電子煙煙液及其主要化學(xué)成分的體外細(xì)胞毒性評(píng)價(jià)

陳 歡，韓書(shū)磊，張 森，史智浩，侯宏衛(wèi)，胡清源

國(guó)家煙草質(zhì)量監(jiān)督檢驗(yàn)中心，鄭州高新技術(shù)產(chǎn)業(yè)開(kāi)發(fā)區(qū)楓楊街2號(hào) 450001

近年來(lái)，電子煙以“保健”“戒煙”“清肺”等為宣傳口號(hào)，以網(wǎng)絡(luò)為主要營(yíng)銷途徑，在世界范圍的銷量呈快速增加趨勢(shì)。大多數(shù)電子煙產(chǎn)品宣稱其比傳統(tǒng)卷煙的危害性更小［1］。然而，目前對(duì)電子煙的毒性評(píng)價(jià)研究較少。Bahl等［2］采用 3-（4,5-二甲基噻唑-2）-2,5-二苯基四氮唑溴鹽法（MTT法）對(duì)電子煙煙液的細(xì)胞毒性進(jìn)行評(píng)價(jià)，結(jié)果表明不同電子煙煙液的細(xì)胞毒性相差很大。Behar等［3］的進(jìn)一步研究表明，電子煙產(chǎn)品中的肉桂添加劑成分與細(xì)胞毒性有關(guān)，會(huì)對(duì)電子煙消費(fèi)者的健康產(chǎn)生影響。目前關(guān)于電子煙氣溶膠中有害成分及細(xì)胞毒性評(píng)價(jià)研究也有報(bào)道［4-6］。電子煙與普通卷煙的主要差異在于電子煙是通過(guò)霧化器霧化電子煙煙液形成氣溶膠，由于不需要經(jīng)過(guò)傳統(tǒng)卷煙的高溫燃燒過(guò)程，不同化合物在煙液霧化為氣溶膠過(guò)程中的變化主要體現(xiàn)在遞送規(guī)律方面，因此大多數(shù)成分并不會(huì)發(fā)生化學(xué)性質(zhì)方面的改變。可見(jiàn)，考察電子煙煙液的細(xì)胞毒性對(duì)于評(píng)價(jià)不同電子煙產(chǎn)品的生物學(xué)毒性具有重要意義。

常用的細(xì)胞毒性評(píng)價(jià)方法主要包括MTT法、中性紅吸收法、CCK-8法、WST-1實(shí)驗(yàn)、乳酸脫氫酶（Lactate dehydrogenase,LDH）實(shí)驗(yàn)及溴脫氧尿嘧啶核苷（BrdU）摻入實(shí)驗(yàn)等。各種方法的檢測(cè)原理不同，優(yōu)缺點(diǎn)也不一樣。MTT、CCK-8和WST-1實(shí)驗(yàn)主要以活細(xì)胞線粒體經(jīng)脫氫酶轉(zhuǎn)化后形成的甲瓚的量表征細(xì)胞活性，其中MTT生成的是不溶于水的藍(lán)紫色甲瓚，需要用有機(jī)溶劑溶解后再進(jìn)行測(cè)定；WST-1和CCK-8生成的是水溶性的黃色甲瓚，無(wú)需洗滌和有機(jī)溶劑溶解就可以直接測(cè)定，因而重復(fù)性和靈敏性比MTT法更高［7］。中性紅實(shí)驗(yàn)以細(xì)胞溶酶體攝入中性紅染料的能力表征細(xì)胞活性，雖然該方法的準(zhǔn)確性和靈敏性也較高，但是中性紅溶液需要現(xiàn)配現(xiàn)用，實(shí)驗(yàn)操作較為繁瑣［8］。LDH實(shí)驗(yàn)通過(guò)檢測(cè)細(xì)胞膜受損后釋放到培養(yǎng)液中的乳酸脫氫酶的活性來(lái)表征細(xì)胞活性［8］。該方法操作簡(jiǎn)單、重復(fù)性好，對(duì)損傷細(xì)胞膜毒物的檢測(cè)靈敏性和準(zhǔn)確性較高。BrdU實(shí)驗(yàn)的原理是將一種胸腺嘧啶核苷類似物BrdU摻入細(xì)胞合成的DNA中，在細(xì)胞DNA合成期時(shí)，BrdU會(huì)與胸腺嘧啶產(chǎn)生競(jìng)爭(zhēng)并摻入到新合成的DNA中，利用BrdU抗體對(duì)摻入到DNA的BrdU的特異性識(shí)別可以檢測(cè)細(xì)胞活性［9］。該方法能敏感地評(píng)價(jià)會(huì)對(duì)DNA和DNA的合成造成損傷的物質(zhì)［10］。

