于本院進(jìn)行健康體檢者50例作為對(duì)照組，包括男17例，女33例，年齡23～70歲，平均(43.23±3.57)歲。納入標(biāo)準(zhǔn)：(1)年齡在20～70歲之間；(2)符合甲狀腺癌的診斷標(biāo)準(zhǔn)[5]，均為新發(fā)患者；(3)資料完整；(4)簽署知情同意書。排除標(biāo)準(zhǔn)：(1)合并其他惡性腫瘤；(2)使用過激酶抑制劑或細(xì)胞毒藥物進(jìn)行治療的患者；(3)合并其他甲狀腺疾病；(4)妊娠或哺乳期婦女。

1.2方法 收集所有患者的基本資料，并在入院進(jìn)行病理檢查時(shí)取瘤體樣本放置于生理鹽水中在-80 ℃條件下保存，做好標(biāo)簽以備后續(xù)，使用免疫組化SP法檢測(cè)每份樣本中MT1-MMP、YAP和LncRNA SNHG15表達(dá)情況，試劑盒購買于上海創(chuàng)翼生物科技有限公司，MT1-MMP、YA和LncRNA SNHG15P主要分布于細(xì)胞漿，呈黃色至褐色，每個(gè)樣本隨機(jī)選取選擇6個(gè)高倍視野(×400倍)計(jì)算表達(dá)陽性率，以顏色為棕黃色、棕褐色以及褐色并且染色范圍大于20%。使用Western blot檢測(cè)每份樣本中MT1-MMP、YAP和LncRNA SNHG15蛋白相對(duì)表達(dá)量，試劑盒購買于Dharmacon公司，100 V電泳2 h，使用Quantity One 1-D分析軟件對(duì)蛋白質(zhì)印跡條帶進(jìn)行定量，相對(duì)表達(dá)量=目的蛋白測(cè)定值/GAPDH測(cè)定值。

2 結(jié) 果

2.1觀察組與對(duì)照組三種蛋白陽性率比較 觀察組組織MT1-MMP、YAP和LncRNA SNHG15表達(dá)陽性率均明顯高于對(duì)照組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)，見表1。

2.2觀察組與對(duì)照組三種蛋白Westen blot結(jié)果比較 觀察組組織MT1-MMP、YAP和LncRNA SNHG15蛋白相對(duì)表達(dá)量均明顯高于對(duì)照組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)，見表2、圖1。

表1 觀察組與對(duì)照組三種蛋白陽性率比較

表2 觀察組與對(duì)照組三種蛋白Westen blot結(jié)果比較

圖1 觀察組與對(duì)照組三種蛋白Westen blot結(jié)果比較

表3 MT1-MMP、YAP 、LncRNA SNHG15表達(dá)與甲狀腺癌臨床病理參數(shù)的關(guān)系

續(xù)表3 MT1-MMP、YAP 、LncRNA SNHG15表達(dá)與甲狀腺癌臨床病理參數(shù)的關(guān)系

2.3MT1-MMP、YAP 、LncRNA SNHG15表達(dá)與甲狀腺癌臨床病理參數(shù)的關(guān)系 不同性別和年齡段患者組織MT1-MMP、YAP蛋白表達(dá)陽性率及LncRNA SNHG15蛋白相對(duì)表達(dá)量比較，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)，瘤體直徑大于2 cm的組織YAP表達(dá)水平明顯高于瘤體直徑小于2cm的組織，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)，出現(xiàn)包膜浸潤(rùn)的組織YAP及LncRNA SNHG15蛋白表達(dá)水平明顯高于未出現(xiàn)包膜浸潤(rùn)的組織，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)，出現(xiàn)淋巴轉(zhuǎn)移的組織MT1-MMP表達(dá)水平明顯高于未出現(xiàn)淋巴轉(zhuǎn)移的組織，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)，TNM分級(jí)為Ⅲ級(jí)和Ⅳ級(jí)的組織YAP表達(dá)水平明顯高于Ⅰ和Ⅱ級(jí)的組織，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)，MT1-MMP、YAP 及LncRNA SNHG15表達(dá)水平的增高在乳頭狀腺癌患者中的增高最為明顯，其次為濾泡狀癌。見表3。

3 討 論

甲狀腺癌是發(fā)病率最高的內(nèi)分泌系統(tǒng)惡性腫瘤之一，在兒童和年輕女性中多發(fā)，嚴(yán)重威脅著人類健康。甲狀腺癌早期癥狀較為隱匿，較難診斷和發(fā)現(xiàn)，易發(fā)生腫瘤轉(zhuǎn)移，且其預(yù)后差異較大[6]。目前關(guān)于甲狀腺癌的發(fā)病機(jī)理尚不完全明確，是當(dāng)下研究熱點(diǎn)之一。

