IL-6通過(guò)誘導(dǎo)lncTCF7表達(dá)促進(jìn)甲狀腺乳頭狀癌TPC-1細(xì)胞上皮-間充質(zhì)轉(zhuǎn)化、遷移和侵襲*

邵揚(yáng)謙， 周 斌， 孫加強(qiáng)， 張宇軒， 秦建武△

(鄭州大學(xué)附屬腫瘤醫(yī)院 1甲狀腺頭頸外科， 2分子病理科室， 河南 鄭州 450008; 3鄭州大學(xué)第一附屬醫(yī)院中西醫(yī)結(jié)合科， 河南 鄭州 450052)

白細(xì)胞介素6(interleukin-6，IL-6)是一種與腫瘤微環(huán)境相關(guān)的細(xì)胞因子，可由巨噬細(xì)胞、T淋巴細(xì)胞和血管內(nèi)皮細(xì)胞等多種細(xì)胞產(chǎn)生，其在乳腺癌、結(jié)腸癌和非小細(xì)胞肺癌多種腫瘤組織和細(xì)胞中異常表達(dá)，參與腫瘤細(xì)胞的增殖、遷移、侵襲和上皮-間充質(zhì)轉(zhuǎn)化(epithelial-mesenchymal transition，EMT)等過(guò)程，與腫瘤的發(fā)展關(guān)系密切[1-3]。有研究發(fā)現(xiàn)，甲狀腺癌患者外周血中IL-6水平明顯升高，與甲狀腺癌的侵襲和轉(zhuǎn)移關(guān)系密切[4]。甲狀腺癌是常見(jiàn)的內(nèi)分泌系統(tǒng)和頭頸部惡性腫瘤，具有增長(zhǎng)迅速、發(fā)病率高和復(fù)發(fā)率高等特點(diǎn)，隨著其發(fā)病人數(shù)和死亡人數(shù)的不斷增加，使得人們對(duì)甲狀腺癌機(jī)制的認(rèn)識(shí)和診斷治療尤為迫切。甲狀腺乳頭狀癌是甲狀腺癌的重要病理類(lèi)型，約占其90%，頸部淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移是其重要的臨床特征，尋找有效抑制腫瘤細(xì)胞的浸潤(rùn)和轉(zhuǎn)移的靶標(biāo)一直是甲狀腺乳頭狀癌研究的重點(diǎn)[5]。EMT是一種賦予上皮細(xì)胞轉(zhuǎn)移和入侵能力的生物學(xué)過(guò)程，在腫瘤細(xì)胞的浸潤(rùn)和轉(zhuǎn)移過(guò)程中發(fā)揮著重要作用。長(zhǎng)鏈非編碼RNA lncTCF7在大腸癌和非小細(xì)胞肺癌等腫瘤的侵襲和轉(zhuǎn)移中發(fā)揮著促進(jìn)作用[6-7]。已有研究證實(shí)，IL-6可通過(guò)激活STAT3上調(diào)lncTCF7表達(dá)促進(jìn)肝細(xì)胞癌EMT[8]；IL-6也可促進(jìn)未分化型甲狀腺癌腫瘤干細(xì)胞增殖[9]，但其對(duì)甲狀腺乳頭狀癌細(xì)胞EMT、遷移和侵襲能力的影響未見(jiàn)報(bào)道。因此，本研究以人甲狀腺乳頭狀癌TPC-1細(xì)胞為研究對(duì)象，探討IL-6通過(guò)誘導(dǎo)lncTCF7表達(dá)對(duì)甲狀腺乳頭狀癌TPC-1細(xì)胞的EMT、遷移和侵襲能力的影響，以期為甲狀腺乳頭狀癌的治療提供新的線索。

