CA199、TMPRSS4在早期非小細(xì)胞肺癌組織的表達(dá)及在腫瘤血管形成中的作用

黃漢琮 陳乾華 楊曉蕊

(航空總醫(yī)院，北京 100012)

肺癌是目前臨床常見(jiàn)的惡性腫瘤之一，對(duì)人類健康危害極其嚴(yán)重〔1〕。相關(guān)報(bào)道顯示〔2〕，近年來(lái)各個(gè)國(guó)家的肺癌發(fā)病率平均增長(zhǎng)了15%～65%。肺癌患者中大部分是非小細(xì)胞肺癌(NSCLC)患者預(yù)后通常較差，很大一部分原因是診斷出肺癌病變時(shí)已經(jīng)是肺癌中晚期，錯(cuò)過(guò)了最佳治療時(shí)間。穿膜絲氨酸蛋白酶(TMPRSS)4是穿膜絲氨酸蛋白酶中的主要成員，具有胰蛋白活性〔3〕。本研究探討TMPRSS4、糖鏈抗原(CA)199在早期NSCLC組織及癌旁組織的表達(dá)及與腫瘤血管形成中的作用。

1 資料和方法

1.1一般資料 選取2014年1～12月在中國(guó)醫(yī)科大學(xué)航空總醫(yī)院胸外科接受治療的原發(fā)性早期NSCLC患者85例，男56例，女29例，年齡40～73〔平均(61.52±10.93)〕歲，平均體重指數(shù)(21.7±2.1)kg/m2。所有患者經(jīng)病理診斷證實(shí)為早期NSCLC。腺癌64例，鱗癌21例；高分化33例，中分化與低分化各26例。排除標(biāo)準(zhǔn)：①入院前已接受化療、放療以及其他抗癌治療；②合并糖尿病、高血壓等疾??；③有顱腦、肝臟等遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移。

1.2研究方法

1.2.1采用免疫組化法檢測(cè)NSCLC患者體內(nèi)癌組織及癌旁組織CA199、TMPRSS4及CD34的表達(dá) 手術(shù)取患者癌組織及癌旁組織制成切片并染色。將切片置于60℃的環(huán)境中保存1 h，采用二甲苯溶液脫蠟、酒精退水。分成3份分別加入TMPRSS4、CA199及CD34抗體進(jìn)行單抗，培育后自來(lái)水沖洗，復(fù)染、氨水反藍(lán)、脫水干燥等操作，最后封片進(jìn)行鏡檢。記錄CA199及TMPRSS4陽(yáng)性檢出率。

1.2.2采用Real-time PCR檢測(cè)癌組織與癌旁組織中TMPRSS4 mRNA的表達(dá)量 提取14對(duì)NSCLC患者癌組織及癌旁組織的總RNA，根據(jù)D260/D280的比值來(lái)測(cè)定RNA的濃度。反應(yīng)條件為95℃下預(yù)變性2 min，94℃下變性20 s，60℃退火20 s，72℃下延伸30 s，總共40個(gè)循環(huán)。

1.3結(jié)果判斷 在鏡下觀察免疫組織化學(xué)的結(jié)果，若細(xì)胞質(zhì)與細(xì)胞核呈現(xiàn)棕黃色的細(xì)顆粒則為陽(yáng)性表達(dá)，TMPRSS4蛋白的陽(yáng)性表達(dá)為細(xì)胞膜陽(yáng)性。根據(jù)陽(yáng)性細(xì)胞所占的百分比分為陽(yáng)性及陰性：陽(yáng)性細(xì)胞率<25%為陰性，≥25%為陽(yáng)性。根據(jù)腫瘤血管形成的定量評(píng)價(jià)方法對(duì)微血管密度(MVD)進(jìn)行計(jì)數(shù)。

1.4統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 采用SPSS13.0軟件進(jìn)行χ2及t檢驗(yàn)，相關(guān)性分析選用Spearman法。

2 結(jié) 果

2.1NSCLC患者CA199的表達(dá)與臨床病理類型、癌旁組織的關(guān)系 CA199在癌組織中陽(yáng)性率為91.76%，明顯高于癌旁組織中的陽(yáng)性率(16.47%)；TNM分期中Ⅰ期的陽(yáng)性率為82.35%，明顯低于Ⅱ期的陽(yáng)性率(98.04%)，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(均P<0.05)。見(jiàn)表1。

表1 NSCLC患者CA199的表達(dá)與病理類型、癌旁組織的關(guān)系〔n(%)〕

2.2NSCLC患者TMPRSS4 mRNA表達(dá)量、蛋白陽(yáng)性檢出率與癌旁組織的關(guān)系 TMPRSS4 mRNA在癌組織中的表達(dá)量為1.827±0.451，顯著高于癌旁組織(0.915±0.316)；TMPRSS4蛋白在癌組織中的檢出率為82.35%，顯著大于癌旁組織(16.47%)，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(t=15.269,P=0.000;χ2=73.798,P=0.000)。

2.3NSCLC組織內(nèi) MVD 與臨床病理特征的關(guān)系 TNM分期Ⅱ期的患者高M(jìn)VD的比例顯著高于Ⅰ期，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。見(jiàn)表2。

表2 NSCLC組織內(nèi) MVD 與臨床病理特征的關(guān)系(n)

3 討 論

CA199是細(xì)胞膜上的糖脂質(zhì)，分子量較大，是目前臨床上對(duì)胰腺癌敏感度最高的腫瘤標(biāo)志物〔4〕。有相關(guān)報(bào)道表明，TMPRSS4在人體正常組織中很難檢測(cè)到，但在胰腺癌及各種癌癥組織中通常呈現(xiàn)高表達(dá)〔5〕。CD34蛋白是一種人體血管內(nèi)皮細(xì)胞的特殊標(biāo)志物，臨床上能夠通過(guò)對(duì)CD34蛋白的表達(dá)檢測(cè)腫瘤患者腫瘤組織中的腫瘤血管密度，從而判斷腫瘤血管的形成〔6〕。本研究結(jié)果提示CA199在NSCLC患者癌組織中的表達(dá)明顯多于癌旁組織，對(duì)肺癌的早期診斷具有重要意義。李培超等〔7，8〕的研究中發(fā)現(xiàn)，CA199可作為肺癌的一個(gè)檢測(cè)指標(biāo)，而對(duì)腫瘤病理分型診斷意義不大。在本研究中，CA199在肺癌組織中的表達(dá)遠(yuǎn)高于癌旁組織同樣能證明此結(jié)論。原因可能在于TMPRSS4表達(dá)在某些器官和腫瘤組織的細(xì)胞表面，具有可以降解細(xì)胞膜及其細(xì)胞外基質(zhì)的潛在功能，因此可以促進(jìn)腫瘤的擴(kuò)散和轉(zhuǎn)移。本研究結(jié)果提示NSCLC的發(fā)生、加重與TMPRSS4的高表達(dá)關(guān)系密切。有報(bào)道亦證實(shí)，TMPRSS4基因的表達(dá)若較高能夠?qū)е翹SCLC患者腫瘤血管形成〔9〕。本研究中TNM分期Ⅱ期的患者高M(jìn)VD的比例顯著高于Ⅰ期。這與郭延林等〔10〕報(bào)道的NSCLC腫瘤的發(fā)展程度與TMPRSS4表達(dá)水平、MVD水平密切相關(guān)相符。綜上，TMPRSS4及CA199在NSCLC組織中為高表達(dá)，CA199對(duì)早期診斷NSCLC的具有重要意義，TMPRSS4促進(jìn)了腫瘤的發(fā)展與腫瘤血管的形成。