細(xì)胞學(xué)胸腹水腺癌與間皮細(xì)胞的鑒別診斷

趙 樂

南陽(yáng)市中心醫(yī)院 (河南 南陽(yáng) 473000)

胸腹水是臨床疾病常見的體征，其形成原因較為復(fù)雜。常規(guī)細(xì)胞學(xué)檢查時(shí)依據(jù)腫瘤細(xì)胞形態(tài)學(xué)特征進(jìn)行判斷。[1]由于腫瘤細(xì)胞在積液中沒有組織及器官構(gòu)架的約束而呈自由漂浮和增生狀態(tài)，甚至經(jīng)歷數(shù)代繁殖失去了原來(lái)組織特征，同時(shí)受到刺激脫落的反應(yīng)性間皮細(xì)胞也有惡性細(xì)胞的一些特征，細(xì)胞病理診斷醫(yī)師很難對(duì)腺癌細(xì)胞和增生間皮細(xì)胞鑒別。[13]常規(guī)細(xì)胞學(xué)檢查的敏感度不理想，將胸腹水內(nèi)細(xì)胞進(jìn)行薄層液基制片行免疫組織化學(xué)染色方法進(jìn)行鑒別診斷很有臨床應(yīng)用價(jià)值[16]。我們用免疫細(xì)胞化學(xué)檢測(cè)CR、HMBE-1、WT1、CDX2、E-cadherin、GLUT1，在胸腹水中腺癌細(xì)胞及增生間皮細(xì)胞的表達(dá)情況，探討該組合在腺癌及增生間皮細(xì)胞鑒別診斷中的價(jià)值。

1 材料與方法

1.1研究對(duì)象 選取南陽(yáng)市中心醫(yī)院病理科2015年-2017年胸腹水標(biāo)本100例。其中腺癌72例(肺癌34例、乳腺癌12例、胃癌18例、卵巢癌8例)，反應(yīng)性增生間皮細(xì)胞28例(炎性病變22例、結(jié)核6例)。本研究是按照南陽(yáng)市中心醫(yī)院倫理委員會(huì)規(guī)定進(jìn)行的，并獲得所有患者的知情同意。

1.2液基細(xì)胞制片 取新鮮胸腹水標(biāo)本200 ml，2 000 r/min離心，棄上清液，加入MonoGene細(xì)胞清洗液250 ml，500 r/min振蕩5 min,2000 r/min離心5 min，棄上清液，沉渣倒入有細(xì)胞保存液的標(biāo)本瓶中，靜置15 min，使用邁威制片機(jī)制片7張，95%乙醇固定，1張用于HE染色用于常規(guī)細(xì)胞學(xué)檢查，另6張用于細(xì)胞免疫化學(xué)染色，先存于-20℃冰箱備用。

1.3試劑及染色方法 所用CR、HMBE-1、WT1、CDX2、E-cadherin、GLUT1單克隆抗體及試劑盒均購(gòu)自北京中杉金橋生物技術(shù)公司。采用鏈霉菌抗生物素過(guò)氧化酶(SP)法，磷酸緩沖液代替一抗作為空白對(duì)照，DAB顯色，蘇木精復(fù)染，脫水透明后封片。

1.4結(jié)果判定 CR表達(dá)間皮部位為胞質(zhì)和胞核。HMBE-1表達(dá)部位是胞膜周邊，WT1表達(dá)部位為胞核，CDX2表達(dá)為胞核，E-cadherin表達(dá)為胞膜，GLUT1表達(dá)部位為胞質(zhì)和胞膜。

1.5統(tǒng)計(jì)學(xué)分析 采用χ2檢驗(yàn)，以P<0.05有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1CR、HMBE-1及WT1在胸腹水中的表達(dá) 神經(jīng)特異性鈣結(jié)合蛋白(calretinin,CR)在間皮細(xì)胞中表達(dá)，胞核與胞質(zhì)均著色，呈棕黃色顆粒狀外觀，[6]28例良性胸腹水見CR呈陰性表達(dá)(25/28，93%)，在腺癌中無(wú)表達(dá)。間皮抗原(HMBE-1)在間皮細(xì)胞中表達(dá)胞膜周邊呈毛刺狀改變，呈棕黃色顆粒。在增生間皮細(xì)胞中表達(dá)(24/28，85%)，72例腺癌胸腹水中僅有2例表達(dá)陽(yáng)性(2/72,2%)，Wilms抑癌基因1(WT1)在間皮細(xì)胞中表達(dá)胞核著色，呈棕黃色顆粒外觀，在增生間皮細(xì)胞中表達(dá)(23/28，82%)在腺癌中無(wú)表達(dá)。

