甘遂的化學(xué)成分研究

董樂樂，姚鴻萍，張國(guó)剛，王新鵬，牛 壯，冀 彬，雒 磊，賀銀麗

(西安交通大學(xué)第一附屬醫(yī)院藥學(xué)部，西安 710061)

大戟屬(Euphorbia)植物歸屬大戟科(Euphorbiaceae)大戟族(Trib.Euphorbieae)，本科植物分布于世界各地，主產(chǎn)于中南美洲和非洲地區(qū)的亞熱帶和溫帶。本科不同屬不同種類中，葉子和根莖都可作為藥材使用。本屬植物種類繁多、生活環(huán)境復(fù)雜且存在較大變異性，是該科植物中最難分類的屬之一，約2 000余種，有60余種分布于我國(guó)境內(nèi)。甘遂(Euphorbiakansui)是大戟屬中相對(duì)常見的中草藥，也是具有中國(guó)特色的道地藥材[1]，多年生草本，主要生長(zhǎng)于我國(guó)陜甘寧晉豫等地的低山坡、荒坡和沙地路旁，目前已由人工種植。對(duì)于該植物化學(xué)成分的探索，最早可追溯到日本學(xué)者于20世紀(jì)40年代的研究[2]。甘遂是大寒之物，有毒，對(duì)皮膚具有刺激性，對(duì)肝腎和胃腸道有一定的毒性[3-5]；通過(guò)中藥炮制的方法可達(dá)到增效減毒的效果[6]，具有通大小便、瀉下、祛除體內(nèi)濕氣和緩解腹部脹悶疼痛不適等功能；臨床上一般用其治療胸腔積液、水腫和肝硬化腹水，也可用于治療咳喘和腫瘤等癥狀[7-8]。本實(shí)驗(yàn)對(duì)甘遂的化學(xué)成分進(jìn)行了分離鑒別，從其根部乙醇提取物的乙酸乙酯萃取部位分離得到9個(gè)化合物，用現(xiàn)代波譜方法鑒定其結(jié)構(gòu)。

1 儀器與試藥

1.1儀器 INOVA-600型、mercury 300BB型核磁共振波譜儀(美國(guó) Varian公司)；AVANCE Ⅲ-400型核磁共振波譜儀(美國(guó) Bruker公司)；Taisite X-4型數(shù)字顯微熔點(diǎn)儀(天津泰斯特儀器有限公司)。

1.2試藥 柱層析硅膠和薄層色譜硅膠(青島海洋化工廠)；葡聚糖凝膠Sephadex LH-20(瑞典Amersham公司)；所用溶劑均經(jīng)過(guò)重蒸后再使用；甘遂根(25 kg)在河北省安國(guó)中藥材市場(chǎng)購(gòu)買，由蘭州大學(xué)藥學(xué)院李建銀博士鑒定為大戟屬植物甘遂(Euphorbiakansui)的根塊，標(biāo)本目前存放于該學(xué)院天然藥物實(shí)驗(yàn)室。

2 提取與分離

將甘遂根(25 kg)在常溫下浸泡于乙醇中提取，每次浸泡時(shí)間為1周，共浸泡4次，將每次所得乙醇粗提物收集并加熱揮干，稱定質(zhì)量為470 g。將其懸浮于1.5 L蒸餾水中，分別用乙酸乙酯和正丁醇萃取3次，得到乙酸乙酯部分浸膏324 g，以石油醚-丙酮(40∶1，20∶1，10∶1，5∶1，2∶1和1∶1)作為柱層析色譜的洗脫劑進(jìn)行梯度洗脫，以薄層色譜顯示對(duì)比的結(jié)果為依據(jù)合并相似成分，共得到6個(gè)部分(以A～F標(biāo)注)。

