食養(yǎng)復(fù)方黃山精對(duì)小鼠的抗疲勞作用

唐華偉 朱雪萍 劉文瑞 毛信心 蔣啟月 肖志凱 楊聯(lián)河

(河南中醫(yī)藥大學(xué)，河南 鄭州 450008)

隨著生活方式的改變，疲勞現(xiàn)象越發(fā)普遍。老年人機(jī)體功能下降，更易感到疲勞。中醫(yī)認(rèn)為過(guò)度勞累，強(qiáng)行調(diào)動(dòng)人體的陽(yáng)氣，會(huì)消耗人體的陰精，若不加以制止，最終會(huì)導(dǎo)致陰精竭絕。目前抗疲勞方案多采用單一成分保健品或單味中藥〔1〕，抗疲勞效果受到一定限制。復(fù)方制劑雖彌補(bǔ)了單組分的不足，但存在價(jià)格昂貴、取材困難、制作工藝繁雜、有一定的副作用等弊端〔2～4〕。本實(shí)驗(yàn)運(yùn)用中醫(yī)陰陽(yáng)互根理論，選取國(guó)家衛(wèi)生和計(jì)劃生育委員會(huì)(下簡(jiǎn)稱：衛(wèi)計(jì)委)公布的“既是食品又是藥品的物品名單”〔5〕中的5味原料：黃精、山藥、枸杞、桑葚、肉桂進(jìn)行組方，既具有藥物的療效性，又具備食物的安全性，且取材方便。研究表明，復(fù)方黃山精的君藥黃精和山藥具有抗菌、解毒、抗疲勞、抗衰老等多重療效〔6,7〕，近年來(lái)，枸杞、桑葚、肉桂的保健作用也備受關(guān)注〔8,9〕。本實(shí)驗(yàn)通過(guò)負(fù)重游泳實(shí)驗(yàn)及與疲勞相關(guān)指標(biāo)評(píng)估復(fù)方黃山精的抗疲勞作用。

1 材料與方法

1.1材料與主要儀器 尿素氮(BUN)測(cè)試盒、肝糖原測(cè)試盒、血清乳酸脫氫酶(LDH)測(cè)試盒、超氧化物歧化酶(SOD)測(cè)試盒、丙二醛(MDA)測(cè)試盒均購(gòu)于南京建成生物工程研究所。Multiskan GO型全波長(zhǎng)酶標(biāo)儀：賽默飛世爾科技公司；TB-215D型電子天平：美國(guó)丹佛；KG-AP32L型高壓滅菌鍋：日本ALP公司；自制游泳箱50 cm×50 cm×40 cm。

1.2復(fù)方黃山精的制備 將黃精、山藥、枸杞、桑葚、肉桂浸泡后的中藥飲片，放入砂鍋內(nèi)加入適量水，武火煮開后，用文火煎煮1 h，濾出藥液，向藥渣中加入適量的熱水再次煎煮30 min。將兩次煎煮的藥液混合均勻后，濃縮至所需濃度，4℃保存。

1.3實(shí)驗(yàn)動(dòng)物及分組 昆明種清潔級(jí)雄性小鼠200只，18～22 g，購(gòu)于濟(jì)南朋悅實(shí)驗(yàn)動(dòng)物繁育有限公司，許可證號(hào)：SCXK(魯)2014007。先進(jìn)行游泳篩選實(shí)驗(yàn)，將不會(huì)游泳或游泳姿勢(shì)不協(xié)調(diào)的小鼠剔除。將篩選后的144只小鼠隨機(jī)分為3批，每批48只，每批動(dòng)物隨機(jī)分為4組：生理鹽水組和復(fù)方黃山精高、中、低濃度組。

1.4分組及給藥 生理鹽水組給予生理鹽水(3 ml/kg)。復(fù)方黃山精高、中、低組分別給予3.705 g/ml、2.470 g/ml和1.235 g/ml復(fù)方黃山精藥液，分別相當(dāng)于正常人體用量的3倍、2倍和1倍。灌胃量為0.01 ml·g-1·d-1，每3 d稱重1次，根據(jù)體重改變灌胃量，連續(xù)灌胃14 d。

