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    霉酚酸酯對阿霉素腎病大鼠的保護(hù)作用及其機(jī)制研究*

    2019-03-05 06:00:20王興白明輝季佳鄒艷紅楊菲鄧?yán)盍?/span>范琳博劉瑤邱迪劉秋紅
    關(guān)鍵詞:尿蛋白試劑盒體重

    王興 ,白明輝 ,季佳 ,鄒艷紅 ,楊菲 ,鄧?yán)盍?,范琳博,劉瑤,邱迪,劉秋紅

    (1.齊齊哈爾醫(yī)學(xué)院附屬第三醫(yī)院 兒科,黑龍江 齊齊哈爾 161000;2.齊齊哈爾醫(yī)學(xué)院附屬第三醫(yī)院 口腔科,黑龍江 齊齊哈爾 161000;3.佳木斯大學(xué)附屬第一醫(yī)院 兒科,黑龍江 佳木斯 154002)

    霉酚酸酯(mycophenolatemofeitil, MMF)是臨床上治療腎病綜合征(nephrotic syndrome, NS)的常用藥物[1-3]。大量研究證實(shí),足細(xì)胞不可逆損傷是NS患者出現(xiàn)蛋白尿的主要機(jī)制之一,因此修復(fù)和保護(hù)足細(xì)胞是阻止腎功能惡化的主要策略[4]。microRNAs(miRNAs)在多種腎疾病發(fā)生、發(fā)展過程中扮演重要角色[5]。尋找MMF靶向調(diào)控的miRNAs分子對明確MMF的作用機(jī)制具有重要臨床意義。筆者首先采用基因芯片技術(shù),篩選與NS密切相關(guān)的miRNAs作為候選標(biāo)志物,并通過探討MMF對阿霉素腎?。╝driamycin nephropathy, ADN)大鼠模型足細(xì)胞的保護(hù)作用,以及對腎組織miRNAs的影響,闡明MMF的作用機(jī)制。

    1 材料與方法

    1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物

    60只6~8周齡成年健康SPF級Sprague-Dawley(SD)大鼠購自廣州醫(yī)藥研究總院有限公司,動(dòng)物許可證號:SYXK(粵)2013-0003。體重180~220 g,平均(192.46±6.13)g。將大鼠分籠飼養(yǎng),3或4只/籠,喂以標(biāo)準(zhǔn)飼料及消毒的自來水,自由活動(dòng)與進(jìn)食、進(jìn)水,保證動(dòng)物房內(nèi)安靜、清潔、通風(fēng),溫度控制在(22±1)℃。

    1.2 受試藥物與主要試劑

    注射用鹽酸多柔比星(阿霉素)(浙江海正藥業(yè)股份有限公司),MMF(上海羅氏制藥有限公司),PCR引物由上海生工生物工程有限公司合成并提供,miRelute miRNA 提取分離試劑盒、RT Reagent Kit、cDNA合成試劑盒、SYBR實(shí)時(shí)熒光定量聚合酶鏈反 應(yīng)(quantitative real-time polymerase chain reaction,qRT-PCR)試劑盒購自日本TaKaRa公司,組織蛋白提取試劑盒、BCA蛋白濃度測定試劑盒、DAB顯色試劑盒、TUNEL染色試劑盒購自北京天根科技生化有限公司,Trizol(美國Invitrogen公司),DEPC(美國Sigma公司),兔抗鼠Nephrin單克隆抗體、ZO-1兔抗鼠多克隆抗體、Podoplanin兔抗鼠多克隆抗體購自美國Abcam公司,辣根過氧化物酶標(biāo)記二抗(北京中杉金橋生物科技有限公司)。

    1.3 主要儀器

    Eppendorf 5427 R 臺式高速冷凍離心機(jī)、各種型號的移液器購自德國Eppendorf公司,CFX-96-C1000 qRT-PCR 儀、miRNA PCR Array Data Analysis Software、iMake多功能酶標(biāo)儀、SDS-PAGE電泳儀及電轉(zhuǎn)膜儀購自美國Bio Rad公司,CX41倒置光學(xué)顯微鏡(日本Olympus公司),AUW120電子分析天平(日本島津公司),Amersham電泳儀(瑞典Bioscience公司),LAS-4000 min凝膠成像數(shù)碼分析系統(tǒng)(日本FUJIFILM公司)。

