體外模擬胃腸消化過(guò)程中蒸汽爆破處理的苦蕎麩皮的抗氧化及抗增殖活性

唐宇，張小利，何曉琴，李葦舟，李富華,2，明建,2*

1(西南大學(xué) 食品科學(xué)學(xué)院，重慶，400715)2(重慶市特色食品工程技術(shù)研究中心，重慶，400715)

苦蕎(Tartary buckwheat, TB)，又稱韃靼蕎麥(FagopyrumtartaricumL. Gaerth)，是我國(guó)的特有品種資源，主要集中生長(zhǎng)在我國(guó)西南地區(qū)[1-2]?？嗍w中酚類物質(zhì)含量豐富，比玉米、小麥、燕麥、大米等谷物高5～16倍[3]。全谷物的健康益處與集中在谷物外層的生物活性化合物有關(guān)[4]。研究發(fā)現(xiàn)，谷物中的酚類化合物具有抗氧化性，可防止DNA、蛋白質(zhì)和膜脂等生物重要分子氧化損傷，并抑制HepG2細(xì)胞的增殖[5]?？嗍w中的多酚主要存在于麩皮部位[6-7]，然而，由于苦蕎麩皮口感粗糙，不易消化，所以大部分被丟棄，利用率較低。

蒸汽爆破(簡(jiǎn)稱汽爆)是一種新興的預(yù)處理方式，在0.005 08～0.008 75 s迅速釋放壓力，從而導(dǎo)致復(fù)雜的機(jī)械反應(yīng)[8-9]，具有高效、經(jīng)濟(jì)、環(huán)保的優(yōu)點(diǎn)。CHEN等[10]發(fā)現(xiàn)，蒸汽爆破處理后，漆樹(shù)果實(shí)的黃酮得率比原樣高8倍，西藏裸大麥的可溶性酚醛樹(shù)脂產(chǎn)量是未處理樣品的9倍[11]，蒸汽爆破已經(jīng)被證明是釋放與細(xì)胞壁中多糖結(jié)合的酚類化合物的有效方法。

有研究表明，經(jīng)胃腸道消化而釋放的活性成分才有可能被人體利用吸收[12-13]。麥麩基質(zhì)會(huì)阻礙多酚在人體胃腸道的釋放[14-15]。BAUBLIS等[16]也發(fā)現(xiàn)，消化過(guò)程能夠改變小麥基食品的抗氧化潛力。

本文以苦蕎麩皮為原料，利用蒸汽爆破對(duì)其進(jìn)行預(yù)處理，并結(jié)合體外模擬胃腸消化模型，研究蒸汽爆破前、后苦蕎麩皮在模擬胃腸消化階段多酚的釋放量，抗氧化活性及抑制人肝癌細(xì)胞HepG2和結(jié)腸癌細(xì)胞Caco-2增殖情況，為科學(xué)評(píng)價(jià)苦蕎麩皮的營(yíng)養(yǎng)價(jià)值，綜合開(kāi)發(fā)利用苦蕎麩皮資源提供參考。

1 材料與方法

1.1 試驗(yàn)材料與試劑

苦蕎麩皮，來(lái)源于四川西昌苦蕎品種苦蕎3號(hào)，由西昌市三匠蕎麥有限公司提供。

1.2 主要儀器與設(shè)備

QBS-80汽爆分析試驗(yàn)臺(tái)，河南鶴壁正道生物能源有限公司；DK-8B型電熱恒溫水浴鍋，上海精密實(shí)驗(yàn)設(shè)備有限公司；DK3B電熱恒溫水浴振蕩搖床，上海一恒科學(xué)儀器有限公司；Spectra Max M2型多功能酶標(biāo)儀，美國(guó)Molecular公司。