考慮到不同細(xì)胞活性評(píng)價(jià)方法的準(zhǔn)確性和便捷性，本研究中分別采用LDH、BrdU、WST-1和CCK-8四種細(xì)胞毒性測(cè)定方法來(lái)評(píng)價(jià)電子煙煙液有關(guān)細(xì)胞膜損傷、細(xì)胞增殖和細(xì)胞活性等方面的細(xì)胞毒性，以篩選出檢測(cè)靈敏及檢測(cè)結(jié)果準(zhǔn)確可靠的電子煙體外細(xì)胞毒性評(píng)價(jià)方法。同時(shí)，根據(jù)不同細(xì)胞系對(duì)測(cè)試化合物敏感程度的差異，分別采用中國(guó)倉(cāng)鼠卵巢細(xì)胞（CHO細(xì)胞）和人肺癌細(xì)胞（A549細(xì)胞）進(jìn)行相同電子煙煙液的細(xì)胞毒性評(píng)價(jià)對(duì)比，以篩選出適用于電子煙煙液細(xì)胞毒性評(píng)價(jià)的細(xì)胞株。本實(shí)驗(yàn)中選擇16種電子煙煙液樣品進(jìn)行考察，通過(guò)氣相色譜儀檢測(cè)主要成分煙堿、1,2-丙二醇和丙三醇的含量，并分析主要化學(xué)成分與電子煙煙液細(xì)胞毒性的相關(guān)性，旨在準(zhǔn)確評(píng)價(jià)電子煙煙液的細(xì)胞毒性及其主要成分對(duì)細(xì)胞毒性的影響，為電子煙煙液細(xì)胞毒性的研究提供參考。

1 材料與方法

1.1 材料、試劑和儀器

CHO和A549細(xì)胞（中國(guó)科學(xué)院上海生命科學(xué)院細(xì)胞庫(kù)提供）；16種電子煙煙液，均通過(guò)網(wǎng)絡(luò)途徑采購(gòu)。

煙堿（AR，國(guó)家煙草質(zhì)量監(jiān)督檢驗(yàn)中心提供）；丙三醇、1,2-丙二醇（AR，美國(guó)Sigma公司）；RPMI-1640培養(yǎng)基、0.25%胰蛋白酶及胎牛血清（美國(guó)Gibco公司）；LDH試劑盒、BrdU試劑盒及WST-1試劑盒（瑞氏Roche公司）；CCK-8試劑盒［東仁化學(xué)科技（上海）有限公司］。

MD Spectramax M5酶標(biāo)儀（美國(guó)Molecular Device公司）；456-GC氣相色譜儀（配FID檢測(cè)器，美國(guó)Bruker Daltonics公司）。

1.2 方法

1.2.1 細(xì)胞培養(yǎng)和染毒

CHO和A549細(xì)胞采用含有10%胎牛血清的RPMI-1640培養(yǎng)基培養(yǎng)，當(dāng)細(xì)胞生長(zhǎng)至匯合率為70%～80%時(shí)，采用0.25%的胰酶消化成單細(xì)胞懸液，在顯微鏡下計(jì)數(shù)后，向96孔細(xì)胞培養(yǎng)板（除最外周36孔）中加入100 μL 1×105個(gè)細(xì)胞/mL的單細(xì)胞懸液。細(xì)胞接種24 h后移除培養(yǎng)液，采用0.1 mol/L的磷酸鹽緩沖液洗滌1次后加入染毒液。每個(gè)處理進(jìn)行6個(gè)平行實(shí)驗(yàn)，細(xì)胞存活率表達(dá)均為平均值±標(biāo)準(zhǔn)偏差。

1.2.2 細(xì)胞毒性檢測(cè)