A(石油醚-丙酮=40∶1和20∶1，18 g)部分，用石油醚-乙酸乙酯(40∶1，20∶1，10∶1，5∶1和2∶1)梯度洗脫，所得樣品通過(guò)薄層色譜實(shí)驗(yàn)合并相似成分，再依次選擇體系進(jìn)行純化，得到化合物1(22 mg)和化合物7(8 mg)。B(石油醚-丙酮=20∶1和10∶1，21.8 g)部分，通過(guò)薄層色譜實(shí)驗(yàn)合并，再經(jīng)過(guò)硅膠柱層析分離和石油醚-丙酮(5∶1)體系PTLC純化和葡聚糖凝膠Sephadex LH-20(氯仿∶甲醇=2∶3)進(jìn)一步純化得到化合物2(28 mg)和化合物6(5 mg)。C(石油醚-丙酮=10∶1和5∶1，41 g)部分，用石油醚-乙酸乙酯(20∶1，10∶1，5∶1，2∶1和1∶1)梯度洗脫，從本樣品中分離得到化合物8。其余部分(20 g)先用氯仿-丙酮(80∶1，40∶1，20∶1，10∶1和5∶1)梯度洗脫，再使用葡聚糖凝膠Sephadex LH-20(氯仿∶甲醇=2∶3)對(duì)硅膠柱色譜不易分離的部分進(jìn)行再次分離，最后將所得篩選部分(2.8 mg)用氯仿-丙酮(40∶1)為洗脫劑制備薄層色譜純化，得到化合物3(4 mg)和化合物4(3 mg)。D(石油醚-丙酮=5∶1和2∶1，35 g)部分用氯仿-丙酮(80∶1，40∶1，20∶1，10∶1和5∶1)梯度洗脫，合并相似成分，分離后將得到的晶體部分重結(jié)晶，再使用葡聚糖凝膠(氯仿∶甲醇=2∶3)進(jìn)一步分離純化，從此部分中分離出化合物5(28 mg)。E(石油醚-丙酮=2∶1和1∶1，18 g)部分經(jīng)進(jìn)一步分離，未得到單體化合物。F(石油醚-丙酮=1∶1和甲醇，32 g)部分用氯仿-甲醇(40∶1，20∶1，10∶1和5∶1)梯度洗脫，合并相似成分，得到不溶于石油醚、氯仿、丙酮和甲醇等有機(jī)溶劑的白色無(wú)定形粉末，為化合物9。

3 結(jié)構(gòu)鑒定

3.1化合物1白色針狀結(jié)晶；mp 116～118 ℃；1H-NMR (400 MHz，CDCl3):δH3.25 (1H，m，H-3)，0.82(3H，s，H-18)，0.77(3H，s，H-19)，0.86(3H，d，J=7.2 Hz，H-21)，5.09(1H，t，J=6.4 Hz，H-24)，1.61(3H，s，H-26)，1.68(3H，s，H-27)，0.90(3H，s，H-28)，0.96(3H，s，H-29)，0.85(3H，s，H-30)；13C-NMR(100 MHz，CDCl3):δC35.0(C-1)，27.7(C-2)，78.6(C-3)，38.6(C-4)，50.5(C-5)，18.7(C-6)，27.5(C-7)，133.5(C-8)，133.1(C-9)，37.0(C-10)，21.2(C-11)，30.4(C-12)，43.7(13)，49.5(C-14)，29.5(C-15)，27.8(C-16)，49.7 (C-17)，15.2(C-18)，20.0(C-19)，36.0(C-20)，18.7 (C-21)，36.2(C-22)，24.6(C-23)，124.6(C-24)，130.2 (C-25)，17.6(C-26)，25.5(C-27)，27.8(C-28)，15.5 (C-29)，24.1(C-30)。將該化合物的波譜數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)[9]對(duì)照，確定化合物1為大戟二烯醇(euphol)。

3.2化合物2白色塊狀固體；1H-NMR(400 MHz，CDCl3)：δH1.65(1H，m，H-1α)，0.91(1H，m，H-1β)，1.57 (2H，m，H-2)，3.17(1H，dd，J=4.8，10.8 Hz，H-3)，0.71(1H，d，J=10.8 Hz，H-5)，1.44 (2H，m，H-6)，1.64(1H，m，H-7α)，1.31(1H，m，H-7β)，1.70(1H，m，H-8)，1.30(1H，m，H-9)，1.48(1H，m，H-11α)，1.24(H，m，H-11β)，1.24(1H，m，H-12α)，1.55(1H，m，H-12β)，1.45(1H，m，H-15α)，1.05(1H，m，H-15β)，1.86(1H，m，H-16α)，1.24(1H，m，H-16β)，1.73(1H，m，H-17)，0.94(3H，s，H-18)，0.82(3H，s，H-19)，1.11(3H，s，H-21)，1.54(1H，m，H-22)，2.08(2H，m，H-23)，2.22(1H，m，H-25)，1.03(6H，d，J=6.4 Hz，H-26和H-27)，0.95(3H，s，H-28)，0.74(3H，s，H-29)，0.86(3H，s，H-30)，4.76和4.69(2H，s，H-31)；13C-NMR(100 MHz，CDCl3):δC39.2(C-1)，27.3(C-2)，77.4(C-3)，39.2(C-4)，52.2(C-5)，18.3(C-6)，25.1(C-7)，43.3(C-8)，50.4(C-9)，36.5(C-10)，21.7(C-11)，32.8(C-12)，49.8(C-13)，39.3(C-14)，31.0(C-15)，27.2(C-16)，48.9(C-17)，17.7(C-18)，15.1(C-19)，76.5(C-20)，23.5(C-21)，40.5(C-22)，28.1(C-23)，156.9(C-24)，34.8(C-25)，21.9(C-26)，22.0(C-27)，28.1(C-28)，15.5(C-29)，15.7(C-30)，105.9(C-31)。通過(guò)與已發(fā)表文獻(xiàn)[10]對(duì)照該化合物的1H-NMR，13C-NMR和DEPT譜數(shù)據(jù)，確定化合物2為euphane-3β，20-dihydroxy-24-ene。