材 料 和 方 法

1 細(xì)胞、試劑與儀器

人甲狀腺乳頭狀癌TPC-1細(xì)胞購(gòu)于ATCC。DMEM培養(yǎng)基購(gòu)于Gibco；胎牛血清購(gòu)于杭州四季青公司；胰蛋白酶購(gòu)于碧云天生物技術(shù)研究所；si-lncTCF7-1序列(5’-AGCCAACATTGTTGGTTAT-3’)、si-lncTCF7-2序列(5’-CACCTAGGTGCTCACTGAA-3’)及其陰性對(duì)照序列(5’-UUCUCCGAACG-UGUCACGUTT-3’)、lncTCF7過(guò)表達(dá)質(zhì)粒及其空載體質(zhì)粒均購(gòu)于GenePharma；TRIzol試劑和Lipofectamine 2000 購(gòu)自Invitrogen；抗E-cadherin、vimentin、Snail、Slug和GAPDH抗體購(gòu)于CST；羊抗兔/鼠IgG-HRP II 抗和BCA蛋白檢測(cè)試劑盒購(gòu)于南京凱基生物公司；PCR試劑盒購(gòu)自Abm；逆轉(zhuǎn)錄試劑盒購(gòu)自TaKaRa；Transwell小室購(gòu)于Corning；PVDF膜購(gòu)于PALL。CO2細(xì)胞培養(yǎng)箱購(gòu)于Thermo；PCR 擴(kuò)增儀購(gòu)于ABI；電泳儀購(gòu)于北京六一儀器廠；凝膠成像分析儀購(gòu)于UVP；倒置相差顯微鏡購(gòu)于廈門(mén)麥克奧迪公司。

2 方法

2.1細(xì)胞培養(yǎng)及處理 采用含10%胎牛血清的DMEM培養(yǎng)基于37 ℃、5% CO2培養(yǎng)箱中培養(yǎng)TPC-1細(xì)胞,每2 d換液1次，待細(xì)胞貼壁達(dá)瓶底80%左右時(shí)，以0.25%胰蛋白酶消化傳代。收集生長(zhǎng)狀態(tài)良好的第3～5代對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期TPC-1細(xì)胞進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。 取對(duì)數(shù)期生長(zhǎng)期的TPC-1細(xì)胞，以每孔3×106個(gè)細(xì)胞接種于96孔板上，于培養(yǎng)箱內(nèi)培養(yǎng)過(guò)夜后，將其隨機(jī)分為5組，分別加入終濃度為0、5、10、20和50 μg/L的IL-6反應(yīng)24 h后，收集各組細(xì)胞，采用RT-qPCR檢測(cè)TPC-1細(xì)胞中l(wèi)ncTCF7的表達(dá)情況;另接種一板TPC-1細(xì)胞，培養(yǎng)過(guò)夜后將其隨機(jī)分為4組，以同一濃度50 μg/L 的IL-6分別處理0、6、12和24 h后，收集各組細(xì)胞采用RT-qPCR檢測(cè)。

2.2RT-qPCR檢測(cè) 以TRIzol法提取TPC-1細(xì)胞總RNA后，參照逆轉(zhuǎn)錄說(shuō)明書(shū)步驟合成cDNA。以cDNA為模板，再參照RT-qPCR試劑盒說(shuō)明書(shū)步驟進(jìn)行PCR擴(kuò)增。其中，上海生工生物合成的lncTCF7的上游引物序列為5’-AGGAGTCCTTGGACCTGAGC-3’，下游引物序列為5’-AGTGGCTGGCATATAACCAACA-3’；內(nèi)參照GAPDH的上游引物序列為5’-GCACCGTCAAGGCTGAGAAC-3’，下游引物序列為5’-GCCTTCTCCATGGTGGTGAA-3’。按照如下PCR擴(kuò)增條件進(jìn)行擴(kuò)增：95 ℃預(yù)變性120 s；95 ℃ 變性15 s、55 ℃ 退火30 s、72 ℃ 延伸30 s，40個(gè)循環(huán)；72 ℃總延伸300 s。采用2-ΔΔCt法檢測(cè)TPC-1細(xì)胞中l(wèi)ncTCF7的表達(dá)水平。