1.3 方法

1.3.1 苦蕎麩皮預(yù)處理

未汽爆組苦蕎麩皮的制備：將苦蕎麩皮研磨成粉，過(guò)60目篩，備用。

汽爆組苦蕎麩皮的制備：蒸汽爆破設(shè)備預(yù)熱后，將一定量的苦蕎麩皮原料放入汽爆罐(爆腔400 mL)中，關(guān)閉進(jìn)氣閥，待壓力上升至1.5 MPa后，開(kāi)始計(jì)時(shí)，維持壓力60 s，離爆破終點(diǎn)還有3 s時(shí)，將氣閥關(guān)閉，瞬間自動(dòng)泄壓。在物料回收窗收集蕎麥麩皮，干燥磨粉，過(guò)60目篩，備用。

1.3.2 體外模擬消化

體外模擬消化包含體外模擬胃消化和體外模擬腸消化兩部分。體外模擬腸消化是在胃消化的基礎(chǔ)上，根據(jù)胃消化的最佳消化時(shí)間點(diǎn)(即在該時(shí)間點(diǎn)多酚釋放量最高)，在此基礎(chǔ)上再進(jìn)行腸消化。

1.3.2.1 模擬胃消化

參照趙旭[17]實(shí)驗(yàn)方法，取20 g(干重)樣品，加入200 g 0.9%生理鹽水，均質(zhì)3 min使其溶解均勻，加熱糊化使其內(nèi)部中心溫度達(dá)到80 ℃并保持10 min，流水冷卻，添加少許去離子水至220 g；用1 mol/L HCl調(diào)pH至2.0，加入2.5 mL胃蛋白酶溶液(0.2 g胃蛋白酶溶于5 mL 0.01 mol/L HCl)?？瞻讓?duì)照組用等體積的生理鹽水替代鹽酸和胃液，胃酸對(duì)照組用等體積0.01 mol/L HCl代替胃蛋白酶溶液。避光，通氮?dú)猓?7 ℃恒溫水浴搖床消化4 h。分別在消化0, 1, 2, 3, 4 h時(shí)取出一定質(zhì)量懸濁液，12 000 r/min，4 ℃，離心15 min，取上清液，分裝，-80 ℃貯存?zhèn)溆谩?/p>

1.3.2.2 模擬腸消化

參照趙旭[17]實(shí)驗(yàn)方法，先模擬胃消化，步驟如1.3.2.1，達(dá)到最佳胃消化時(shí)間時(shí)終止胃消化，向消化液中加入1 mol/L NaHCO3調(diào)pH至6.9；加入5 mL胰酶-膽汁提取物(4 g胰酶、25 g膽汁提取液溶于1 L 0.1 mol/L NaHCO3緩沖溶液)，混勻。空白組用等體積NaHCO3緩沖溶液代替胰酶-膽汁提取物。避光，通氮?dú)猓?7 ℃恒溫水浴搖床消化6 h。分別在腸消化0, 1, 2, 3, 4 h取出一定質(zhì)量的懸濁液，12 000 r/min，4 ℃離心15 min，取上清液，分裝，-80 ℃貯存?zhèn)溆谩?/p>

1.3.3 多酚含量測(cè)定

采用福林酚法[3]。以沒(méi)食子酸為標(biāo)準(zhǔn)品，得線性回歸方程：y=0.002 5x+0.021 4；R2=0.998 3。測(cè)定結(jié)果以1 g苦蕎麩皮粉樣品中所含的沒(méi)食子酸當(dāng)量(mg GAE/g md)表示。

1.3.4 抗氧化活性測(cè)定

1.3.4.1 氧自由基清除能力(ORAC)

方法參照WOLFE等[18]。以Trolox為標(biāo)準(zhǔn)品，結(jié)果以1 g苦蕎麩皮中所含的Trolox當(dāng)量表示(μmol TE/ g md)。

1.3.4.2 細(xì)胞抗氧化活性測(cè)定

采用WOLFE等[19]建立的細(xì)胞模型，進(jìn)行細(xì)胞內(nèi)抗氧化活性的測(cè)定。HepG2單細(xì)胞懸液100 μL接種在96孔板上，每孔細(xì)胞數(shù)達(dá)到6×104個(gè)，于37 ℃，5%CO2條件下培養(yǎng)24 h后除去培養(yǎng)液，用PBS清洗每個(gè)接種孔。每孔添加100 μL不同濃度的樣品消化液(含有25 μmol/L的DCFH-DA)，在37 ℃，5%CO2條件下繼續(xù)培養(yǎng)1 h。取出96孔板，用100 μL PBS清洗每個(gè)孔，除去溶液后加入100 μL HBSS(含有600 μmol/L的ABAP)，將96孔板立即放入保持37 ℃恒溫的酶標(biāo)儀中，在激發(fā)波長(zhǎng)538 nm，入射波長(zhǎng)485 nm條件下測(cè)定熒光強(qiáng)度，每5 min測(cè)定1次，測(cè)定1 h。

