陜西省延安地區(qū)育齡女性MTHFR基因多態(tài)性和國(guó)內(nèi)多地區(qū)相關(guān)報(bào)道比較分析*

曹 云，周 曉，張曉艷，李 帥，何進(jìn)偉，龐寶華

(1.延安市人民醫(yī)院檢驗(yàn)科，陜西延安 716000；2.延安大學(xué)醫(yī)學(xué)院，陜西延安 716000)

亞甲基四氫葉酸還原酶(methylenetetrahydrofolate reductase，MTHFR)由MTHFR基因編碼，是葉酸代謝通路的關(guān)鍵酶之一。目前已發(fā)現(xiàn)MTHFR基因多態(tài)性位點(diǎn)有近20種，其中C677T和A1298C是最具有臨床意義的兩個(gè)突變位點(diǎn)，會(huì)直接影響到體內(nèi)血清和紅細(xì)胞葉酸水平、同型半胱氨酸的水平，因而對(duì)新生兒神經(jīng)管畸形、21-三體綜合征，孕產(chǎn)婦復(fù)發(fā)性流產(chǎn)、妊娠期高血壓等疾病產(chǎn)生重大的影響[1～3]。本研究擬了解延安地區(qū)育齡女性MTHFR基因遺傳突變情況，進(jìn)而指導(dǎo)臨床為當(dāng)?shù)赜g女性選擇適宜的葉酸增補(bǔ)方案提供一定的理論依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 研究對(duì)象 見表1。選取2016年4月1日～2017年12月31日來延安第二醫(yī)療集團(tuán)(網(wǎng)絡(luò)單位有延安市人民醫(yī)院、延安市人民醫(yī)院河莊坪分院、吳起縣人民醫(yī)院、安塞縣人民醫(yī)院、子長(zhǎng)縣人民醫(yī)院、富縣人民醫(yī)院、延長(zhǎng)石油職工醫(yī)院等)進(jìn)行孕前與孕期葉酸代謝能力檢測(cè)的育齡女性，共1 508例，全部來自于陜西省延安市各個(gè)區(qū)縣，年齡15～49歲，平均年齡27.61±4.19歲。

表1 研究人群來源地分布情況

1.2 試劑和儀器 試劑：葉酸代謝能力測(cè)定熒光試劑盒(江西諾德醫(yī)療器械有限公司)。儀器：ViiA 7 Dx全自動(dòng)PCR熒光定量分析儀(美國(guó)ABI公司)。

1.3 方法 采集研究對(duì)象EDTA抗凝全血，提取DNA，完全按照試劑盒及儀器標(biāo)準(zhǔn)操作流程進(jìn)行操作。采用熒光定量PCR技術(shù)檢測(cè)MTHFR C677T，MTHFR A1298C的基因多態(tài)性，反應(yīng)體系20 μl，反應(yīng)條件：95℃ 10 min；95℃ 15 s，60℃ 40 s，40個(gè)循環(huán)；室溫冷卻1 min。反應(yīng)完成后，在熒光定量PCR儀上讀取樣品孔中的終點(diǎn)熒光，應(yīng)用分析軟件判讀樣本的基因分型并確定其結(jié)果。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析 采用SPSS 20.0軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析。計(jì)數(shù)資料采用率(%)表示，對(duì)基因型頻率及等位基因頻率進(jìn)行R×C多連列表卡方(χ2)檢驗(yàn)，檢驗(yàn)水準(zhǔn)α=0.05，以P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 延安地區(qū)育齡女性MTHFR基因C677T和A1298C位點(diǎn)Hardy-Weinberg遺傳平衡分析 見表2。MTHFR C677T位點(diǎn)基因型有CC(野生型)，CT(雜合型)和TT(突變型)三種。MTHFR A1298C位點(diǎn)基因型也是三種：AA(野生型)，AC(雜合型)和CC(突變型)。研究群體MTHFR C677T 和A1298C兩個(gè)位點(diǎn)的基因多態(tài)性分布均符合Hardy-Weinberg遺傳平衡，具有該區(qū)域群體代表性。

表2 研究群體MTHFR C677T和A1298C位點(diǎn)Hardy-Weinberg遺傳平衡分析

2.2 延安地區(qū)育齡女性MTHFR基因C677T和A1298C位點(diǎn)表現(xiàn)型分布 見表3。延安地區(qū)1 508例育齡女性MTHFR基因代謝能力正常的還不到研究群體的1/4。

表3 延安地區(qū)育齡女性MTHFR基因C677T和A1298C位點(diǎn)表現(xiàn)型分布(n=1 058)

基因型(MTHFR C677T/A1298C)表現(xiàn)型n構(gòu)成比(%)CC/AA,CC/ACCC/CC,CT/AA,CT/ACCT/CC,TT/AA,TT/AC,TT/CC正常代謝型較弱代謝型弱代謝型33976540422.550.726.8