    1.4 動(dòng)物模型的復(fù)制與分組

    經(jīng)過為期1周的適應(yīng)性飼養(yǎng)后,稱量并記錄大鼠體重,按照隨機(jī)數(shù)字表法,將60只SD大鼠隨機(jī)分為空白對照組(CTL組)、ADN模型組(ADN組)和MMF干預(yù)組(MMF組),每組20只。ADN組和MMF組大鼠都屬于ADN模型,筆者按照參考文獻(xiàn)[6]的方法,一次性尾靜脈注射6.5 mg/kg阿霉素溶液(0.2%)復(fù)制ADN模型;而CTL組大鼠以同樣的方式注射生理鹽水作為對照。1周后收集大鼠24 h尿液,測定24 h 尿蛋白量,尿蛋白 >30 mg/24 h 則表示模型復(fù)制成功。最終,ADN組和MMF組分別有18和19只大鼠模型復(fù)制成功,用于后續(xù)實(shí)驗(yàn)。

    1.5 藥物干預(yù)

    每日觀察受試大鼠進(jìn)食、排便、活動(dòng)、精神狀況等,稱重1次/d。根據(jù)動(dòng)物體重計(jì)算當(dāng)日給藥量。CTL組和ADN組:每天灌胃無菌生理鹽水,1 ml/100 g,1 次 /d,連續(xù)給藥 28 d。MMF 組:每天灌胃 1% MMF 溶液,20 mg/kg,1 次 /d,連續(xù)給藥 28 d。

    1.6 標(biāo)本采集與檢測

    1.6.1 腎功能 給藥第 0、7、14、21 和 28 天時(shí),用代謝籠采集大鼠24 h尿液,檢測尿蛋白。實(shí)驗(yàn)結(jié)束時(shí),經(jīng)尾靜脈采集外周血3 ml,置于枸櫞酸鈉真空采集管中,檢測各組大鼠血尿素氮(blood urea nitrogen,BUN)、血清肌酐(serum creatinine, Scr)水平。

    1.6.2 腎組織病理學(xué)檢查 待實(shí)驗(yàn)結(jié)束時(shí),將大鼠頸椎脫臼處死,取出腎組織,用10%甲醛固定,包埋成蠟塊。脫蠟水化后,用石蠟切片機(jī)切片,厚約2μm,置于載玻片上。烘干48 h后,進(jìn)行HE、PAS或Masson染色,觀察腎組織病理學(xué)變化。

    1.6.3 大鼠腎臟細(xì)胞凋亡情況 按照 TUNEL 染色試劑盒說明書進(jìn)行操作,置于光學(xué)倒置顯微鏡下觀察腎組織細(xì)胞凋亡情況。

    1.6.4 大鼠腎組織 miRNAs芯片分析 取大鼠腎組織提取總RNA:取100 mg組織樣本置于EP管中,加入MZ裂解液,按照miRelute miRNA提取分離試劑盒說明書步驟進(jìn)行操作;采用凝膠電泳檢測RNA分子量,分光光度計(jì)檢測RNA濃度。測定濃度和純度后進(jìn)行miRNAs芯片分析,后續(xù)操作委托上??党缮锕こ逃邢薰就瓿?。

    1.6.5 腎組織 miRNAs ①提取腎組織總 RNA:實(shí)驗(yàn)方法同1.6.4。②RNA逆轉(zhuǎn)錄:根據(jù)逆轉(zhuǎn)錄試劑盒說明書操作進(jìn)行。將cDNA保存至-20℃?zhèn)溆?。③qRT-PCR:按照三步法進(jìn)行PCR擴(kuò)增。以組織cDNA為模板,以β-actin為內(nèi)參,將20μl反應(yīng)體系置于 37℃恒溫水浴 60 min,85℃、5 s,加入去離子水至100μl,各反應(yīng)孔取2μl進(jìn)行PCR。冰浴中配制 20μl PCR 反應(yīng)體系,反應(yīng)條件:95℃預(yù)變性 30 s,95℃變性 5 s,60℃退火 30 s,共 45 個(gè)循環(huán)。根據(jù)NCBI數(shù)據(jù)庫獲得的資料設(shè)計(jì)引物,引物由上海生工生物工程有限公司合成并提供。PCR結(jié)果判斷:根據(jù)使用說明調(diào)整基線,將閾值設(shè)定在熒光值對數(shù)圖的線性部分,從軟件中讀取Ct值。