1.3.5 抗增殖活性測(cè)定

細(xì)胞毒性參照WOLFE等[19]和FELICE等[20]的方法來(lái)測(cè)定。將100 μL HepG2單細(xì)胞懸液接于96孔板中，細(xì)胞個(gè)數(shù)為4×104/孔，在5%CO2，37 ℃培養(yǎng)24 h，待細(xì)胞生長(zhǎng)貼壁后移除孔內(nèi)培養(yǎng)基，無(wú)菌PBS清洗1次，將100 μL過(guò)濾除菌的含樣品消化液的培養(yǎng)基加至96孔板中(空白對(duì)照組只加生長(zhǎng)培養(yǎng)基)，在5%CO2，37 ℃條件下培養(yǎng)24 h，移除上清液，PBS清洗每個(gè)孔后去除溶液，加50 μL/孔亞甲基藍(lán)溶液(98%HBSS，0.67%戊二醛，0.6%亞甲基藍(lán))染色，5%CO2，37 ℃條件下培養(yǎng)1 h后，移除染料，并用去離子水清洗孔板至清洗液清澈透明，吸去板中多余水分，加100 μL/孔洗脫液(49%PBS，50%乙醇，1%醋酸)，振蕩器上振蕩20 min，最后在酶標(biāo)儀570 nm下測(cè)定吸光度。

苦蕎麩皮多酚細(xì)胞增殖抑制實(shí)驗(yàn)參考FELICE等[20]和YOON等[21]的亞甲基藍(lán)比色法。各樣品消化液在使用前以0.22 μm的膜過(guò)濾除菌。將人肝癌細(xì)胞HepG2細(xì)胞，人結(jié)腸癌細(xì)胞Caco-2細(xì)胞懸液分別接種于96孔細(xì)胞培養(yǎng)板，并使每孔的細(xì)胞數(shù)量為2.5×104個(gè)，于37 ℃，5%CO2條件下培養(yǎng)一定時(shí)間使細(xì)胞完全貼壁生長(zhǎng)(HepG2細(xì)胞一般培養(yǎng)4 h，Caco-2細(xì)胞一般需要培養(yǎng)6 h)，將生長(zhǎng)培養(yǎng)基移除，加入100 μL含不同濃度樣品消化液的處理培養(yǎng)基。在37 ℃，5%CO2條件下培養(yǎng)細(xì)胞96 h，移去處理培養(yǎng)基，將細(xì)胞染色，清洗，洗脫，在酶標(biāo)儀570 nm下測(cè)定吸光度，用空白孔去背景值。以半最大效應(yīng)濃度(EC50)來(lái)判定細(xì)胞的抗增殖作用。

1.4 數(shù)據(jù)處理

每個(gè)樣品重復(fù)測(cè)定3次，結(jié)果表示為平均值±標(biāo)準(zhǔn)偏差(Mean±SD)，運(yùn)用SPSS軟件(Version 19.0)進(jìn)行不同值之間的方差分析和Tukey’s檢驗(yàn)，顯著性差異值為P<0.05，圖表制作采用Origin軟件(Version 16.5)。

