福建省龍巖市部分地區(qū)豬偽狂犬病野毒感染血清學調查

李圣元 福建省龍巖市農(nóng)業(yè)學校 福建龍巖 364000

豬偽狂犬?。≒seudorabies，PR）又稱Aujeszky氏效控制；2011年至今，PR再次進入流行期，多個省份開始相繼出現(xiàn)疫情明顯增加的情況[4-6]。

偽狂犬病病毒又稱豬皰疹病毒Ⅰ型、奧葉茲基氏病病毒，屬于皰疹病毒科、豬皰疹病毒屬[1]。臨床上可致母豬流產(chǎn)、不發(fā)情、返情、屢配不孕等癥狀；新生仔豬感染后病死率可達100%，并伴有嚴重的神經(jīng)癥狀；保育仔豬瘦弱、掉隊；育肥豬發(fā)病后常繼發(fā)細菌感染（如傳染性胸膜肺炎等）導致死亡。當前福建省龍巖地區(qū)大多數(shù)規(guī)?；i場普遍采用gE基因缺失的疫苗進行免疫接種，因此，使用ELISA診斷試劑盒檢測gE抗體可以直接反映野毒的感染情況。為探究福建省龍巖地區(qū)2017-2018年偽狂犬病野毒感染情況，本文對該市新羅區(qū)、連城縣、長汀縣以及武平縣四個地區(qū)21個規(guī)?；i場豬群分批抽樣進行相關血清學檢測。

1 材料與方法

1.1 血清樣品 采自龍巖市四個地區(qū)21個規(guī)?；?，是由偽狂犬病病毒（Pseudorabies virus，PRV）感染引起的一種危害較大的高度接觸性急性傳染病，可感染多數(shù)哺乳動物，嚴重者可致犬、貓、羊、牛等動物死亡，在我國被列為二類傳染病[1]。PR首次于1813年在美國出現(xiàn)：某頭牛因極度瘙癢而死，當時又稱“瘋癢病”[2]。1902年匈牙利的Aujeszky首次確定該病病原，1934年Sabin等證實該病病毒為皰疹病毒[3]。我國于1948年由劉永純等首次報道在貓體內發(fā)現(xiàn)并分離出PRV，1956年在珠海某農(nóng)場出現(xiàn)首次豬只發(fā)病的報道，隨后幾年PR疫情迅速在全國范圍內流行[3]。自2000后部分歐美國家相繼清除PRV。據(jù)鄧仕偉等[4]報道，2006年PR在我國已涉及

包括香港、臺灣地區(qū)的31個省、市（區(qū)），之后大多數(shù)豬場實施免疫，以神經(jīng)癥狀為主要臨床癥狀的疫情暴發(fā)性豬場逐漸減少，轉而進入散發(fā)狀態(tài)，且臨床大多以呼吸道癥狀為主，死亡率降低，疫情逐步得到有豬場豬群。

1.2 診斷試劑與儀器 豬偽狂犬病病毒gE糖蛋白阻斷ELISA抗體檢測試劑盒，由北京天之泰生物科技有限公司提供；Biotek酶標儀、Biotek洗板機等，均由美國伯騰儀器公司提供。

1.3 操作方法與步驟 （1）配置洗滌液；（2）血清稀釋；（3）去除抗原包被板，在相應孔內分別加入稀釋的待檢血清和對照血清各100μL；（4）密封抗原包被板，孵育；（5）揭去封膜板，洗板，加入結合物溶液100μL，密封孵育；（6）重復步驟（3），加入底物溶液100μL，搖晃混勻2 s；（7）室溫下避光顯色15 min；（8）加入終止液100μL，混勻，15 min內測定結果；（9）在酶標儀測定各孔OD450nm值。

1.4 判定標準 根據(jù)公式將OD450nm換算成IN%值，如果樣品孔的IN%小于40.0，則斷定為陰性；若IN%大于或者等于40.0且小于或者等于45.0，則判定為可疑；如果IN%大于45.0，則斷定為陽性。

2 結果與分析

2.1 不同階段豬群偽狂犬病野毒感染情況 對龍巖市新羅區(qū)、連城縣、長汀縣以及武平縣21個規(guī)?；i場不同階段豬群抽樣進行gE抗體水平檢測，以分析不同階段的豬群與PRV野毒感染的相關性，具體檢測結果見表1。各階段的陽性率分別為25.29%、30.98%、30.85%、31.75%，由此可見各階段的豬群均有一定程度的感染。其中豬群從保育進入育肥階段之后陽性率有一定程度升高，用SPSS19.0對其進行卡方檢驗，結果表明整體4個階段之間的陽性率差異不顯著（P=0.741＞0.05），即各階段感染程度無明顯的變化。