3.3化合物3白色針狀晶體；mp 205～206 ℃；1H-NMR (400 MHz，CDCl3):δH3.60(H，m，H-3)，5.61(H，brs，H-6)，3.86(H，brd，J=7.6 Hz，H-7)，0.68(3H，s，H-18)，0.80(3H，d，J=6.8 Hz，H-27)，0.82(3H，d，J=6.8 Hz，H-26)，0.84(3H，t，J=8.0 Hz，H-29)0.92(3H，d，J=6.4 Hz，H-21)，1.06(3H，s，H-19)；13C-NMR(100 MHz，CDCl3):δC37.0(C-1)，31.6(C-2)，71.5(C-3)，41.7 (C-4)，143.5(C-5)，125.5(C-6)，73.4(C-7)，40.9(C-8)，48.3(C-9)，36.5(C-10)，21.1(C-11)，39.6(C-12)，43.0(C-13)，55.4(C-14)，26.4(C-15)，28.6(C-16)，56.0(C-17)，11.8(C-18)，19.2(C-19)，36.1(C-20)，18.9(C-21)，34.0(C-22)，26.1(C-23)，45.9(C-24)，29.2(C-25)，19.0(C-26)，19.8(C-27)，23.1(C-28)，12.0(C-29)。將該化合物的1H-NMR和13C-NMR數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)[11]對(duì)照，從而確定化合物3為stigmast-5-ene-3β，7β-diol。

3.4化合物4白色針狀晶體；mp 210～211 ℃；1H-NMR (400 MHz，CDCl3):δH 3.59(H，m，H-3)，5.61(H，dd，J=4.2，1.6 Hz，H-6)，3.85(H，brd，J=7.6，H-7)，0.69(3H，s，H-18)，0.81(3H，d，J=6.8 Hz，H-27)，0.84(3H，d，J=6.8 Hz，H-26)，0.86(3H，t，J=8.0 Hz，H-29)0.93(3H，d，J=6.4 Hz，H-21)，1.00(3H，s，H-19)；13C-NMR(100 MHz，CDCl3):δC 37.0(C-1)，31.6(C-2)，71.3(C-3)，41.7(C-4)，146.2(C-5)，123.8(C-6)，65.4(C-7)，40.9(C-8)，48.3(C-9)，36.5(C-10)，21.1 (C-11)，39.6(C-12)，43.0(C-13)，55.4(C-14)，26.4 (C-15)，28.6(C-16)，56.0(C-17)，11.8(C-18)，19.2 (C-19)，36.1(C-20)，18.9(C-21)，34.0(C-22)，26.1 (C-23)，45.9(C-24)，29.2(C-25)，19.0(C-26)，19.8 (C-27)，23.1(C-28)，12.0(C-29)。1H-NMR中δH 3.86 (1H，d，J=7.8 Hz)處的氫質(zhì)子發(fā)生裂分，說(shuō)明H-7與Me-19之間存在高烯丙型偶合，則H-7是β-構(gòu)型，7-OH為α-構(gòu)型，這是與其同分異構(gòu)體化合物3的不同之處。通過(guò)與已發(fā)表文獻(xiàn)[11]對(duì)照該化合物的1H-NMR和13C-NMR譜數(shù)據(jù)，從而確定化合物4為stigmast-5-ene-3β，7α-diol。

3.5化合物5無(wú)色針狀晶體；1H-NMR(400 MHz，C5D5N)：δH6.28(H，d，J=8.4 Hz，H-2)，7.66(H，d，J=8.4 Hz，H-3)，7.09(H，s，H-5)，7.01(H，s，H-8)，3.74(3H，s，MeO-7)；13C-NMR(100 MHz，C5D5N):δC 161.8(C-1)，113.8(C-2)，143.6(C-3)，108.0(C-4)，150.1(C-5)，150.7(C-6)，103.6(C-7)，144.4(C-8)，111.9(C-9)，56.8(C-10)。將該化合物的1H-NMR和13C-NMR數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)[12]對(duì)照，從而確定化合物5為異東莨菪素(isoscopletin)。