2 結(jié)果與分析

2.1 體外模擬消化過(guò)程苦蕎麩皮中多酚釋放量變化

體外模擬胃腸液消化過(guò)程中汽爆前后苦蕎麩皮多酚釋放量變化情況如圖1所示，未汽爆組和汽爆組麩皮胃、腸消化組的多酚釋放量明顯高于相應(yīng)的對(duì)照組(P<0.05)，即胃胰蛋白酶能促進(jìn)苦蕎麩皮多酚釋放，與HE等[22]的研究一致。模擬胃消化2 h后，未汽爆組麩皮的多酚釋放量從(0.92±0.05) mg GAE/g md增加到(2.04±0.08) mg GAE/g md，而汽爆組從(3.52±0.36) mg GAE/g md增加到(5.18±0.38) mg GAE/g md。腸消化4 h后，未汽爆組多酚釋放量從(2.15±0.01) mg GAE/g md增加到(3.19±0.16) mg GAE/g md，汽爆組從(5.61±0.01) mg GAE/g md增加到(10.23±0.18) mg GAE/g md。消化過(guò)程中多酚含量變化，可能是因?yàn)辂熎ぶ卸喾踊衔锵嗷プ饔?，影響了它們的溶解度和潛在生物利用度[23]。汽爆組的多酚含量在消化前后均高于未汽爆組，證明汽爆處理能提高多酚的釋放量。

圖1 汽爆前后苦蕎麩皮模擬胃腸消化中多酚含量變化
Fig.1 The change of phenolics content of Tartary buckwheat braninvitrosimulated gastrointestinal digestion
before and after steam explosion
注：A、B是未汽爆組麩皮，C、D是汽爆組麩皮。折線圖上不同字母表示差異顯著(P<0.05)。

2.2 體外模擬消化對(duì)苦蕎麩皮ORAC值影響

圖2表示了汽爆苦蕎麩皮和未處理麩皮胃腸消化液的ORAC值變化規(guī)律。與鹽酸、空白對(duì)照組相比，汽爆前后的苦蕎麩皮胃消化組的ORAC值均增加，與苦蕎芽粉饅頭體外消化后抗氧化能力研究中得到的結(jié)論一致[24]。酚類物質(zhì)通常以糖苷配體或者酯的形式存在，經(jīng)過(guò)胃液的酸性環(huán)境會(huì)水解釋放大量的多酚，使得樣品的多酚含量在模擬胃腸消化后顯著增加[25-26]，而ORAC值與多酚含量呈顯著性正相關(guān)[27]，所以模擬胃腸消化后苦蕎麩皮的ORAC值增大。在模擬胃消化過(guò)程中，汽爆組的ORAC值在4 h時(shí)最高，為(192.43±7.38) μmol TE/g md，較0 h提高了2.18倍；未汽爆組的ORAC值在2 h時(shí)最高，為(99.82±8.71) μmol TE/g md，是0 h的2.52倍。模擬腸消化過(guò)程中，汽爆組的ORAC在4 h最高，為(310.57±15.87) μmol TE/g md，較0 h提高了2.33倍，未汽爆組在3 h時(shí)ORAC最高，為160.54 μmol TE/g md，是0 h的1.71倍。模擬胃、腸消化全階段，汽爆組的ORAC值均高于未汽爆組，可能是因?yàn)檎羝铺幚泶龠M(jìn)黃酮糖苷去糖苷化制成苷元，去除糖基后的苷元生物活性優(yōu)于糖苷[10]。

2.3 苦蕎麩皮在體外模擬消化中細(xì)胞抗氧化活性變化

汽爆前、后麩皮多酚釋放量分別在胃消化2、3 h達(dá)到最大，所以此處分別對(duì)未汽爆麩皮胃消化2 h、汽爆麩皮胃消化3 h消化液進(jìn)行細(xì)胞抗氧化性評(píng)價(jià)?？寡趸瘎┠軌蜮邕^(guò)氧自由基，隨著多酚濃度增加，多酚處理孔的熒光強(qiáng)度降低，且低于未處理孔，即多酚細(xì)胞抗氧化能力越強(qiáng)。如圖3，未汽爆組胃0 h組，即胃消化初始液，在低質(zhì)量濃度(20、40 mg/mL)時(shí)促氧化，隨著濃度增加表現(xiàn)出抗氧化作用；胃消化2 h組和鹽酸對(duì)照2 h組，有良好的抗氧化的作用，隨濃度增加抗氧化效果增強(qiáng)?？瞻讓?duì)照2 h組在低質(zhì)量濃度(<80 mg/mL)時(shí)促氧化，高質(zhì)量濃度(>80 mg/mL)時(shí)呈現(xiàn)抗氧化作用。汽爆組苦蕎麩皮和空白對(duì)照組具有良好的抗氧化活性，且隨消化液質(zhì)量濃度的增加抗氧化活性越強(qiáng)。鹽酸對(duì)照組在低質(zhì)量濃度(20、40 mg/mL)表現(xiàn)出一定的促氧化作用，當(dāng)濃度大于60 mg/mL，具有抗氧化作用，且隨著質(zhì)量濃度的增加而抗氧化作用增強(qiáng)。