2.3Western blot檢測(cè)蛋白水平 收集方法2.1中0 μg/L和50 μg/L IL-6作用24 h后的2組TPC-1細(xì)胞，加入RIPA裂解液提取總蛋白后，參照BCA蛋白檢測(cè)試劑盒對(duì)總蛋白進(jìn)行濃度和純度的檢測(cè)。取定量合格的總蛋白，加入等量的上樣緩沖液充分混勻后，于沸水浴中變性5 min。取適量的變性蛋白上樣行SDS-PAGE，待分離結(jié)束后，采用轉(zhuǎn)膜儀將蛋白樣品轉(zhuǎn)至聚偏二氟乙烯膜上，接著放入含5%脫脂奶粉的封閉液封閉1 h。用封閉液稀釋1 000倍的抗E-cadherin、vimentin和GAPDH抗體常溫孵育1 h后，以封閉液按照每次10 min洗膜3次；再用封閉液稀釋2 000倍的HRP-羊抗鼠/兔 II 抗常溫孵育1 h。以封閉液洗膜后，滴加化學(xué)發(fā)光劑，大約30 s后，置于成像儀的暗室內(nèi)曝光，拍照分析。后期采用Wes-tern blot檢測(cè)敲減lncTCF7表達(dá)對(duì)IL-6誘導(dǎo)的EMT相關(guān)因子Snail和Slug的蛋白表達(dá)情況，其中抗Snail和Slug抗體的稀釋倍數(shù)為800。

2.4細(xì)胞轉(zhuǎn)染 將對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期的TPC-1細(xì)胞以每孔105個(gè)細(xì)胞接種至6孔細(xì)胞板上，于培養(yǎng)箱內(nèi)培養(yǎng)。待細(xì)胞融合度達(dá)70%以上時(shí)，進(jìn)行瞬時(shí)轉(zhuǎn)染。參照轉(zhuǎn)染試劑Lipofectamine 2000的說(shuō)明書(shū)步驟將lncTCF7過(guò)表達(dá)質(zhì)粒及其空載體質(zhì)粒轉(zhuǎn)染至TPC-1細(xì)胞中，并標(biāo)記為lncTCF7組和vector組。轉(zhuǎn)染6 h后，更換新鮮培養(yǎng)液繼續(xù)培養(yǎng),48 h后收集各組細(xì)胞，采用Western blot檢測(cè)TPC-1細(xì)胞中E-cadherin和vimentin蛋白表達(dá)的影響。后期實(shí)驗(yàn)采用Lipofectamine 2000將si-lncTCF7-1、si-lncTCF7-2及其陰性對(duì)照序列轉(zhuǎn)染至TPC-1細(xì)胞中，分別標(biāo)記為si-lncTCF7-1組、si-lncTCF7-2和si-Con組,轉(zhuǎn)染48 h后，采用RT-qPCR檢測(cè)其轉(zhuǎn)染效果。另在轉(zhuǎn)染48 h后，給予50 μg/L IL-6處理24 h，并設(shè)一組不加IL-6的si-Con組細(xì)胞作為對(duì)照，采用Western blot檢測(cè)各組細(xì)胞中E-cadherin和vimentin蛋白的表達(dá)，Transwell小室實(shí)驗(yàn)檢測(cè)各組細(xì)胞的遷移和侵襲能力。

2.5Transwell小室實(shí)驗(yàn) 細(xì)胞遷移實(shí)驗(yàn)：將lncTCF7組和vector組細(xì)胞常規(guī)消化后，加入無(wú)血清的DMEM培養(yǎng)基制備1×108/L的細(xì)胞懸液。于24孔板Transwell小室上室中加入200 μL細(xì)胞懸液，下室中加入含10%胎牛血清的DMEM培養(yǎng)基。每組實(shí)驗(yàn)重復(fù)3次。置于培養(yǎng)箱內(nèi)常規(guī)培養(yǎng)48 h后，取出小室，分別加入10%甲醇和0.1%結(jié)晶紫溶液固定、染色,晾干后，于倒置顯微鏡下觀察、拍照。各組細(xì)胞遷移能力以隨機(jī)選取的6個(gè)視野的細(xì)胞數(shù)的平均值表示。細(xì)胞侵襲實(shí)驗(yàn)：實(shí)驗(yàn)前，以濃度為1 g/L 的Matrigel對(duì)Transwell小室上室聚碳酸酯微孔膜進(jìn)行包被，于培養(yǎng)箱內(nèi)聚合反應(yīng)30 min后，在小室上室中加入細(xì)胞懸液，下室中加入含10%胎牛血清的DMEM培養(yǎng)基，培養(yǎng)48 h，取出小室，以甲醇和結(jié)晶紫對(duì)細(xì)胞進(jìn)行固定和染色，倒置顯微鏡下拍照分析。詳細(xì)步驟參照遷移實(shí)驗(yàn)。

