水提醇沉提取銀杏葉多糖工藝浸提溫度的試驗研究

劉奕辰 （山東省泰安第一中學(xué) 271000）

銀杏(學(xué)名：Ginkgo biloba L.)，為銀杏科、銀杏屬落葉喬木，中生代孑遺的稀有樹種，中國特產(chǎn)，隨著社會進(jìn)步和園林技術(shù)的發(fā)展，已成為隨處可見的園林綠化、觀賞樹種，人們對銀杏的開發(fā)利用也越來越廣泛。除樹干、果實以外，銀杏葉提取物也已被用于藥物、保健品、食品添加劑、功能性飲料、化妝品等領(lǐng)域，帶來很大的經(jīng)濟(jì)效益。但目前銀杏葉應(yīng)用技術(shù)較成熟的成分主要是黃酮和內(nèi)酯類化合物等脂溶性提取物[1]，對其水溶性提取物活性成分如銀杏葉多糖的開發(fā)利用還很少。

植物多糖是一種天然植物大分子，具有免疫調(diào)節(jié)、抗腫瘤、抗病毒、抗衰老等生物學(xué)活性，且毒副作用小、殘留少。有研究證明，植物多糖是良好的動物免疫增強劑和免疫佐劑[2，3]，如能將銀杏葉多糖提取、研究，用于畜牧業(yè)生產(chǎn)，將開發(fā)銀杏葉新的應(yīng)用領(lǐng)域，帶來新的經(jīng)濟(jì)效益。目前，植物多糖的提取方法很多，主要有溶劑提取法、酸提法、堿提法、超濾提取法、超聲提取法等等[4]，其中水提醇沉法提取法不需要特殊設(shè)備，技術(shù)簡單易操作，成本較低。本試驗旨在尋找水提醇沉提取銀杏葉多糖的最佳水浸提溫度。

1 材料與方法

1.1 銀杏葉 7月份采自山東農(nóng)業(yè)大學(xué)校園，全葉。

1.2 試劑 去離子水，正丁醇，氯仿，95%乙醇。

1.3 儀器設(shè)備 202型電熱恒溫干燥箱，北京市永光明醫(yī)療儀器廠；FA1004型分析電子天平，常州市幸運電子設(shè)備有限公司； HH-S4數(shù)顯恒溫水浴鍋，國華電器有限公司；冰箱，中國海爾制造；TDL-5000bR型低速冷凍離心機(jī)，上海安亭科學(xué)儀器廠。

1.4 工藝流程 新鮮銀杏葉60℃“殺青”烘干至恒重，粉碎機(jī)粉碎，過260目篩，用水提醇沉法提取多糖，工藝流程如下：銀杏葉粉末稱重→與去離子水按照1：10的比例混合攪拌→熱水浸提8h(此過程中伴隨蒸發(fā)要隨時補充添加去離子水，每0.5h攪拌一次)→置于4℃冰箱沉淀過夜→取上清液用6層紗布過濾 →4℃ 離心，得上清液→上清液85℃水浴濃縮→濃縮液與Sevage試劑混合、震蕩、離心除蛋白(重復(fù)2次)，得上清液→上清液加6倍量無水乙醇沉淀多糖，-20°C過夜→棄上清液，收集絮狀沉淀→置于55℃干燥箱中干燥至恒重(每天要注意觀察、攪拌)→粗多糖。

1.5 試驗分組 試驗分為Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ、Ⅴ組，上述工藝流程中熱水浸提環(huán)節(jié)溫度分別設(shè)定為55、65、75、85、95℃，其余工藝流程相同。

1.6 粗多糖得率計算 銀杏葉粗多糖得率=粗多糖重量/銀杏葉粉末重量X100%。

1.7 數(shù)據(jù)分析 所有試驗數(shù)據(jù)用SPSS17.0軟件進(jìn)行單向ANOVA分析，數(shù)據(jù)用平均值(Mean)±標(biāo)準(zhǔn)誤差(SD)表示。Duncan’s多重分析表示各組間的差異顯著性，P＜0.05表明差異顯著。

2 結(jié)果

表1 不同浸提溫度下銀杏葉粗多糖得率 (%)

表1顯示，隨著浸提溫度的上升，銀杏葉粗多糖的得率均由一定幅度的提高。Ⅰ組顯著高于Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ、Ⅴ組(P＜0.05)；Ⅱ組顯著高于Ⅲ、Ⅳ、Ⅴ組(P＜0.05)；Ⅲ組顯著高于Ⅳ、Ⅴ組(P＜0.05)；Ⅳ組高于Ⅴ組，但差異不顯著(P＞0.05)。

3 討論

（1）隨著浸提溫度的上升，銀杏葉粗多糖的得率也隨之上升，這與溫度越高，細(xì)胞壁被破壞程度越大釋放粗多糖越多有關(guān)；溫度越高，物質(zhì)的分子運動越快，從而導(dǎo)致在相同的浸提時間內(nèi)溫度越高粗多糖釋放越多。但是，當(dāng)溫度超過一定范圍時，釋放出的多糖有一部分會被分解，導(dǎo)致粗多糖得率提升幅度不大。另外，溫度越高，生產(chǎn)成本越高。因此，以85℃作為浸提溫度最適宜。（2）在乙醇沉淀多糖的操作中，要注意應(yīng)將乙醇慢慢加入上清液中，邊加邊順著同一方向攪拌，否則會造成部分其它成分如鞣質(zhì)、蛋白質(zhì)等被多糖包合或螯合生成沉淀，導(dǎo)致提取多糖的純度下降，從而使測得粗多糖得率偏高，誤差增大。（3）本試驗顯示，水提醇沉法提取銀杏葉多糖最佳溫度為85℃。