圖2 苦蕎麩皮模擬胃腸消化ORAC值的變化
Fig.2 The change of ORAC value of the Tartary buckwheat braninvitrosimulated gastrointestinal digestion
注：A、C是未汽爆組苦蕎麩皮；B、D是汽爆組苦蕎麩皮;折線圖上不同字母表示差異顯著(P<0.05)。

圖3 體外模擬胃消化過(guò)程中苦蕎麩皮消化液細(xì)胞抗氧化動(dòng)力學(xué)曲線
Fig.3 Cell antioxidant activity(CAA)kinetic curve of the Tartary buckwheat bran digestive fluidinvitrosimulated gastric digestion
注：A、C、E、G分別是未汽爆麩皮的胃消化0 h、胃消化2 h、鹽酸對(duì)照2 h、胃空白對(duì)照2 h組；B、D、F、H分別是
汽爆麩皮的胃消化0 h、胃消化3 h、鹽酸對(duì)照3 h、胃空白對(duì)照3 h組

汽爆前、后苦蕎麩皮腸消化液的細(xì)胞抗氧化動(dòng)力學(xué)曲線見(jiàn)圖4，未汽爆組腸消化0、4 h，空白對(duì)照組4 h的熒光動(dòng)力曲線均高于空白質(zhì)量濃度，表現(xiàn)出促氧化效果，沒(méi)有細(xì)胞抗氧化活性。而汽爆組腸消化0 h、4 h、空白對(duì)照組4 h在低質(zhì)量濃度(20 mg/mL)時(shí)也促氧化，當(dāng)質(zhì)量濃度大于40 mg/mL時(shí)，其熒光動(dòng)力曲線低于空白濃度，呈現(xiàn)抗氧化作用。由圖3、圖4可知，未汽爆組和汽爆組麩皮的胃消化組都有細(xì)胞抗氧化性，其抗氧化活性隨這消化液質(zhì)量濃度的增加而增強(qiáng)；未汽爆麩皮的腸消化組沒(méi)有細(xì)胞抗氧化活性，汽爆麩皮的腸消化組在一定質(zhì)量濃度(>40 mg/mL)有細(xì)胞抗氧化活性，即蒸汽爆破對(duì)麩皮的抗氧化能力有一定的影響。

圖4 體外模擬腸消化過(guò)程中苦蕎麩皮消化液細(xì)胞抗氧化動(dòng)力學(xué)曲線
Fig.4 Cell antioxidant activity(CAA)kinetic curve of the Tartary buckwheat bran digestive fluidinvitro
simulated intestinal digestion
注：A、C、E分別是未汽爆麩皮的腸消化0 h、腸消化4 h、腸空白對(duì)照4 h組；B、D、F分別是汽爆麩皮的腸消化0 h、
腸消化4 h、腸空白對(duì)照4 h組

汽爆前、后苦蕎麩皮胃腸消化液的細(xì)胞抗氧化EC50值如表1所示。汽爆前、后苦蕎麩皮胃消化組的EC50均小于其他對(duì)照組，即麩皮胃消化后抗氧化活性增強(qiáng)，此結(jié)果與FALLER等[28]的結(jié)果一致，消化后八寶飯的細(xì)胞抗氧化性也比未消化樣品強(qiáng)。模擬腸消化，只有汽爆麩皮腸消化組具有細(xì)胞抗氧化活性(EC50=(150.32±6.43) mg/mL)，且強(qiáng)于腸空白對(duì)照組，說(shuō)明胰酶對(duì)抗氧化物質(zhì)的釋放有增強(qiáng)的作用，也進(jìn)一步說(shuō)明汽爆后麩皮的腸消化液更容易被細(xì)胞吸收，而未汽爆麩皮的腸消化液未進(jìn)入細(xì)胞內(nèi)部而被PBS洗去。