    1.7 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

    數(shù)據(jù)分析采用SPSS 17.0統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件。計(jì)量資料以(±s)表示,多組比較用單因素方差分析或重復(fù)測量設(shè)計(jì)的方差分析,兩兩比較用LSD-t檢驗(yàn),方差不齊則采用Kruskal-Wallis非參數(shù)檢驗(yàn)。采用Pearson相關(guān)性分析miRNAs與尿蛋白的相關(guān)性,P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

    2 結(jié)果

    2.1 各組大鼠一般情況及體重變化

    實(shí)驗(yàn)過程中,CTL組大鼠飲食和活動(dòng)正常;ADN組大鼠出現(xiàn)食欲減退、水腫、脫毛等情況,甚至有2只大鼠出現(xiàn)明顯的腹水;與CTL組大鼠相比,MMF組大鼠雖然也存在食欲減退、生長遲緩的情況,但是較ADN組大鼠輕。比較3組大鼠給藥后0、7、14、21和28 d的體重變化,采用重復(fù)測量設(shè)計(jì)的方差分析,結(jié)果:①不同時(shí)間點(diǎn)的大鼠體重比較,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(F=243.451,P=0.000);②3組大鼠體重比較,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(F=28.752,P=0.000);③ 3組大鼠體重變化趨勢比較,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(F=11.594,P=0.000)。進(jìn)一步兩兩比較經(jīng)LSD-t檢驗(yàn),自給藥7 d起,ADN組和MMF組大鼠體重低于CTL組大鼠(P<0.05);同時(shí)MMF組大鼠平均體重高于AND組(P<0.05)。見表 1 和圖 1。

    2.2 各組大鼠尿蛋白的變化

    3組大鼠尿蛋白含量比較,采用重復(fù)測量設(shè)計(jì)的方差分析,結(jié)果:①不同時(shí)間點(diǎn)尿蛋白含量比較,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(F=735.62,P=0.000);② 3組大鼠尿蛋白含量比較,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(F=28.769,P=0.000);③3組大鼠的尿蛋白含量變化趨勢比較,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(F=54.678,P=0.000)。進(jìn)一步兩兩比較經(jīng)LSD-t檢驗(yàn),給藥當(dāng)天,ADN組和MMF組大鼠尿蛋白含量高于CTL組(P<0.05);ADN組和MMF組大鼠尿蛋白含量比較,差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05);但是自給藥7 d后,雖然MMF組大鼠尿蛋白含量仍然高于CTL組,但是低于ADN組(P<0.05)。見表2和圖2。

    表1 各組大鼠不同時(shí)間點(diǎn)的體重比較 (g,±s)

    表1 各組大鼠不同時(shí)間點(diǎn)的體重比較 (g,±s)

    注:1)與CTL組比較,P<0.05;2)與ADN 組比較,P<0.05

    組別 n 給藥后0 d 給藥后7 d 給藥后14 d 給藥后21 d 給藥后28 d CTL 組 20 224.01±5.21 237.30±8.16 250.30±9.40 265.61±9.17 285.05±12.81 ADN組 18 210.39±6.23 219.00±10.461) 228.67±15.491) 234.06±23.291) 237.78±28.851)MMF 組 19 212.42±6.61 223.42±10.251)2) 234.37±12.251)2) 245.21±18.081)2) 263.32±22.341)2)

    圖1 各組大鼠體重變化趨勢 (±s)

    表2 各組大鼠不同時(shí)間點(diǎn)的尿蛋白比較 (mg/24 h,±s)

    表2 各組大鼠不同時(shí)間點(diǎn)的尿蛋白比較 (mg/24 h,±s)

    注:1)與CTL組比較,P<0.05;2)與ADN 組比較,P<0.05

    組別 n 給藥后0 d 給藥后7 d 給藥后14 d 給藥后21 d 給藥后28 d CTL 組 20 18.85±5.69 19.47±5.22 17.13±6.91 17.45±7.47 18.26±6.29 ADN 組 18 40.13±11.081) 95.87±23.711) 142.39±45.461) 229.35±76.151) 240.11±106.021)MMF 組 19 40.72±9.341) 51.56±16.421)2) 58.96±15.651)2) 61.71±16.231)2) 60.78±19.871)2)

    圖2 各組大鼠尿蛋白變化趨勢 (±s)