表1 龍巖市部分地區(qū)規(guī)?；i場不同階段豬群gE抗體檢測情況

2.2 不同地區(qū)豬群偽狂犬病野毒感染情況 對該地區(qū)21個規(guī)?；i場gE抗體檢測結果進行分類統(tǒng)計，以分析各地區(qū)偽狂犬病野毒感染情況，具體結果見表2。龍巖市新羅區(qū)、連城縣、武平縣、長汀縣豬場gE抗體的陽性率分別為41.58%、18.18%、26.29%、30.14%。對其進行卡方檢驗，以驗證各地區(qū)感染程度差異，結果所得各地區(qū)之間偽狂犬病野毒感染程度差異極顯著（P=0.0003＜0.001），由此可見四個地區(qū)中龍巖市新羅區(qū)豬群偽狂犬病感染形勢較為嚴峻。

表2 不同地區(qū)規(guī)?；i場gE抗體檢測情況

3 討 論

保育階段檢測到的gE抗體有可能是來自母體的母源抗體，由表1我們可以得知，豬群在育肥階段陽性率有一定程度的升高，進入育肥階段后轉陽開始增多，這一結果與戴愛玲等[7]綜合閩西南地區(qū)三年的偽狂犬病野毒感染血清學調查結果相同。究其原因，一方面可能是在保育階段接種疫苗的免疫效果受到母源抗體的影響，在注射疫苗后機體產(chǎn)生被動免疫，母源抗體與疫苗中的抗原中和，使得疫苗部分或者完全失效，機體免疫系統(tǒng)未產(chǎn)生足夠的記憶細胞，使疫苗達不到免疫保護的效果。其次，免疫程序不當使得在保育至育肥階段出現(xiàn)免疫空白期，即由于豬場沒有進行母源抗體檢測，致使部分小豬在母源抗體水平過低或者消失之后不能及時接種疫苗，處于易感狀態(tài)。另一方面，根據(jù)聶奎等[8]研究發(fā)現(xiàn)，育肥豬和飼養(yǎng)畜群的大小對偽狂犬病的感染情況有著重要的影響。由此根據(jù)生產(chǎn)經(jīng)驗我們可以推斷，由于進入育肥階段之后豬群管理松懈，再加上育肥豬舍生物安全的衛(wèi)生條件較差，使得未得到有效免疫保護的豬群更為易感，最終導致整體陽性率升高，感染情況加重。

整體來看，龍巖地區(qū)豬偽狂犬病控制與凈化的壓力較大。整體陽性率為30.41%，這與戴愛玲等[7]在2014年所測閩西南地區(qū)的總陽性率21.8%相比有一定程度的上升，進一步說明該地區(qū)偽狂犬病野毒感染壓力較大。偽狂犬病免疫的失敗受到諸多復雜因素的影響，除生產(chǎn)管理之外，還包括免疫程序、豬群自身健康水平等因素，且疫苗自身質量也是重要的影響因素，如其抗原含量、毒株佐劑等。

滴鼻免疫是預防仔豬感染的重要手段之一。PRV屬于皰疹病毒，主要經(jīng)由呼吸道與消化道感染機體，因此，建立黏膜免疫是切斷其感染途徑的極為重要的方式。PRV在入侵機體之后經(jīng)復制和轉移在神經(jīng)元細胞體潛伏感染，由于PRV自身的“占位效應”，疫苗的毒株選擇顯得尤為重要[9]。經(jīng)調查當前龍巖地區(qū)豬場所使用的主要以Bartha K61株、HB2000株以及上市不久的C株為主，其中PRV的主要毒力基因gE基因均缺失，可以確保疫苗的安全性且可以辨別野毒與疫苗產(chǎn)生的抗體。在"占位"的過程中，疫苗毒株的毒力起到關鍵性作用，即強毒力的毒株可以將已經(jīng)占位的弱毒力毒株替換，其中PRV中胸苷激酶（TK）基因具有決定性作用，因為其是在PRV于神經(jīng)元細胞體增殖、復制和占位過程中的關鍵性因素[10]。部分研究表明TK基因是主要毒力基因之一，存在一定的安全風險，但Schang L M等[11]通過對比試驗證明TK基因的保留對疫苗本身的安全性并無顯著影響，可以更好地特異性阻斷野毒在神經(jīng)系統(tǒng)的感染，此外，TK完整的毒株刺激機體產(chǎn)生的中和抗體水平高于TK缺失的毒株。綜上所述，筆者認為選擇保留TK基因的毒株且可滴鼻的疫苗對偽狂犬病的控制起到關鍵性作用。