2.4 苦蕎麩皮體外模擬消化液抗增殖活性研究

2.4.1 苦蕎麩皮體外模擬消化液抑制HepG2細(xì)胞增殖作用

表1 苦蕎麩皮在體外模擬胃腸消化過(guò)程細(xì)胞抗氧化活性(EC50)Table 1 The EC50 values in CAA assay of the Tartarybuckwheat bran in vitro simulated gastrointestinal digestion

注：nd表示因無(wú)細(xì)胞抗氧化活性而未檢測(cè)到EC50值。

圖5顯示汽爆前、后苦蕎麩皮各消化組對(duì)HepG2細(xì)胞的抗增殖作用。表2列出了汽爆前、后苦蕎麩皮體外模擬胃腸消化液抑制HepG2和Caco-2細(xì)胞的EC50值。EC50值越小，細(xì)胞抗增殖率越大。未汽爆麩皮胃消化2 h組對(duì)HepG2細(xì)胞的抑制作用(EC50=(12.89±0.97) mg/mL)弱于胃消化0 h組(EC50=(10.56±0.29) mg/mL)，汽爆麩皮腸消化4 h組對(duì)HepG2細(xì)胞的抑制效果(EC50=(4.88±0.97) mg/mL)弱于空白對(duì)照組(EC50=(3.51±0.05) mg/mL)，此結(jié)果與BOAVENTURA等[29]的研究結(jié)果類似。而汽爆麩皮胃消化2 h組和未汽爆麩皮腸消化4 h組對(duì)HepG2細(xì)胞抑制作用增強(qiáng)，所以此時(shí)并不能斷定苦蕎麩皮消化液不能抑制HepG2細(xì)胞的增殖，還需深入研究。

A-未汽爆組;B-汽爆組麩皮圖5 苦蕎麩皮體外模擬胃腸消化液對(duì)HepG2細(xì)胞的抗增殖作用Fig.5 The antiproliferative effects against human HepG2 liver cancer cells by the digestive fluid of the Tartary buckwheat branin vitro simulated gastrointestinal digestion

表2 苦蕎麩皮體外模擬胃腸消化液對(duì)HepG2和Caco-2細(xì)胞的抗增殖活性(EC50)和細(xì)胞毒性(CC50)Table 2 The anti-proliferation (EC50) and cytotoxicity (CC50) of the Tartary buckwheat bran againsthuman HepG2 liver cancer cells and human Caco-2 colon cancer cells in vitro simulated gastrointestinal digestion

消化液HepG2細(xì)胞Caco-2細(xì)胞EC50/(mg·mL-1)CC50/(mg·mL-1)EC50/(mg·mL-1)CC50/(mg·mL-1)樣1胃消化0 h11.70±0.12cd>10036.40±1.21e>15樣1胃消化組2 h12.89±0.97c>1373.60±2.89b>13樣1鹽酸對(duì)照組2 h18.43±0.04a>1361.41±2.31c>15樣1胃空白對(duì)照組2 h10.56±0.29de>12526.31±0.90f>5樣1腸消化0 h6.95±0.09g>25132.20±5.78a>20樣1腸消化組4 h3.01±0.17i>5024.06±0.99f>20樣1腸空白對(duì)照組4 h8.57±1.45f>1339.16±3.38de>20樣2胃消化0 h12.32±0.13c>10025.48±1.02f>20樣2胃消化組2 h9.37±1.20ef>2041.20±0.22d>15樣2鹽酸對(duì)照組2 h16.31±0.31b>1525.40±1.79f>3樣2胃空白對(duì)照組2 h12.48±0.99c>9517.97±0.67g>10樣2腸消化0 h6.68±0.10g>10024.27±0.98f>20樣2腸消化組4 h4.88±0.97h>10013.27±0.85h>15樣2腸空白對(duì)照組4 h3.51±0.05i>10013.13±0.27h>19