    2.3 各組大鼠生化指標(biāo)比較

    實(shí)驗(yàn)結(jié)束時(shí),3組大鼠外周血BUN和Scr水平比較,經(jīng)單因素方差分析,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。進(jìn)一步兩兩比較經(jīng)LSD-t檢驗(yàn),ADN組、MMF組大鼠血清BUN和Scr含量高于CTL組(P<0.05);與ADN組比較,MMF組大鼠血清BUN和Scr含量降低(P<0.05)。見表 3。

    表3 各組大鼠生化指標(biāo)比較 (±s)

    表3 各組大鼠生化指標(biāo)比較 (±s)

    注:1)與CTL 組比較,P<0.05;2)與ADN組比較,P<0.05

    組別 n BUN/(mmol/L) Scr/(μmol/L)CTL組 20 7.59±0.74 29.75±2.56 ADN組 18 18.12±0.831) 62.53±2.981)MMF 組 19 14.65±0.791)2) 38.27±2.611)2)F值 894.48 732.59 P值 0.000 0.000

    2.4 各組大鼠腎組織病理學(xué)變化

    光鏡下觀察CTL組大鼠腎小球形態(tài)基本正常,未見系膜增生,上皮細(xì)胞足突清晰可見;而ADN組大鼠腎小球肥大,系膜細(xì)胞增生,上皮細(xì)胞足突廣泛融合,毛細(xì)管腔狹窄,間質(zhì)出現(xiàn)輕、中度纖維化;MMF組大鼠腎小球變化較ADN組輕,但是與CTL組比較,仍可見明顯差異。見圖3。

    2.5 各組大鼠腎組織細(xì)胞凋亡情況

    TUNEL熒光染色定位于細(xì)胞核。CTL組、ADN組、MMF組大鼠腎組織細(xì)胞凋亡率分別為(3.56±1.32)%、(31.75±6.44)%和(14.73±5.18)%,經(jīng)單因素方差分析,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(F=172.608,P=0.000)。進(jìn)一步兩兩比較經(jīng)LSD-t檢驗(yàn),ADN組大鼠腎組織細(xì)胞凋亡率高于CTL組(P<0.05);MMF組大鼠腎組織細(xì)胞凋亡率雖然高于CTL組(P<0.05),但是低于ADN組(P<0.05)。見圖 4、5。

    2.6 各組大鼠腎組織miRNAs芯片分析結(jié)果

    采用GenePix Pro 6.0讀取芯片掃描結(jié)果,提取探針信號值,將相同的探針值中值合并,對芯片結(jié)果進(jìn)行中值標(biāo)準(zhǔn)化,篩選差異表達(dá)的miRNAs(Fold>1.5且P<0.05)。各組芯片之間信號強(qiáng)度相關(guān)性分析:CTL組與ADN組的相關(guān)系數(shù)為0.715,ADN組與MMF組的相關(guān)系數(shù)為0.632,CTL組與MMF組的相關(guān)系數(shù)為0.979。與CTL組相比,ADN組主要有19個(gè)miRNAs表達(dá)上調(diào),23個(gè)miRNAs表達(dá)下調(diào)。與ADN組相比,MMF組主要有7個(gè)miRNAs表達(dá)上調(diào),8個(gè)miRNAs表達(dá)下調(diào)。其中,相較于CTL組,ADN組大鼠腎組織中rno-miR-23a和rno-miR-300-3p表達(dá)上調(diào),rnomiR-24、rno-miR-300-3c表達(dá)下調(diào),而與ADN組相比,MMF組大鼠腎組織中rno-miR-24、rno-miR-300-3c表達(dá)上調(diào),rno-miR-23a和rno-miR-300-3p表達(dá)下調(diào)。見圖6。

    圖3 各組大鼠腎組織病理學(xué)變化

    圖4 各組大鼠腎組織細(xì)胞凋亡情況 (TUNEL×400)

    圖5 各組大鼠腎組織細(xì)胞凋亡率比較 (±s)

    2.7 各組大鼠腎組織miRNAs含量比較

    3組大鼠腎組織rno-miR-23a、rno-miR-300-3p、rno-miR-24、rno-miR-300-3c表達(dá)水平比較,經(jīng)單因素方差分析,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。進(jìn)一步兩兩比較經(jīng)LSD-t檢驗(yàn),與CTL組相比,ADN組大鼠腎組織rno-miR-23a和rno-miR-300-3p表達(dá)上調(diào)(P<0.05), 而 rno-miR-24 和 rno-miR-300-3c下調(diào)(P<0.05);與ADN組相比,MMF組大鼠腎組織rno-miR-24 和 rno-miR-300-3c表達(dá)上調(diào)(P<0.05),rno-miR-23a和rno-miR-300-3p下調(diào)(P<0.05)。見表4。