2.3 延安地區(qū)與國(guó)內(nèi)其他地區(qū)育齡女性MTHFR基因C677T和A1298C位點(diǎn)基因型和等位基因分布特征

2.3.1 延安地區(qū)與國(guó)內(nèi)其他地區(qū)育齡女性MTHFR基因C677T和A1298C位點(diǎn)基因型分布特征，見表4。延安地區(qū)女性MTHFR C677T位點(diǎn)以雜合突變型CT為主，而其A1298C位點(diǎn)以野生型AA為主。MTHFR C677T和A1298C位點(diǎn)基因型分布情況與湘潭、武漢、南寧等地區(qū)基因分布情況的差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)；與烏魯木齊、遼源等地區(qū)基因分布情況的差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。整體來看MTHFR C677T TT純合突變型呈現(xiàn)北高南低的趨勢(shì)。見圖1。

表4 不同地區(qū)育齡女性MTHFR基因C677T和A1298C位點(diǎn)基因型分布特征[n(%)]

注：aP<0.05。

圖1 各地區(qū)人群中MTHFR基因C677T位點(diǎn)多態(tài)性(CC，CT，TT)分布

2.3.2 延安地區(qū)與國(guó)內(nèi)其他地區(qū)育齡女性MTHFR基因C677T和A1298C位點(diǎn)等位基因分布特征，見表5。延安地區(qū)女性MTHFR C677T位點(diǎn)等位基因C，T和A1298C位點(diǎn)等位基因A，C分布情況與廊坊、武漢、南寧等地區(qū)的等位基因分布情況的差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)；與烏魯木齊、遼源等地區(qū)的等位基因分布情況的差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。并且各個(gè)地區(qū)的等位基因T有隨著緯度下降而下降的趨勢(shì)。見圖2。

表5 不同地區(qū)育齡女性MTHFR基因C677T和A1298C位點(diǎn)等位基因分布特征[n(%)]

注：bP<0.05。

圖2 MTHFR基因C667T位點(diǎn)等位基因(C，T)隨緯度變化趨勢(shì)

3 討論

MTHFR基因突變導(dǎo)致的體內(nèi)低葉酸水平會(huì)增加多種疾病的患病風(fēng)險(xiǎn)，包括21-三體綜合癥、胎兒抗驚厥綜合癥、唇裂(伴或不伴腭裂)等，對(duì)于突變純合子和突變雜合子的影響風(fēng)險(xiǎn)不同。隨著醫(yī)療科技的發(fā)展與孕期葉酸補(bǔ)充等措施的實(shí)施，近年來新生兒出生缺陷發(fā)病率雖然有所降低，但每年新生兒出生缺陷仍高達(dá)90萬例[13]。本研究調(diào)查顯示，陜西省延安地區(qū)超過3/4的育齡女性存在葉酸能力代謝不足的風(fēng)險(xiǎn)，臨床常規(guī)的葉酸補(bǔ)充劑量(400 μg/d)可能滿足不了這部分人群胎兒發(fā)育的實(shí)際需求。因此，在為育齡女性制定孕前及孕期葉酸增補(bǔ)方案時(shí)需考慮區(qū)域遺傳特征，不能盲目進(jìn)補(bǔ)。

該研究延安地區(qū)育齡女性以基因型(MTHFR C677T/A1298C)CT/AA型為主，并與國(guó)內(nèi)多地區(qū)相比存在差異性。有文獻(xiàn)報(bào)道[14]，葉酸代謝基因MTHFR C677T位點(diǎn)的突變是死胎發(fā)生的危險(xiǎn)因素，與MTHFR A1298C位點(diǎn)突變無關(guān)。另有研究指出[15]，葉酸代謝基因MTHFR C677T位點(diǎn)的突變可能是神經(jīng)管缺損、先天性心臟病、21-三體綜合征發(fā)生的危險(xiǎn)因素之一，而MTHFR A1298C在其中的作用相對(duì)較弱。因此，深度研究了MTHFR C677T位點(diǎn)突變的規(guī)律。就總體而言，北方地區(qū)(延安、烏魯木齊、遼源、廊坊、煙臺(tái))人群中MTHFR C677T純合突變基因型TT所占比例比南方地區(qū)(湘潭、武漢、昆明、南寧、瓊海)高，呈現(xiàn)北高南低的趨勢(shì)；有趣的是其等位基因T的基因頻率也呈現(xiàn)隨緯度的遞減而降低的走向，這與我國(guó)神經(jīng)管畸形發(fā)病率北高于南的趨勢(shì)相一致[16]，這種基因多態(tài)性分布可能受地形、地貌、經(jīng)緯度、氣候、生活環(huán)境、飲食等影響，是經(jīng)過漫長(zhǎng)的自然選擇形成的。

目前陜西省延安地區(qū)還尚未有大樣本人群的關(guān)于MTHFR C677T，A1298C位點(diǎn)的基因多態(tài)性分析報(bào)道，這一研究填補(bǔ)了目前這一領(lǐng)域的相關(guān)數(shù)據(jù)的空白?；谠摰貐^(qū)研究結(jié)果，一方面對(duì)一些有過出生缺陷史的育齡女性建議進(jìn)一步進(jìn)行MTHFR基因多態(tài)性精準(zhǔn)檢測(cè)是非常有必要的，進(jìn)而采取有效的靶向干預(yù)措施；另一方面可為一些基層無法開展葉酸代謝能力檢測(cè)的醫(yī)院提供經(jīng)驗(yàn)用藥指導(dǎo)。