鮑曼不動(dòng)桿菌的耐藥性檢測及多重耐藥菌株質(zhì)粒圖譜分析

呂婕，馬玲

昌吉州人民醫(yī)院檢驗(yàn)科，新疆 昌吉 831100

鮑曼不動(dòng)桿菌（Ab）是近年來在臨床上出現(xiàn)頻率越來越高的一種細(xì)菌，加上對(duì)患者進(jìn)行多種抗生素治療，這就導(dǎo)致鮑曼不動(dòng)桿菌開始出現(xiàn)越來越強(qiáng)的耐藥性，這一點(diǎn)引起許多臨床醫(yī)護(hù)人員和微生物研究工作者的廣泛關(guān)注。鮑曼不動(dòng)桿菌可以長期存活并廣泛分布在醫(yī)院的各類環(huán)境中，這就致使CCU以及ICU中的危重患者相對(duì)感染的機(jī)率增加，這類感染被稱為ICU獲得性感染[1]。目前發(fā)展最快，耐藥性最強(qiáng)的是耐碳青霉烯類的鮑曼不動(dòng)桿菌，主要引起呼吸道感染，也可引發(fā)敗血癥、泌尿系感染、繼發(fā)性腦膜炎等[2]。這類細(xì)菌甚至已經(jīng)變異出了“全耐藥”的鮑曼不動(dòng)桿菌(Pan drug resistantacinetobacter baumannii)，在臨床上應(yīng)引起高度警惕。

1 材料和方法

1.1 菌種采集 此次選取我院2018年7月-2019年6月入院治療后院內(nèi)感染鮑曼不動(dòng)桿菌的患者作為菌種采集人群。對(duì)患者留取的100份培養(yǎng)標(biāo)本進(jìn)行分離培養(yǎng)工作。

1.2 納入與排除標(biāo)準(zhǔn) 納入標(biāo)準(zhǔn)：（1）選取鮑曼不動(dòng)桿菌感染，有相關(guān)癥狀、體征的患者；（2）入院時(shí)未有細(xì)菌感染的人群。（3）同意參與此次研究并配合者。排除標(biāo)準(zhǔn)：（1）剔除社區(qū)獲得性感染人群，防止對(duì)實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)造成影響。（2）合并其他細(xì)菌感染者。（3）無法配合研究者。

2 研究方法

2.1 檢測材料 法國梅里埃全自動(dòng)鑒定藥敏儀VITEK2-COMPACT與VITEK MS質(zhì)譜儀。

2.2 標(biāo)本檢測 對(duì)分離培養(yǎng)到的鮑曼不動(dòng)桿菌菌株進(jìn)行VITEK2-COMPACT藥敏分析，選取法國梅里埃GN16卡片，其包含臨床常用的種抗生素頭孢曲松，慶大霉素，妥布霉素，頭孢吡肟，環(huán)丙沙星，左氧氟沙星，亞胺培南，替加環(huán)素，復(fù)方新諾明。除此之外，對(duì)阿米卡星、哌拉西林、哌拉西林/他唑巴坦、米諾環(huán)素、頭孢他啶、美羅培南、頭孢哌酮/舒巴坦這幾種藥物進(jìn)行K-B法藥敏試驗(yàn)。并且對(duì)分離培養(yǎng)到的鮑曼不動(dòng)桿菌菌株進(jìn)行VITEK MS質(zhì)譜儀鑒定。VITEK MS鑒定過程是：首先將待鑒定菌涂在靶板的點(diǎn)位中，加1ul VITEK MS-CHCA基質(zhì) 液，待干燥后放入VITEK MS儀器獲取細(xì)菌全細(xì)胞蛋白(主要是核糖體蛋白）質(zhì)譜。然后將待鑒定菌質(zhì)譜與數(shù)據(jù)庫中已知菌質(zhì)譜進(jìn)行比較、分析從而獲得鑒定結(jié)果。

3 基本原理

VITEK MS質(zhì)譜儀采用MALDI-T0F技術(shù)，用于臨床微生物的快速鑒定。質(zhì)譜儀主機(jī)由兩部分組成：基質(zhì)輔助激光解吸電離離子源（MALDI)和飛行時(shí)間質(zhì)量檢測器（TOF）。MALDI的原理是用激光照射標(biāo)本與基質(zhì)形成的共結(jié)晶薄膜，基質(zhì)從激光中吸收能量傳遞給標(biāo)本中的生物分子，并將質(zhì)子轉(zhuǎn)移到生物分子而使生物分子發(fā)生電離。TOF的原理是離子在電場作用下加速飛過飛行管道，根據(jù)到達(dá)檢測器的飛行時(shí)間不同而被檢測，即待測離子的質(zhì)荷比（M/Z）與離子的飛行時(shí)間成正比。VITEK MS由標(biāo)本準(zhǔn)備工作站、主機(jī)、數(shù)據(jù)采集工作站及Myla軟件的服務(wù)器組成。VITEK MS可與VITEK2系統(tǒng)連接，實(shí)現(xiàn)快速鑒定和藥敏試驗(yàn)。

表1 菌株耐藥性

4 結(jié)果

4.1 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理 使用SPSS 2.0軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)處理后，發(fā)現(xiàn)鮑曼不動(dòng)桿菌對(duì)臨床常用抗生素均有不同程度耐藥，其中對(duì)第三代頭孢菌素的耐藥率最高，對(duì)頭孢曲松的中介耐藥率高達(dá)92.3%；對(duì)阿米卡星、頭孢派酮/舒巴坦和替加環(huán)素、米諾環(huán)素的耐藥率較低。其中替加環(huán)素耐藥率為5.6%，所有菌株均對(duì)抗生素有1種或1種以上抗生素有很強(qiáng)的耐藥性[3]。見表1。

4.2 質(zhì)粒圖譜 對(duì)多重耐藥鮑曼不動(dòng)桿菌菌株進(jìn)行VITEK MS質(zhì)粒圖譜分析?？梢园l(fā)現(xiàn)多重耐藥菌株與敏感菌株的質(zhì)粒圖譜點(diǎn)位有較大差異。

5 討論

通過以上的實(shí)驗(yàn)可以發(fā)現(xiàn)，絕大多數(shù)抗生素對(duì)于治療多重耐藥鮑曼不動(dòng)桿菌已沒有較好的療效，VITEK MS質(zhì)粒圖譜可以通過位點(diǎn)圖的差異提示我們多重耐藥的可能。雖然藥敏實(shí)驗(yàn)結(jié)果提示臨床在治療時(shí)盡量使用敏感程度較高的抗生素，但也告誡我們合理使用抗生素治療感染性疾病的重要性。當(dāng)前抗生素的濫用已導(dǎo)致許多耐藥菌的出現(xiàn)[4,5]，如果仍不加以重視，遲早會(huì)出現(xiàn)全耐藥的超級(jí)細(xì)菌[6,7]。長此以往，對(duì)鮑曼不動(dòng)桿菌的抗生素治療效果就微乎其微，甚至是無藥可救。除此之外，在臨床治療時(shí)還要注意不要重復(fù)感染[8]，這樣極易產(chǎn)生新的耐藥性菌種，就會(huì)加大疾病的治療難度，而患者痊愈的希望也會(huì)進(jìn)一步降低。所以合理使用抗生素在醫(yī)療各界仍是值得廣泛關(guān)注的問題。