（1）LDH法。細(xì)胞接種24 h后開(kāi)始染毒，分別設(shè)置正常對(duì)照組（不染毒）、不同劑量的電子煙煙液染毒組和LDH最大釋放組（不染毒，用于檢測(cè)細(xì)胞可釋放LDH酶的最大量），正常對(duì)照組和LDH最大釋放組均每孔加入100 μL的細(xì)胞培養(yǎng)基，電子煙煙液染毒組每孔加入100 μL不同濃度的電子煙煙液染毒溶液，96孔板的最外周36個(gè)孔中選擇其中6個(gè)孔作為培養(yǎng)基背景對(duì)照，再選擇6個(gè)孔加入最高電子煙煙液染毒溶液作為染毒溶液背景對(duì)照。在染毒步驟結(jié)束前15 min，向LDH最大釋放組中加入5 μL裂解液，繼續(xù)孵育15 min。向96孔板每孔中加入100 μL新配制的LDH反應(yīng)混合液，避光反應(yīng)15 min后，每孔加入50 μL終止液，振蕩10 s。使用酶標(biāo)儀檢測(cè)每孔在490 nm波長(zhǎng)處的吸光值，參比波長(zhǎng)為630 nm。

（2）BrdU摻入法。細(xì)胞接種24 h后開(kāi)始染毒，分別設(shè)置正常對(duì)照組（不染毒），電子煙煙液染毒組和培養(yǎng)基背景對(duì)照組。空白對(duì)照組中每孔加入100 μL細(xì)胞培養(yǎng)基、電子煙煙液染毒組中每孔加入100 μL電子煙煙液染毒溶液。染毒結(jié)束前2 h，每孔加入10 μL的BrdU染料，繼續(xù)孵育2 h，然后開(kāi)始BrdU摻入量的檢測(cè)。吸除溶劑后每孔加入200 μL的細(xì)胞固定和變性溶液，室溫下孵育30 min。吸除培養(yǎng)孔中的溶液后，每孔加入100 μL過(guò)氧化物酶標(biāo)記的抗BrdU抗體，室溫下孵育90 min。用300 μL清洗液清洗細(xì)胞培養(yǎng)板3次，每孔加入100 μL酶反應(yīng)底物，反應(yīng)30 min，檢測(cè)370 nm處的吸光度值。

（3）WST-1法。細(xì)胞接種24 h后開(kāi)始染毒，分別設(shè)置正常對(duì)照組（不染毒、染毒組、陽(yáng)性對(duì)照組（200 μg/mL SDS）和培養(yǎng)基背景對(duì)照組。染毒結(jié)束后，每孔加入10 μL WST-1試劑，繼續(xù)于37℃、5%CO2條件下孵育2 h。振蕩1 min后使用酶標(biāo)儀檢測(cè)每孔在450 nm波長(zhǎng)處的吸光值，參比波長(zhǎng)為630 nm。

（4）CCK-8法。細(xì)胞接種24 h后開(kāi)始染毒，分別設(shè)置正常對(duì)照組（不染毒、染毒組、陽(yáng)性對(duì)照組（200 μg/mL SDS）和培養(yǎng)基背景對(duì)照組。染毒結(jié)束后，每孔加入10 μL CCK-8試劑，繼續(xù)于37℃、5%CO2條件下孵育2 h。振蕩1 min后使用酶標(biāo)儀檢測(cè)每孔在450 nm波長(zhǎng)處的吸光值，參比波長(zhǎng)為630 nm。

1.2.3 氣相色譜法檢測(cè)電子煙煙液中的煙堿、1,2-丙二醇和丙三醇

樣品前處理：稱取約0.1 g電子煙煙液樣品，精確至0.1 mg，置于50 mL錐形瓶?jī)?nèi)，再加入10 mL含有內(nèi)標(biāo)1,3-丁二醇和2-甲基喹啉的異丙醇溶液（1,3-丁二醇作為1,2-丙二醇和丙三醇內(nèi)標(biāo)，2-甲基喹啉作為煙堿內(nèi)標(biāo)），振蕩20 min后取約1 mL進(jìn)樣分析。每個(gè)樣品應(yīng)平行測(cè)定兩次。儀器分析條件為：

色譜柱：DB-ALC1（30 m×0.32 mm×1.80 μm）；程序升溫方式：初始溫度100℃，保持1 min，以15℃/min速率升至220℃，保持6 min；總運(yùn)行時(shí)間為15 min；載氣：氦氣；載氣流速：1.8 mL/min；尾吹氣：20 mL/min；空氣：450 mL/min；氫氣：40 mL/min；進(jìn)樣口溫度：250℃；檢測(cè)器溫度：275℃；進(jìn)樣量：1 μL；分流比：50∶1。