2.6相差顯微鏡觀察細(xì)胞形態(tài) 采用相差顯微鏡觀察待測(cè)的TPC-1細(xì)胞形態(tài)并拍照，觀察敲減lncTCF7表達(dá)對(duì)IL-6誘導(dǎo)的TPC-1細(xì)胞形態(tài)的影響。

3 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析

采用SPSS 22.0進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析。實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差(mean±SD)的形式表示。兩組間比較采用獨(dú)立樣本t檢驗(yàn)，多組間比較使用單因素方差分析，組間多重比較采用SNK-q檢驗(yàn)。以P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

結(jié) 果

1 IL-6誘導(dǎo)TPC-1細(xì)胞中l(wèi)ncTCF7的表達(dá)

RT-qPCR檢測(cè)結(jié)果顯示，以不同濃度(0、5、10、20和50 μg/L)的IL-6作用24 h后，與0 μg/L對(duì)照組相比，TPC-1細(xì)胞中l(wèi)ncTCF7表達(dá)隨著IL-6濃度的增加逐漸升高(P<0.05)；以50 μg/L的IL-6作用0、6、12和24 h后，TPC-1細(xì)胞中l(wèi)ncTCF7表達(dá)隨著IL-6作用時(shí)間的延長(zhǎng)逐漸升高(P<0.05)，見(jiàn)圖1?？梢?jiàn)，IL-6可呈劑量和時(shí)間依賴性地誘導(dǎo)TPC-1細(xì)胞中l(wèi)ncTCF7表達(dá)。

Figure 1.The effects of IL-6 on the expression of lncTCF7 in the TPC-1 cells. A: the TPC-1 cells were treated with different concentrations of IL-6 for 24 h; B: the TPC-1 cells were treated with 50 μg/L IL-6 for different time. Mean±SD.n=3.*P<0.05vs0 μg/L group;#P<0.05vs0 h group.

圖1IL-6對(duì)TPC-1細(xì)胞中l(wèi)ncTCF7表達(dá)的影響

2 IL-6誘導(dǎo)TPC-1細(xì)胞的EMT

Western blot檢測(cè)結(jié)果顯示，與未加IL-6的TPC-1細(xì)胞相比，以50 μg/L IL-6作用24 h后，TPC-1細(xì)胞中上皮標(biāo)志物E-cadherin表達(dá)明顯降低，間充質(zhì)標(biāo)志物vimentin表達(dá)明顯升高(P<0.05)，見(jiàn)圖2。 這說(shuō)明IL-6可誘導(dǎo)TPC-1細(xì)胞的EMT。

Figure 2.The effect of IL-6 on epithelial-mesenchymal transition of TPC-1 cells. Mean±SD.n=3.*P<0.05vsIL-6 (-) group.

圖2IL-6對(duì)TPC-1細(xì)胞上皮-間充質(zhì)轉(zhuǎn)化的影響

3 過(guò)表達(dá)lncRNA-TCF7可促進(jìn)TPC-1細(xì)胞的EMT

Western blot檢測(cè)結(jié)果顯示，與vector組相比，在轉(zhuǎn)染lncTCF7過(guò)表達(dá)質(zhì)粒的lncTCF7組細(xì)胞中E-cadherin表達(dá)明顯降低，而vimentin蛋白表達(dá)明顯升高(P<0.05),見(jiàn)圖3。這說(shuō)明過(guò)表達(dá)lncTCF7可促進(jìn)TPC-1細(xì)胞的EMT。

Figure 3.The effect of lncTCF7 over-expression on epithelial-mesenchymal transition of TPC-1 cells. Mean±SD.n=3.*P<0.05vsvector group.