    圖6 層次聚類圖

    2.8 大鼠腎組織miRNAs與尿蛋白的相關(guān)性

    經(jīng)Pearson相關(guān)性分析,rno-miR-23a、rno-miR-300-3p與尿蛋白呈正相關(guān)(r=0.773和0.695,均P=0.000);而rno-miR-24、rno-miR-300-3c與尿蛋白呈負(fù)相關(guān)(r=-0.664 和 -0.647,均P=0.000)。

    表4 各組大鼠腎組織miRNAs表達(dá)水平比較 (±s)

    表4 各組大鼠腎組織miRNAs表達(dá)水平比較 (±s)

    注:1)與CTL組比較,P<0.05;2)與ADN 組比較,P<0.05

    組別 n rno-miR-23a rno-miR-300-3p rno-miR-24 rno-miR-300-3c CTL 組 20 1.00±0.07 1.00±0.03 1.00±0.02 1.00±0.03 ADN組 18 2.89±0.121) 2.71±0.041) 0.61±0.021) 0.54±0.041)MMF 組 19 1.23±0.081)2) 1.47±0.041)2) 0.86±0.041)2) 0.95±0.051)2)F值 2350.62 10772.77 1832.87 714.06 P值 0.000 0.000 0.000 0.000

    3 討論

    隨著人們飲食習(xí)慣的改變,加之環(huán)境因素的影響和生活工作壓力的增大,我國慢性腎病患者人群呈逐年增加的趨勢,成為威脅人類健康的主要原因之一[7]。目前普遍認(rèn)為,足細(xì)胞損傷是糖尿病腎病患者主要的發(fā)病機(jī)制之一[8]。足細(xì)胞是位于腎小球基底膜外側(cè)的最后一道濾過屏障,足細(xì)胞損傷導(dǎo)致腎小球基底膜通透性增加,腎小球?yàn)V過率降低,從而形成蛋白尿[9]。蛋白尿是絕大多數(shù)腎臟疾病早期出現(xiàn)的最常見的臨床癥狀[10]。目前大多數(shù)關(guān)于NS發(fā)病機(jī)制的研究都是集中在足細(xì)胞特異性表達(dá)分子上,如Nephrin、ZO-1、Podoplanin等,尤其是Nephrin蛋白表達(dá)下調(diào)與足細(xì)胞損傷關(guān)系最為密切[11],但是關(guān)于Nephrin蛋白的調(diào)控機(jī)制仍未明確。近幾年,隨著基因組學(xué)研究的深入及基因芯片技術(shù)的發(fā)展,越來越多的學(xué)者開始重視miRNAs在各種疾病發(fā)生、發(fā)展過程中發(fā)揮的重要作用。

    miRNAs是廣泛存在于真核生物細(xì)胞中僅具有22個(gè)核苷酸長度的內(nèi)源性小分子物質(zhì),與人體內(nèi)1/3基因的表達(dá)密切相關(guān),因具有特異性、高度保守性、集簇性等特點(diǎn),成為多種疾病研究的新靶點(diǎn)[12]。同樣,也有大量miRNAs高表達(dá)于腎組織細(xì)胞,在腎臟發(fā)育和腎功能調(diào)控過程中發(fā)揮重要作用[13]。既往研究顯示,miR-200家族、miR-300家族、miR-23家族、miR-26家族都與腎組織纖維化密切相關(guān)[14]。因此,探討miRNAs與足細(xì)胞損傷的關(guān)系對于NS發(fā)病機(jī)制的研究及新藥研發(fā)具有十分重要的臨床價(jià)值。