3.6化合物6白色無(wú)定形粉末；mp 81～83 ℃；1H-NMR (300 MHz，CDCl3):δH7.60(1H，d，J=15.9 Hz，H-7)，7.04(1H，dd，J=7.8，1.5 Hz，H-6)，6.93(1H，d，J=1.5 Hz，H-2)，6.90(1H，d，J=7.2 Hz，H-5)，6.32(1H，d，J=15.9 Hz，H-8)，5.84(1H，s，OH-4)，4.18(2H，t，J=6.6 Hz，OCH2-1′)，3.93(3H，s，OCH3-3)，1.25(50H，brs，H-2′-27′)，0.88(3H，t，J=5.4 Hz，H-28′)；13C-NMR(75 MHz，CDCl3):δC127.0(C-1)，109.3(C-2)，146.7(C-3)，147.9(C-4)，114.7(C-5)，123.0(C-6)，144.6(C-7)，115.7(C-8)，174.3(C-9)，70.2(OMe-4)，63.3(C-1′)，34.1(C-2′)，31.9(C-3′)，28.7-29.6(C-4′-25′)，25.9(C-26′)，24.9(C-27′)，14.0(C-28′)。將該化合物的波譜數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)[13]對(duì)照，從而確定化合物6為阿魏酸二十八醇酯(octacosyl ferulate)。

3.7化合物7無(wú)色片狀結(jié)晶；mp 38～40 ℃；1H-NMR (400 MHz，CDCl3)：δH5.36(4H，m，H-9，10，12，13)，2.76(2H，dd，J=6.4 Hz，H-11)，2.35(2H，t，J=7.2 Hz，H-2)，2.04(4H，dt，J=6.4，6.4 Hz，H-8，14)，1.66(2H，m，H-3)，1.26～1.32(14H，m，H-4，5，6，7，15，16，17)，0.88 (3H，t，J=6.4 Hz，H-18)；13C-NMR(100 MHz，CDCl3):δC 179.2(C-1)，130.3(C-9)，127.5(C-10)，128.1(C-12)，130.1(C-13)，22.5-31.8(C-2～C-8，C-11，C-14～C-17)，14.1(C-18)。通過(guò)與已發(fā)表文獻(xiàn)[14]對(duì)照該化合物的1H-NMR和13C-NMR譜數(shù)據(jù)，從而確定化合物7為亞油酸(linoleic acid)。

3.8化合物8無(wú)色針狀晶體；mp 137～139 ℃；1H-NMR (400 MHz，CDCl3):δH5.35(1H，d，J=4.0 Hz，H-6)，3.52(1H，m，H-3)，1.01(3H，s，H-19)，0.94(3H，d，J=6.0 Hz，H-21)，0.86(3H，m，H-29)，0.82(3H，d，J=7.4 Hz，H-26)，0.78(3H，d，J=6.8 Hz，H-27)，0.68 (3H，s，H-18)。通過(guò)與已發(fā)表文獻(xiàn)[15]對(duì)照該化合物的1H-NMR和13C-NMR譜數(shù)據(jù)，從而確定化合物7為β-谷甾醇(sitosterol)。

3.9化合物9白色無(wú)定形粉末；mp 291～292 ℃。難溶于石油醚、氯仿、丙酮和甲醇等有機(jī)溶劑，易溶于吡啶。在紫外光燈254 nm處顯示無(wú)熒光，并用質(zhì)量分?jǐn)?shù)為5%硫酸-乙醇顯色液顯示為明顯的紫紅色。將該粉末與已知對(duì)照品在3種不同溶劑不同比例的展開劑中分別進(jìn)行TLC對(duì)比，其Rf值均相同，確定該化合物為β-胡蘿卜苷 (daucosterol)[16]。

4 討論

目前從大戟屬植物甘遂中分離得到的主要化學(xué)成分為三萜類、二萜類和甾體類化合物，其他成分包括香豆素、脂肪酸、蔗糖、鞣質(zhì)、棕櫚酸和樹脂等[17]。本實(shí)驗(yàn)對(duì)甘遂的化學(xué)成分進(jìn)行分離鑒定，從根部分離得到9個(gè)化合物，其中化合物stigmast-5-ene-3β，7β-diol和stigmast-5-ene-3β，7α-diol為首次從甘遂中分離得到，二者屬同分異構(gòu)體。本實(shí)驗(yàn)的研究豐富了甘遂的化學(xué)結(jié)構(gòu)類型，為大戟屬植物的深度研究開發(fā)提供了更多依據(jù)。