1.5實(shí)驗(yàn)方法 參照《保健食品檢驗(yàn)與評(píng)價(jià)技術(shù)規(guī)范》(2003版)〔10〕，實(shí)驗(yàn)分3批進(jìn)行：①小鼠負(fù)重游泳力竭時(shí)間及SOD、MDA水平測(cè)定；②小鼠LDH水平測(cè)定；③小鼠血清BUN和肝糖原水平測(cè)定。

1.5.1小鼠負(fù)重游泳力竭時(shí)間及SOD、MDA水平測(cè)定 末次給予受試物40 min后，在小鼠尾部負(fù)荷相當(dāng)于體重10%的鉛塊，置于水深30 cm、水溫(25±1)℃的自制游泳箱中負(fù)重游泳，游泳期間如有弓腰停止、懸浮休息者，用玻璃棒刺激游動(dòng)以防偷懶。以小鼠頭部沉入水中5 s不再浮起為力竭，記錄小鼠負(fù)重游泳力竭時(shí)間。力竭后立即撈出，電吹風(fēng)吹干后放回原籠飼養(yǎng)。休息24 h后摘眼球采血，3 500 r/min離心15 min，分離血清備用，嚴(yán)格按照試劑盒說(shuō)明書測(cè)定SOD活性和MDA含量。

1.5.2小鼠血清乳酸脫氫酶水平測(cè)定 末次給予受試物40 min后，將各組小鼠置于水溫30℃的自制游泳箱，不負(fù)重游泳10 min撈出，休息20 min后立即摘眼球采血，3 500 r/min離心15 min，分離血清備用，嚴(yán)格按照說(shuō)明書測(cè)LDH活性。

1.5.3小鼠血清BUN和肝糖原水平測(cè)定 末次給予受試物40 min后，將各組小鼠置于水溫30℃的自制游泳箱，不負(fù)重游泳90 min撈出，休息60 min后立即摘眼球采血，3 500 r/min離心15 min，分離血清備用；采血后立即處死小鼠，摘取肝臟備用，嚴(yán)格按照說(shuō)明書測(cè)定BUN和肝糖原含量。

1.6統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 采用SPSS20.0軟件進(jìn)行單因素方差分析檢驗(yàn)：若方差齊，采用LSD法；若方差不齊，采用Tamhane法。

2 結(jié) 果

2.1復(fù)方黃山精對(duì)負(fù)重游泳力竭時(shí)間的影響 與生理鹽水組相比，復(fù)方黃山精各濃度組小鼠負(fù)重游泳力竭時(shí)間增加，且負(fù)重游泳力竭時(shí)間隨給藥濃度的增加而延長(zhǎng)，但只有高濃度組差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01)。見表1。

2.2復(fù)方黃山精對(duì)血清LDH活性的影響 與生理鹽水組比較，復(fù)方黃山精各濃度組LDH活性提高，但只有高濃度組差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。見表1。

表1 各組力竭時(shí)間及血清LDH活性比較

與生理鹽水組比較：1)P<0.05，2)P<0.01；下表同

2.3復(fù)方黃山精對(duì)BUN含量的影響 與生理鹽水組相比，復(fù)方黃山精各濃度組血清BUN含量顯著降低(P<0.01)，且具有濃度依賴性。見表2。

2.4復(fù)方黃山精對(duì)肝糖原含量的影響 與生理鹽水組相比，復(fù)方黃山精各濃度組肝糖原儲(chǔ)存量明顯增加，但只有高、中濃度組差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05；P<0.01)。見表2。

2.5復(fù)方黃山精對(duì)血清SOD活性的影響 與生理鹽水組相比，復(fù)方黃山精各濃度組SOD活性顯著升高(P<0.01)。見表3。

2.6復(fù)方黃山精對(duì)血清MDA含量的影響 與生理鹽水組相比，復(fù)方黃山精各濃度組MDA含量均降低，但只有高、低濃度組差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。見表3。