    目前,糖皮質(zhì)激素一直是NS患者的首選藥物,但是對于反復(fù)發(fā)作、激素依賴性/耐藥性NS患者,臨床建議選擇免疫抑制劑治療[15]。上個(gè)世紀(jì)末才開始將MMF用于激素抵抗性或復(fù)發(fā)性NS的治療[16]。雖然降低蛋白尿的臨床療效已經(jīng)得到普遍認(rèn)可,但是其作用機(jī)制仍尚未明確。ADN大鼠是公認(rèn)的、使用最為普遍的腎臟微小病變動(dòng)物模型,關(guān)于模型復(fù)制方法,目前沒有統(tǒng)一標(biāo)準(zhǔn)。有文獻(xiàn)認(rèn)為一次性注射大劑量阿霉素(≥7.5 mg/kg),雖然模型復(fù)制快,病變顯著,但是易出現(xiàn)嘔吐等副作用,大鼠死亡率較高[17]。而有文獻(xiàn)建議多次注射小劑量阿霉素(≤5 mg/kg),雖然癥狀適中,模型復(fù)制成功率較高,但是癥狀出現(xiàn)緩慢,模型復(fù)制周期長[18]。因此,筆者基于多年實(shí)驗(yàn)經(jīng)驗(yàn),選擇一次性尾靜脈注射6.5 mg/kg,大鼠生理狀況良好,死亡率低,癥狀適中。根據(jù)HE、PAS、Masson染色結(jié)果顯示,模型大鼠具備典型的急性足細(xì)胞損傷的特征,不僅出現(xiàn)蛋白尿,而且可觀察到腎小球肥大、系膜細(xì)胞增生、足細(xì)胞足突廣泛融合、毛細(xì)管腔狹窄、間質(zhì)出現(xiàn)輕、中度纖維化等足細(xì)胞損傷特征。同時(shí)筆者采用TUNEL染色法,證實(shí)模型大鼠足細(xì)胞凋亡率明顯升高。但是經(jīng)MMF作用28 d后,上述腎組織損傷、蛋白尿癥狀及足細(xì)胞凋亡情況都得到顯著改善。為進(jìn)一步證實(shí)MMF對足細(xì)胞保護(hù)的作用機(jī)制,筆者采用基因芯片技術(shù)篩查差異性表達(dá)的miRNAs,結(jié)果顯示,與CTL組相比,ADN組有19個(gè)miRNAs表達(dá)上調(diào),23個(gè)miRNAs表達(dá)下調(diào)。并且層次聚類圖顯示,miRNAs具有集簇分布的特點(diǎn)。另外,與ADN組相比,MMF組主要有7個(gè)miRNAs表達(dá)上調(diào),有8個(gè)miRNAs表達(dá)下調(diào)。這其中都包括rnomiR-23a、rno-miR-300-3p、rno-miR-24和rno-miR-300-3c。rno-miR-23a和rno-miR-24位于19號染色體[19],而miR-300-3p和miR-300-3c位于6號染色體[20],因此筆者推測,19號和6號染色體的基因可能與NS發(fā)病密切相關(guān),而且彼此在調(diào)控生物學(xué)行為過程中可能具有協(xié)同作用。為證實(shí)上述結(jié)論,本實(shí)驗(yàn)進(jìn)一步采取qRP-PCR檢測各組大鼠腎組織rno-miR-23a、rno-miR-300-3p、rno-miR-24和 rno-miR-300-3c的表達(dá)差異,結(jié)果與芯片結(jié)果基本一致。并且rnomiR-23a、rno-miR-300-3p、rno-miR-24和rno-miR-300-3c表達(dá)水平都與尿蛋白密切相關(guān)。以往,關(guān)于miR-23a/24/300-3p/300-3c的研究證實(shí),這幾種基因都屬于靶向炎癥因子的重要基因,除與炎癥的發(fā)生、發(fā)展密切相關(guān)外,還參與細(xì)胞的分化、增殖等生物學(xué)行為。但是尚沒有研究關(guān)注其與足細(xì)胞損傷的關(guān)系。筆者只是初步探討miR-23a/24/300-3p/300-3c可能參與蛋白尿的生成和足細(xì)胞損傷過程,為MMF作用機(jī)制的研究提供新思路,并且為進(jìn)一步藥物研究提供潛在的靶點(diǎn)基因,但是還需要后續(xù)研究探討具體對下游蛋白分子或信號通路的影響。

    綜上所述,通過復(fù)制ADN大鼠模型,筆者證實(shí)MMF具有抑制足細(xì)胞損傷和蛋白尿生成的作用,其機(jī)制可能是對19號和6號染色體部分miRNAs有干預(yù)作用。但是本項(xiàng)研究只是初步分析MMF對某些重要miRNAs的影響,為NS發(fā)病機(jī)制的研究及潛在治療靶點(diǎn)的發(fā)現(xiàn)提供理論證據(jù),仍然需要進(jìn)一步研究證實(shí)miRNAs對其相應(yīng)信號通路及蛋白的調(diào)控作用。

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