1.2.4 數(shù)據(jù)處理

（1）LDH實(shí)驗(yàn)中細(xì)胞存活率的計(jì)算公式：

式中：A為實(shí)驗(yàn)組對(duì)應(yīng)的吸光度值。下同。

（2）BrdU、WST-1和CCK-8實(shí)驗(yàn)中細(xì)胞存活率的計(jì)算公式：

（3）采用GraphPad Prism 5軟件進(jìn)行IC50值計(jì)算和圖形繪制，采用SPSS 20.0進(jìn)行單因素ANOVA方差分析、t檢驗(yàn)、Tukey多重比較和Pearson相關(guān)分析。

2 結(jié)果與討論

2.1 不同方法檢測(cè)的電子煙煙液的細(xì)胞毒性

采用LDH、BrdU、WST-1和CCK-8實(shí)驗(yàn)對(duì)電子煙煙液的細(xì)胞毒性測(cè)定結(jié)果如圖1和表1所示。可以看出，染毒3 h后，所有方法均能檢測(cè)到電子煙煙液的細(xì)胞毒性，CCK-8法計(jì)算的IC50值最低（81.81 mg/mL），其次依次為WST-1、BrdU及LDH實(shí)驗(yàn)。另外，采用CCK-8實(shí)驗(yàn)計(jì)算的細(xì)胞毒性最低效應(yīng)濃度（LEC）為20 mg/mL，遠(yuǎn)低于LDH（100 mg/mL）、WST-1（70 mg/mL）和BrdU（50 mg/mL）實(shí)驗(yàn)的LEC值，說(shuō)明采用CCK-8實(shí)驗(yàn)評(píng)價(jià)電子煙煙液染毒3 h后的細(xì)胞毒性最為敏感。暴露24 h后，所有方法獲得的電子煙煙液細(xì)胞毒性劑量-效應(yīng)關(guān)系比3 h更明顯?？梢?jiàn)，采用CCK-8實(shí)驗(yàn)評(píng)價(jià)電子煙煙液染毒24 h后的細(xì)胞毒性最為敏感。綜上可知，LDH、BrdU、WST-1和CCK-8實(shí)驗(yàn)4種方法均能用來(lái)檢測(cè)電子煙煙液的細(xì)胞毒性且均能獲得顯著的細(xì)胞毒性-效應(yīng)曲線，但是各種方法檢測(cè)電子煙煙液細(xì)胞毒性的敏感性不同，其中CCK-8實(shí)驗(yàn)的敏感性最高，其次依次為WST-1、BrdU和LDH實(shí)驗(yàn)。

4種方法敏感性差異的主要原因可能是，除了與各方法的檢測(cè)原理有關(guān)外，還與電子煙煙液本身的化學(xué)性質(zhì)有關(guān)。電子煙煙液的主要成分為丙三醇和1,2-丙二醇，而這兩種物質(zhì)是細(xì)胞膜主要組分甘油三酯的重要組成成分，可能對(duì)保持細(xì)胞膜的完整性具有一定的積極作用，對(duì)于主要通過(guò)檢測(cè)細(xì)胞膜破損釋放乳酸脫氫酶活性的LDH實(shí)驗(yàn)來(lái)說(shuō)，檢測(cè)的敏感性相對(duì)較低。WST-1和CCK-8實(shí)驗(yàn)主要通過(guò)檢測(cè)線粒體上的琥珀酸脫氫酶的活性來(lái)表征細(xì)胞毒性，由于線粒體是細(xì)胞內(nèi)能量的生產(chǎn)中心，與細(xì)胞內(nèi)各種生理活動(dòng)均有著緊密的聯(lián)系，因而無(wú)論細(xì)胞內(nèi)的何種生理活動(dòng)受到有毒物質(zhì)的損害后，均會(huì)間接反映線粒體電子呼吸鏈上氧化還原酶的活性。BrdU通過(guò)細(xì)胞內(nèi)DNA的合成來(lái)表征細(xì)胞的增殖和活性，因而細(xì)胞內(nèi)DNA合成相關(guān)活性受到有害因素的抑制或者損傷后，BrdU實(shí)驗(yàn)?zāi)芡ㄟ^(guò)細(xì)胞內(nèi)DNA的合成情況來(lái)準(zhǔn)確反映細(xì)胞的增殖和生長(zhǎng)活性。由于電子煙煙液主要的細(xì)胞毒性源于氧化應(yīng)激［11］，因而WST-1和CCK-8實(shí)驗(yàn)比BrdU實(shí)驗(yàn)評(píng)價(jià)電子煙煙液的細(xì)胞毒性更為敏感。WST-1和CCK-8的實(shí)驗(yàn)原理相似，但是兩者琥珀酸脫氫酶反應(yīng)底物的化學(xué)結(jié)構(gòu)不同，CCK-8的底物是WST-1的升級(jí)產(chǎn)品，與琥珀酸脫氫酶產(chǎn)生的甲瓚更穩(wěn)定且更易溶于水，因此CCK-8實(shí)驗(yàn)檢測(cè)電子煙煙液細(xì)胞毒性的靈敏度更高。