注：樣1、樣2分別是未汽爆組苦蕎麩皮、汽爆組苦蕎麩皮。

2.4.2 苦蕎麩皮體外模擬消化液抑制Caco-2細(xì)胞增殖作用

如圖6，未汽爆和汽爆麩皮的胃腸消化組對(duì)Caco-2細(xì)胞的抑制作用并不顯著。在麩皮質(zhì)量濃度為20 mg/mL時(shí)，汽爆麩皮胃、腸消化組Caco-2細(xì)胞的增殖率分別為56.1%、26.9%，未汽爆麩皮胃、腸消化組Caco-2細(xì)胞的增殖率分別為85.9%、59.9%，汽爆麩皮胃、腸消化組對(duì)Caco-2細(xì)胞的抗增殖作用均高于未汽爆麩皮，蒸汽爆破促進(jìn)了苦蕎麩皮對(duì)Caco-2細(xì)胞的抑制。然而由表2可知汽爆前后的苦蕎麩皮的EC50值均大于對(duì)應(yīng)的毒性濃度，所以這種抗增殖作用可能是由于細(xì)胞毒性引起的。未汽爆組麩皮的胃消化組對(duì)Caco-2細(xì)胞的抗增殖作用弱于其胃消化0 h組，該結(jié)果與FRONTELA-SASETA等[30]的研究一致，消化后菠蘿汁對(duì)Caco-2細(xì)胞的抑制作用也弱于新鮮樣品。然而，汽爆組麩皮的胃消化組對(duì)Caco-2細(xì)胞的抗增殖作用強(qiáng)于其胃消化0 h組，有可能蒸汽爆破促進(jìn)了麩皮活性成分的釋放，因此，對(duì)Caco-2細(xì)胞的抗增殖作用增強(qiáng)。

A-未汽爆組；B-汽爆組麩皮圖6 苦蕎麩皮體外模擬胃腸消化液對(duì)Caco-2細(xì)胞的抗增殖作用Fig.6 The antiproliferative effects against human Caco-2 colon cancer cells by the digestive fluid of theTartary buckwheat bran in vitro simulated gastrointestinal digestion

3 結(jié)論

本文以苦蕎麩皮為研究對(duì)象，利用蒸汽爆破對(duì)苦蕎麩皮進(jìn)行預(yù)處理，并結(jié)合體外模擬胃腸消化模型，通過(guò)測(cè)定消化過(guò)程中多酚的釋放及ORAC值的變化，并對(duì)其細(xì)胞抗氧化活性、細(xì)胞抗增殖活性進(jìn)行研究。結(jié)果表明，蒸汽爆破預(yù)處理、胃蛋白酶及胰酶都能促進(jìn)苦蕎麩皮多酚黃酮的釋放，并且汽爆苦蕎麩皮的ORAC值高于未汽爆苦蕎麩皮。細(xì)胞抗氧化活性評(píng)價(jià)結(jié)果顯示，汽爆前后苦蕎麩皮的胃消化組都有細(xì)胞抗氧化活性，而模擬腸消化，只有汽爆組麩皮具有細(xì)胞抗氧化活性。同時(shí)，在細(xì)胞毒性濃度范圍內(nèi)，兩種苦蕎麩皮的胃腸消化液對(duì)HepG2細(xì)胞增殖均有抑制作用，抗增殖活性大小為：未汽爆麩皮腸消化組>汽爆麩皮腸消化組>汽爆麩皮胃消化組>未汽爆麩皮胃消化組。汽爆前、后麩皮的胃腸消化液對(duì)Caco-2細(xì)胞都有抑制作用，但這種抗增殖作用可能是由于細(xì)胞毒性引起的。綜上所述，蒸汽爆破能促進(jìn)苦蕎麩皮多酚的釋放，并且促進(jìn)其在細(xì)胞的吸收，且仍保持其抗氧化活性。蒸汽爆破處理的苦蕎麩皮具有一定的抗增殖活性，值得進(jìn)一步在體內(nèi)調(diào)查研究。