圖3過(guò)表達(dá)lncTCF7對(duì)TPC-1細(xì)胞上皮-間充質(zhì)轉(zhuǎn)化的影響

4 過(guò)表達(dá)lncTCF7可促進(jìn)TPC-1細(xì)胞的遷移和侵襲能力

Transwell實(shí)驗(yàn)檢測(cè)結(jié)果顯示，與vector組相比，轉(zhuǎn)染lncTCF7過(guò)表達(dá)質(zhì)粒的lncTCF7組細(xì)胞的遷移和侵襲細(xì)胞數(shù)均明顯升高(P<0.05)，見(jiàn)圖4。這說(shuō)明過(guò)表達(dá)lncTCF7可促進(jìn)TPC-1細(xì)胞的遷移和侵襲能力。

5 敲減lncTCF7表達(dá)抑制了IL-6誘導(dǎo)的TPC-1細(xì)胞EMT、遷移和侵襲

RT-qPCR檢測(cè)結(jié)果顯示，與si-Con組相比，si-lncTCF7-1組和si-lncTCF7-2組細(xì)胞中l(wèi)ncTCF7的表達(dá)水平均明顯降低(P<0.05),見(jiàn)圖5A。Western blot檢測(cè)和Transwell實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，與si-Con+IL-6(-)組相比，給予50 μg/L IL-6作用的si-Con+IL-6(+)組細(xì)胞中E-cadherin蛋白表達(dá)下調(diào)，而vimentin蛋白表達(dá)上調(diào)，同時(shí)遷移和侵襲細(xì)胞數(shù)均增多(P<0.05)；與si-Con+IL-6(+)組相比，在成功敲減lncTCF7表達(dá)的si-lncTCF7-1組和si-lncTCF7-2組細(xì)胞中E-cadherin蛋白表達(dá)上調(diào)，而vimentin蛋白表達(dá)下調(diào)，同時(shí)，遷移和侵襲細(xì)胞數(shù)均減少(P<0.05)，見(jiàn)圖5B、C?？梢?jiàn)敲減lncTCF7表達(dá)能夠明顯抑制IL-6誘導(dǎo)的TPC-1細(xì)胞EMT、遷移和侵襲。

6 敲減lncTCF7表達(dá)抑制了IL-6對(duì)TPC-1細(xì)胞形態(tài)和EMT相關(guān)分子蛋白水平的影響

Figure 4.The effects of lncTCF7 over-expression on the migration and invasion abilities of TPC-1 cells. Mean±SD.n=3.*P<0.05vsvector group.

圖4過(guò)表達(dá)lncRNA-TCF7對(duì)TPC-1細(xì)胞遷移和侵襲能力的影響

Figure 5.The effects of lncTCF7 knockdown on IL-6-induced epithelial-mesenchymal transition, migration and invasion of TPC-1 cells. A: lncTCF7 knockdown in the TPC-1 cells; B: the result of Western blot for determining the protein expression of E-cadherin and vimentin; C: the number of migratory and invasive cells in each group. Mean±SD.n=3.*P<0.05vssi-Con group;△P<0.05vssi-Con+IL-6 (-) group;#P<0.05vssi-Con+IL-6 (+) group.