表2 各組血清BUN及肝糖原比較

表3 各組血清SOD活性及血清MDA含量比較

3 討 論

復(fù)方黃山精以黃精、山藥為君藥，黃精具有補(bǔ)氣養(yǎng)陰、健脾潤(rùn)肺益腎之用；山藥具有益氣澀精、平補(bǔ)肺脾腎之功，兩藥共奏補(bǔ)腎健脾益肺之效。臣藥以枸杞、桑葚，酸甘化陰，助君藥補(bǔ)精益氣養(yǎng)陰。少佐肉桂，補(bǔ)火助陽(yáng)，溫化陰精，以防厚味礙胃之弊。全方共奏滋補(bǔ)陰精，少火生氣之效，從而提高機(jī)體耐力，緩解疲勞。運(yùn)動(dòng)耐力的提高是抗疲勞能力加強(qiáng)最直接的表現(xiàn)〔11〕。本實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，復(fù)方黃山精均可延長(zhǎng)小鼠負(fù)重游泳力竭時(shí)間，有明顯的抗運(yùn)動(dòng)耐力下降的作用。

機(jī)體在劇烈運(yùn)動(dòng)時(shí)，缺氧使大量葡萄糖通過(guò)無(wú)氧酵解途徑提供能量，造成糖酵解產(chǎn)物乳酸大量堆積，引發(fā)一系列生化反應(yīng)，進(jìn)而造成運(yùn)動(dòng)性疲勞。LDH在乳酸的代謝過(guò)程中起催化作用，LDH活性的升高，可以加速乳酸的清除代謝從而起到抗疲勞作用〔12〕。本實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示復(fù)方黃山精可顯著提高小鼠LDH活性，減少乳酸堆積而產(chǎn)生抗疲勞的作用。

BUN與機(jī)體功能、疲勞程度及負(fù)荷量的大小呈正相關(guān)〔12〕。劇烈運(yùn)動(dòng)時(shí)，糖或脂肪分解產(chǎn)生的能量不能滿足機(jī)體需要，此時(shí)蛋白質(zhì)分解以補(bǔ)充能量，進(jìn)而造成蛋白質(zhì)的代謝產(chǎn)物BUN含量的增加。本研究中復(fù)方黃山精可顯著降低小鼠BUN含量，提示劇烈運(yùn)動(dòng)時(shí)復(fù)方黃山精可降低蛋白質(zhì)分解，提高機(jī)體運(yùn)動(dòng)負(fù)荷量。肝糖原是一個(gè)反應(yīng)疲勞狀態(tài)較敏感的指標(biāo)〔11〕。劇烈運(yùn)動(dòng)時(shí)，肌糖原消耗不斷增加，肝糖原儲(chǔ)備減少以維持血糖水平。實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，復(fù)方黃山精可通過(guò)增加肝糖原儲(chǔ)備和(或)減少運(yùn)動(dòng)時(shí)肝糖原的消耗，從而為機(jī)體提供更多的能量來(lái)增強(qiáng)小鼠的抗疲勞能力。

長(zhǎng)時(shí)間運(yùn)動(dòng)后體內(nèi)會(huì)產(chǎn)生大量的自由基和活性氧，過(guò)量的自由基和活性氧是使人體功能下降和產(chǎn)生疲勞的重要因素〔13〕。SOD是清除自由基的重要酶，直接反映機(jī)體抗氧化水平。MDA是自由基引起的脂質(zhì)過(guò)氧化的主要產(chǎn)物之一。本實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，復(fù)方黃山精可以有效提高SOD活性，降低MDA含量，清除自由基和活化氧從而產(chǎn)生抗疲勞作用。綜上，本實(shí)驗(yàn)表明食養(yǎng)復(fù)方黃山精具有緩解體力疲勞的作用。