2.2CDX2、E-Cadherin及GULT11在胸腹水中的表達(dá) 尾型同源框基因2(CDX2)在腺癌細(xì)胞中表達(dá)胞核著色，呈棕黃色顆粒外觀，在腺癌細(xì)胞中表達(dá)(49/72,68%)在增生間皮細(xì)胞中無(wú)表達(dá)。上皮型鈣粘附蛋白(E-cadherin)在腺癌細(xì)胞表達(dá)部位胞膜著色，呈棕黃色顆粒，在腺癌細(xì)胞中表達(dá)(63/72,88%)，在增生間皮細(xì)胞中無(wú)表達(dá)，葡萄糖轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白1(GLUT1)在腺癌細(xì)胞中表達(dá)明顯，胞膜或胞質(zhì)著色，呈棕黃色顆粒外觀，在腺癌細(xì)胞中表達(dá)(65/72,90%)，在增生間皮細(xì)胞只有3例表達(dá)陽(yáng)性(3/72,4%)

3 討論

常規(guī)細(xì)胞學(xué)檢查通常對(duì)間皮細(xì)胞與腺癌細(xì)胞不難鑒別，但增生間皮細(xì)胞呈團(tuán)排列、雙核、多核、核增大、核漿比增大等表現(xiàn)與高分化腺癌細(xì)胞難以鑒別，[8]對(duì)診斷造成困擾，需免疫組織化學(xué)染色進(jìn)一步檢查才能明確。[9]在日常診斷工作中，只根據(jù)一種抗體染色陽(yáng)性而確定某種腫瘤經(jīng)常導(dǎo)致錯(cuò)誤，采用幾種抗體進(jìn)行標(biāo)記是非常重要的。最好選用液基細(xì)胞制片來(lái)進(jìn)行免疫細(xì)胞化學(xué)實(shí)驗(yàn)。液基制片的優(yōu)點(diǎn)表現(xiàn)為制成的薄片背景清晰，[15]無(wú)背景干擾，便于結(jié)果的判斷，且同一標(biāo)本可制作多張涂片，便于抗體組合應(yīng)用[14]。

本研究采用CR、HMBE-1、WT1、CDX2、E-cadherin、GLUT1六種抗體組合應(yīng)用于胸腹水中腺癌細(xì)胞及增生間皮細(xì)胞的診斷與鑒別診斷。CR是一種鈣結(jié)合蛋白，在間皮細(xì)胞中表達(dá)與胞核和胞質(zhì)，敏感性93%，特異性96.9%，是日常較常用的間皮標(biāo)志物。HMBE-1是間皮細(xì)胞的分子標(biāo)記，該抗體與間皮細(xì)胞表面的抗原反應(yīng),[12]表達(dá)為胞膜著色，敏感性85%，特異性95.8%。WT1是與腎母細(xì)胞瘤發(fā)生、發(fā)展有關(guān)的基因，在上皮型間皮瘤中也有表達(dá)，在增生間皮細(xì)胞中表達(dá)胞核著色，敏感性82%，特異性100%。CDX2是一個(gè)在胃腸道發(fā)育中參與早期分化再生的轉(zhuǎn)錄因子,[3]在腺癌細(xì)胞中表達(dá)胞核著色，敏感性68%，特異性100%。E-cadherin是一種依賴性的跨膜蛋白，對(duì)上皮細(xì)胞間相互粘附和維持組織結(jié)構(gòu)穩(wěn)定有重要作用，[4]在腺癌細(xì)胞中表達(dá)胞膜著色，敏感性88%，特異性93.3%。GLUT1是一種調(diào)節(jié)跨膜糖轉(zhuǎn)運(yùn)的糖蛋白，其表達(dá)與細(xì)胞代謝及增殖水平量正相關(guān),[3]在腺癌細(xì)胞中表達(dá)胞膜或胞質(zhì)著色，敏感性90%，特異性95.9%。選擇一組至少兩種以上相互支持的抗體，同時(shí)再選反面否定的抗體，同時(shí)獲得雙重互補(bǔ)，正反兩方面的證實(shí)。[2]CR、HMBE-1、WT1中一種或幾種抗體在胸腹水中的異型增生細(xì)胞中表達(dá)陽(yáng)性，而CDX2、E-cadherin、GLUT1表達(dá)陰性，即可表明是增生間皮細(xì)胞。反之，CDX2、E-cadherin、GLUT1中的一種或幾種抗體表達(dá)陽(yáng)性，而CR、HMBE-1、WT1表達(dá)陰性，則表明是腺癌細(xì)胞。

我們通過(guò)研究發(fā)現(xiàn)采用CR、HMBE-1、WT1、CDX2、E-cadherin、GLUT1六種抗體組合應(yīng)用對(duì)細(xì)胞學(xué)胸腹水中腺癌細(xì)胞與增生間皮細(xì)胞鑒別診斷具有較大的幫助作用。各抗體在腺癌細(xì)胞與增生間皮中表達(dá)差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。[17]各種抗體敏感性和特異性均有不同程度的局限性，而聯(lián)合檢測(cè)可雙重互補(bǔ)，提高診斷的準(zhǔn)確性，具有重要的臨床價(jià)值。