圖5敲減lncTCF7的表達(dá)對(duì)IL-6誘導(dǎo)的TPC-1細(xì)胞上皮-間充質(zhì)轉(zhuǎn)化、遷移和侵襲能力的影響

光學(xué)顯微鏡下發(fā)現(xiàn)，與si-Con+IL-6(-)組相比，給予50 μg/L IL-6作用的si-Con+IL-6(+)組的TPC-1細(xì)胞由鵝卵石狀變?yōu)榧忓N體狀，且細(xì)胞間隙加大,連接松散;而敲減lncTCF7表達(dá)后，IL-6引起的上述變化明顯受到抑制，見(jiàn)圖6A。同時(shí)，Western blot進(jìn)一步檢測(cè)EMT轉(zhuǎn)錄因子Slug和Snail蛋白的表達(dá)，與si-Con+IL-6(-)組相比，si-Con+IL-6(+)組TPC-1細(xì)胞中Slug和Snail蛋白的表達(dá)水平均明顯升高，而si-lncTCF7+IL-6(+)組中Slug和Snail蛋白的表達(dá)水平較si-Con+IL-6(+)組均明顯降低(P<0.05)，見(jiàn)圖6B。可見(jiàn)，敲減lncTCF7表達(dá)能夠明顯抑制IL-6對(duì)TPC-1細(xì)胞形態(tài)和EMT相關(guān)分子蛋白水平的影響。

討 論

IL-6是一種常見(jiàn)的多種功能細(xì)胞因子，在腫瘤細(xì)胞微環(huán)境中發(fā)揮著重要作用，可通過(guò)多種途徑直接或間接作用于腫瘤細(xì)胞，參與眾多腫瘤的發(fā)生和發(fā)展過(guò)程，而抑制其表達(dá)有望成為治療癌癥的重要策略[10-11]。IL-6在子宮內(nèi)膜癌組織中的表達(dá)異常升高，且與子宮內(nèi)膜癌肌層浸潤(rùn)和淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移有關(guān)，可作為子宮內(nèi)膜癌發(fā)展監(jiān)測(cè)指標(biāo)和治療靶點(diǎn)[12]；星形膠質(zhì)細(xì)胞分泌的IL-6可通過(guò)上調(diào)MMP-14表達(dá)促進(jìn)膠質(zhì)瘤的遷移和侵襲[13]；IL-6通過(guò)STAT3信號(hào)通路促進(jìn)胃癌和卵巢癌的遷移和侵襲，沉默其表達(dá)則能夠降低腫瘤細(xì)胞的轉(zhuǎn)移能力[14-15]；此外，IL-6可通過(guò)上調(diào)lncTCF7表達(dá)促進(jìn)肝細(xì)胞癌的上皮間質(zhì)轉(zhuǎn)化[8]。lncTCF7是一種新發(fā)現(xiàn)的長(zhǎng)鏈非編碼RNA，其異常表達(dá)與腫瘤的發(fā)生發(fā)展和預(yù)后不良等關(guān)系密切[16],例如，lncTCF7在腦膠質(zhì)瘤和結(jié)直腸癌中高表達(dá)，其表達(dá)水平越高，患者的生存預(yù)后越差，其可通過(guò)激活Wnt/β-catenin信號(hào)通路促進(jìn)腫瘤的細(xì)胞增殖、遷移和侵襲；另外，lncTCF7可被IL-6/STAT3反式激活通過(guò)調(diào)控上皮-間充質(zhì)轉(zhuǎn)化促進(jìn)肝癌細(xì)胞的侵襲[8]；而敲減其表達(dá)則能夠明顯抑制腫瘤細(xì)胞的遷移、增殖和致瘤性[6,17]。已有研究[8, 18-19]指出，IL-6在甲狀腺乳頭狀癌中異常高表達(dá)，與癌灶的包膜侵犯有關(guān)；然而IL-6有無(wú)通過(guò)誘導(dǎo)lncTCF7表達(dá)參與甲狀腺乳頭狀癌細(xì)胞的EMT、遷移和侵襲過(guò)程,目前并不清楚。

Figure 6.Knockdown of lncTCF7 expression inhibited the morphological changes and the protein levels of epithelial-mesenchymal transition-related molecules of TPC-1 cells induced by IL-6. A: morphological changes of the TPC-1 cells with/without IL-6 treatment after knockdown of lncTCF7 expression (×100); B: the protein expression of Snail and Slug in the TPC-1 cells detected by Western blot. Mean±SD.n=3.*P<0.05vssi-Con+IL-6 (-) group;#P<0.05vssi-Con+IL-6 (+) group.