圖1 LDH、BrdU、WST-1和CCK-8實(shí)驗(yàn)測(cè)定的電子煙煙液細(xì)胞毒性Fig.1 Cytotoxicity of e-liquids tested by LDH,BrdU,WST-1 and CCK-8 methods

表1 不同方法評(píng)價(jià)電子煙煙液染毒3和24 h的IC50和LEC值Tab.1 Values of IC50and LEC tested by different methods after 3 and 24 h exposure to e-liquids

2.2 不同細(xì)胞系對(duì)電子煙煙液細(xì)胞毒性的敏感程度

圖2 兩個(gè)電子煙煙液樣品對(duì)A549細(xì)胞和CHO細(xì)胞的細(xì)胞毒性Fig.2 Cytotoxicity of two e-liquids to A549 and CHO cell lines

CHO細(xì)胞和A549細(xì)胞易于培養(yǎng)，生長(zhǎng)速度快，維護(hù)成本低，是煙草行業(yè)體外毒性評(píng)價(jià)常用的兩種細(xì)胞系。本實(shí)驗(yàn)中以CCK-8實(shí)驗(yàn)為細(xì)胞毒性檢測(cè)方法，對(duì)CHO細(xì)胞和A549細(xì)胞在評(píng)價(jià)電子煙煙液細(xì)胞毒性時(shí)的敏感程度進(jìn)行了分析，以獲得更適用于電子煙煙液細(xì)胞毒性評(píng)價(jià)的細(xì)胞系。由圖2可知，隨著電子煙煙液A和B的染毒劑量增加，細(xì)胞毒性逐漸增大，具有顯著的劑量-效應(yīng)關(guān)系。雖然t檢驗(yàn)表明電子煙煙液樣品A和B的濃度分別為70和20 mg/mL時(shí)，CHO細(xì)胞的存活率才顯著低于A549細(xì)胞的存活率（P<0.000 1），但是Tukey多重比較結(jié)果表明，當(dāng)電子煙煙液樣品A和B的濃度為分別為40和20 mg/mL時(shí)CHO細(xì)胞的存活率就已經(jīng)開(kāi)始與空白對(duì)照組具有極顯著差異（P<0.000 1），而A549細(xì)胞在電子煙煙液樣品A和B的濃度為分別達(dá)到50和40 mg/mL時(shí)才開(kāi)始與空白對(duì)照組具有極顯著差異（P<0.000 1）。因此，CHO細(xì)胞比A549細(xì)胞對(duì)這兩個(gè)電子煙煙液的細(xì)胞毒性更為敏感。

另外，比較這兩個(gè)電子煙煙液對(duì)A549細(xì)胞和CHO細(xì)胞的IC50值發(fā)現(xiàn)，電子煙煙液A和B對(duì)CHO細(xì)胞的IC50值（54.85和46.13 mg/mL）均比A549細(xì)胞的IC50值（59.77和50.47 mg/mL）更低。因此，CHO細(xì)胞比A549細(xì)胞對(duì)電子煙煙液的毒性更加敏感，更適合于電子煙煙液細(xì)胞毒性的評(píng)價(jià)。由于CHO細(xì)胞為亞二倍體細(xì)胞，A549細(xì)胞為亞三倍體細(xì)胞，A549細(xì)胞對(duì)毒物引起的毒性反應(yīng)修復(fù)和耐受性更強(qiáng)，因此其對(duì)電子煙煙液細(xì)胞毒性的敏感性比CHO細(xì)胞差。