甲狀腺癌具有較高的淋巴轉(zhuǎn)移率和較強(qiáng)的侵襲性，研究表明細(xì)胞基底膜和間質(zhì)組織的破壞是惡性腫瘤轉(zhuǎn)移的關(guān)鍵。MT1-MMP是一種膠原蛋白酶，被活化后可降解層黏連蛋白、膠原蛋白、玻璃黏連蛋白、間質(zhì)膠原等多種細(xì)胞外基質(zhì)蛋白，破壞細(xì)胞外基質(zhì)微環(huán)境的平衡[7]。本次研究結(jié)果表明，甲狀腺癌患者瘤體組織中的MT1-MMP蛋白表達(dá)水平明顯高于健康人群，并且出現(xiàn)包膜浸潤(rùn)和淋巴轉(zhuǎn)移的瘤體組織的MT1-MMP蛋白表達(dá)水平明顯高于未出現(xiàn)浸潤(rùn)和轉(zhuǎn)移的組織。以往研究也發(fā)現(xiàn)，MT1-MMP在肺癌、黑色素瘤、肝癌等的浸潤(rùn)和轉(zhuǎn)移中起著重要作用[8]。一方面，MT1-MMP可降解細(xì)胞外基質(zhì)導(dǎo)致腫瘤細(xì)胞易脫落轉(zhuǎn)移，另一方面可能是由于MT1-MMP可上調(diào)血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子的活性，促進(jìn)腫瘤組織的血管和淋巴的生成，從而導(dǎo)致浸潤(rùn)和淋巴轉(zhuǎn)移[9]。

YAP蛋白是一種轉(zhuǎn)錄調(diào)控因子，在細(xì)胞增殖中起著重要作用，YAP可通過調(diào)節(jié)SMAD以及轉(zhuǎn)錄增強(qiáng)區(qū)域?qū)D(zhuǎn)錄進(jìn)行調(diào)控，與腫瘤細(xì)胞的惡性增殖密切相關(guān)[10]。本次研究結(jié)果顯示，甲狀腺癌患者瘤體組織中的YAP表達(dá)水平明顯高于健康人群，并且瘤體直徑大于2 cm和TNM分級(jí)為Ⅲ級(jí)Ⅳ級(jí)的YAP表達(dá)水平明顯高于其他類型組織，表明高YAP表達(dá)水平預(yù)示著較為嚴(yán)重的腫瘤等級(jí)和較差的預(yù)后。前期研究也提示，YAP表達(dá)水平與惡性腫瘤術(shù)后生存期存在負(fù)相關(guān)性[11]。YAP不但有促進(jìn)增殖的能力，還可以誘導(dǎo)survivin蛋白表達(dá)，減少腫瘤細(xì)胞凋亡，表明高YAP水平預(yù)示腫瘤細(xì)胞有更強(qiáng)的增殖能力[12]。

LncRNA SNHG15是一類長(zhǎng)度為200個(gè)核酸的保守非編碼RNA，與組織分化、細(xì)胞增殖、胚胎發(fā)育等過程密切相關(guān)[4]。目前關(guān)于LncRNA SNHG15與甲狀腺癌關(guān)系的研究極少。本次研究結(jié)果顯示，甲狀腺癌患者瘤體組織中的LncRNA SNHG15表達(dá)水平明顯高于健康人群，出現(xiàn)包膜浸潤(rùn)的組織LncRNA SNHG15蛋白表達(dá)水平明顯高于未出現(xiàn)包膜浸潤(rùn)的組織。以往研究顯示，LncRNA SNHG15的過表達(dá)可能與瘤體組織的大小、血管侵犯等有關(guān)[13]，是影響肝癌預(yù)后的獨(dú)立危險(xiǎn)因素[14]，本次研究發(fā)現(xiàn)，LncRNA SNHG15僅與腫瘤的浸潤(rùn)有關(guān)，這可能是受到樣本數(shù)量過小等因素的影響，未來需要更多大樣本研究進(jìn)行驗(yàn)證。

本次研究使用免疫組化對(duì)MT1-MMP、LncRNA SNHG15、YAP的表達(dá)進(jìn)行定性和定位分析，使用Western blot法對(duì)MT1-MMP、LncRNA SNHG15、YAP的表達(dá)進(jìn)行定量分析。除上述兩種方法外，今后的實(shí)驗(yàn)中還可采用實(shí)時(shí)熒光定量PCR法檢測(cè)組織和外周血中MT1-MMP、LncRNA SNHG15、YAP表達(dá)水平，以進(jìn)一步驗(yàn)證本實(shí)驗(yàn)的研究結(jié)果。

綜上所述，MT1-MMP的高表達(dá)預(yù)示著甲狀腺癌的包膜浸潤(rùn)和淋巴轉(zhuǎn)移，YAP高表達(dá)預(yù)示著甲狀腺癌更強(qiáng)的增殖能力和更差的預(yù)后，LncRNA SNHG15也與包膜浸潤(rùn)密切相關(guān)，因此MT1-MMP、LncRNA SNHG15、YAP聯(lián)合檢測(cè)有助于判斷甲狀腺癌的惡性程度、浸潤(rùn)轉(zhuǎn)移及預(yù)后效果，為臨床診療提供依據(jù)。

4 結(jié) 論

本次研究使用免疫組化和Western blot法發(fā)現(xiàn)，MT1-MMP、LncRNA SNHG15、YAP在甲狀腺癌患者中存在過表達(dá)，并且其表達(dá)水平與瘤體直徑、包膜浸潤(rùn)以及是否出現(xiàn)淋巴轉(zhuǎn)移有關(guān)，三項(xiàng)指標(biāo)聯(lián)合檢測(cè)有望為甲狀腺癌的臨床診療提供新思路。