圖6敲減lncTCF7的表達(dá)抑制了IL-6誘導(dǎo)的TPC-1細(xì)胞形態(tài)改變和上皮-間充質(zhì)轉(zhuǎn)化相關(guān)分子蛋白水平的變化

我們以不同濃度的IL-6作用24 h或以50 μg/L的IL-6作用不同時(shí)間后，RT-qPCR檢測(cè)發(fā)現(xiàn)，IL-6可呈劑量和時(shí)間依賴性地誘導(dǎo)甲狀腺乳頭狀癌TPC-1細(xì)胞中l(wèi)ncTCF7的表達(dá)；以50 μg/L IL-6作用24 h后，Western blot檢測(cè)TPC-1細(xì)胞中E-cadherin表達(dá)明顯降低，vimentin表達(dá)明顯升高。E-cadherin是一種鈣依賴性跨膜糖蛋白，在形成細(xì)胞間黏附性連接過(guò)程中發(fā)揮著重要作用，其下調(diào)可造成細(xì)胞間黏附性連接減弱，促進(jìn)細(xì)胞的遷移和侵襲，常被作為EMT的上皮標(biāo)志物；vimentin是一種中間絲蛋白，存在于間充質(zhì)細(xì)胞中，在間充質(zhì)來(lái)源的細(xì)胞中顯示陽(yáng)性，上皮來(lái)源細(xì)胞中顯示陰性，可通過(guò)調(diào)節(jié)細(xì)胞黏附分子和細(xì)胞骨架蛋白等參與細(xì)胞信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)、黏附、遷移和侵襲等過(guò)程，常被作為EMT的間充質(zhì)標(biāo)志物；兩者均在甲狀腺乳頭狀癌的發(fā)展過(guò)程中發(fā)揮著重要作用[20-21]。上述結(jié)果提示，IL-6可能夠通過(guò)誘導(dǎo)lncTCF7表達(dá)促進(jìn)甲狀腺乳頭狀癌的發(fā)展。轉(zhuǎn)染lncTCF7過(guò)表達(dá)質(zhì)粒后，TPC-1細(xì)胞中E-cadherin表達(dá)降低，vimentin表達(dá)升高，同時(shí)TPC-1細(xì)胞的遷移和侵襲細(xì)胞數(shù)減少，提示，lncTCF7在甲狀腺乳頭狀癌的EMT、遷移和侵襲過(guò)程中發(fā)揮著重要的促進(jìn)作用。為了驗(yàn)證lncTCF7在IL-6促進(jìn)甲狀腺乳頭狀癌的發(fā)展中的作用，我們通過(guò)轉(zhuǎn)染si-lncTCF7-1序列成功敲減其表達(dá)后，檢測(cè)發(fā)現(xiàn)IL-6作用后TPC-1細(xì)胞中E-cadherin表達(dá)下降、vimentin表達(dá)上調(diào)、遷移和侵襲細(xì)胞數(shù)增多且細(xì)胞間隙增大這一系列變化均受到抑制。Slug和Snail是轉(zhuǎn)錄因子Snail超家族成員，可與E-cadherin啟動(dòng)子區(qū)域的E-box結(jié)合進(jìn)而抑制E-cadherin的轉(zhuǎn)錄，進(jìn)而影響細(xì)胞的EMT。結(jié)果提示，IL-6通過(guò)誘導(dǎo)lncTCF7表達(dá)促進(jìn)甲狀腺乳頭狀癌TPC-1細(xì)胞的EMT、遷移和侵襲能力。

綜上所述，IL-6和lncTCF7均在甲狀腺乳頭狀癌TPC-1細(xì)胞的EMT、遷移和侵襲過(guò)程中發(fā)揮著重要的促進(jìn)作用，但其具體的調(diào)控機(jī)制還有待進(jìn)一步深入研究。這為靶向IL-6或lncTCF7抗甲狀腺乳頭狀癌轉(zhuǎn)移提供了參考依據(jù)。