2.3 電子煙煙液的細(xì)胞毒性及其細(xì)胞毒性與主要成分含量的相關(guān)性

選擇CHO細(xì)胞為測(cè)試細(xì)胞系、CCK-8實(shí)驗(yàn)為檢測(cè)方法，對(duì)市售的16種電子煙煙液的細(xì)胞毒性進(jìn)行了普查分析。表2為16種電子煙煙液的IC50值。由表2可知，不同電子煙煙液的細(xì)胞毒性相差較大（最高相差5.47倍）。1,2-丙二醇和丙三醇是電子煙煙液的主要溶劑，含量分別為49.17%～77.55%和4.66%～46.94%，二者總量約占電子煙煙液的80%以上。電子煙煙液中煙堿含量為0～2.84%，檢出率在87.5%以上，煙堿最高約占電子煙煙液的3%。其他成分的總量為1.96%～33.34%，大多數(shù)在10%以下。不同生產(chǎn)廠家的電子煙煙液中化學(xué)成分的種類和含量存在較大差異，檢出的煙氣關(guān)注有害成分［12］包括：羰基化合物（如甲醛、乙醛、丙烯醛、丙酮及甲基苯甲醛等）、多環(huán)芳烴（如蒽、菲、1-甲基菲及芘等）、煙草特有亞硝胺（如NNN、NNK、NAT及NAB等）、重金屬（如鎘、鎳、鉛、砷及鉻等）、煙草生物堿（如可替寧、麥斯明、新煙草堿、假木賊堿、β-雪茄堿及去甲基煙堿等）以及揮發(fā)性有機(jī)物（如甲苯、間二甲苯及3-甲基丁基-3-甲基丁酸乙酯等）等。

表2 16種電子煙煙液的細(xì)胞毒性IC50值及其主要化學(xué)成分含量①Tab.2 IC50values and contents of main components in 16 e-liquids

將16種電子煙煙液的IC50值與其主要成分煙堿、1,2-丙二醇、丙三醇的含量水平進(jìn)行線性回歸和Pearson相關(guān)分析，結(jié)果如圖3所示。可以看出，煙堿、1,2-丙二醇、丙三醇及其他成分含量的總和與對(duì)應(yīng)電子煙煙液的IC50值間線性回歸相關(guān)系數(shù)R2值均小于0.1。另外，煙堿、1,2-丙二醇、丙三醇及其他成分總和的含量與對(duì)應(yīng)電子煙煙液IC50值間的Pearson線性相關(guān)系數(shù)分別為0.026（P=0.924），-0.303（P=0.254），0.263（P=0.326）及-0.013（P=0.962），且均無(wú)顯著相關(guān)性（P＞0.05）。說(shuō)明16種電子煙煙液中的煙堿、1,2-丙二醇和丙三醇與電子煙煙液的細(xì)胞毒性無(wú)顯著線性相關(guān)性。

圖3 16種電子煙煙液IC50值與煙堿（A）、1,2-丙二醇（B）、丙三醇（C）及其他成分（D）含量的一元線性回歸分析結(jié)果Fig.3 One-dimensional linear regression analysis between IC50values of contents of nicotine（A）,1,2-propylene glycol（B）,glycerol（C）and other components（D）in 16 e-liquids

原因可能是：①所分析的樣品數(shù)量較少，因而所得的線性關(guān)系不明顯；②由于單個(gè)物質(zhì)之間對(duì)細(xì)胞毒性可能存在交互作用，因此這些主要成分與電子煙煙液的細(xì)胞毒性可能存在非線性關(guān)系。為此，需進(jìn)一步對(duì)更多樣品中的成分和毒性進(jìn)行檢測(cè)，并在此基礎(chǔ)上深入探索電子煙液中的這些主要成分是否與電子煙煙液存在非線性關(guān)系。

3 結(jié)論

通過(guò)對(duì)不同細(xì)胞毒性實(shí)驗(yàn)、不同測(cè)試細(xì)胞系等條件的篩選，確定了適用于電子煙煙液細(xì)胞毒性評(píng)價(jià)的方法，即以CHO細(xì)胞作為測(cè)試細(xì)胞系，采用CCK-8實(shí)驗(yàn)評(píng)價(jià)電子煙煙液的細(xì)胞毒性。對(duì)通過(guò)網(wǎng)絡(luò)途徑采購(gòu)的16種電子煙煙液的細(xì)胞毒性進(jìn)行了分析，考察了細(xì)胞毒性與電子煙煙液主要成分之間的相關(guān)性。盡管不同電子煙產(chǎn)品煙液的細(xì)胞毒性相差很大（最高相差5.47倍），但是本實(shí)驗(yàn)中所分析的16種電子煙煙液的細(xì)胞毒性的差異與其主要成分（煙堿、1,2-丙二醇和丙三醇）的含量并無(wú)顯著的線性關(guān)聯(lián)。