鯉皰疹病毒2型研究進(jìn)展

袁銳，陳靜，劉訓(xùn)猛，吳亞鋒，王晶晶，方蘋

（江蘇省水生動(dòng)物疫病預(yù)防控制中心，江蘇 南京 210036）

鯉皰疹病毒2型（Cyprinid herpesvirus 2，Cy-HV-2）是一種引起金魚和鯽Carassius auratush造血器官壞死病的高致病性病毒，嚴(yán)重危害金魚、鯽養(yǎng)殖業(yè)。該病毒自1992年在日本首次發(fā)現(xiàn)后[1]，迅速蔓延至亞洲、北美洲、大洋洲、歐洲，在我國鯽主養(yǎng)區(qū)大規(guī)模暴發(fā)流行。僅2012年就導(dǎo)致江蘇異育銀鯽發(fā)病面積約3萬hm2，發(fā)病區(qū)域死亡率在50%以上，嚴(yán)重地區(qū)達(dá)90%，部分養(yǎng)殖池塘絕收，造成嚴(yán)重的經(jīng)濟(jì)損失。本文簡要綜述了1992年CyHV-2首次發(fā)現(xiàn)以來的相關(guān)研究進(jìn)展，為CyHV-2的深入研究及有效防控策略提供參考。

1 病原學(xué)

1.1 病毒的分類及命名

該病毒最初在日本養(yǎng)殖的患造血器官壞死病、引起爆發(fā)性死亡的金魚體內(nèi)發(fā)現(xiàn)。當(dāng)時(shí)該病毒被命名為金魚造血器官壞死癥病毒[1]。該病毒是第二個(gè)分離自鯉科魚類的皰疹病毒，按照國際病毒系統(tǒng)分類委員會(huì)的系統(tǒng)命名規(guī)則，將該病毒命名為鯉皰疹病毒 2型（CyHV-2），與鯉痘瘡病毒（CyHV-1）、錦鯉皰疹病毒（CyHV-3）[2-4]同屬于皰疹病毒目、異樣皰疹病毒科、鯉科皰疹病毒屬，是我國危害極大的鯽造血器官壞死病的病原[5,6]。

1.2 病毒的特點(diǎn)

掃描電鏡觀察發(fā)現(xiàn)，CyHV-2的核衣殼呈六角形或球形，直徑大約115～117 nm；有囊膜的完整病毒粒子呈橢圓形，直徑170～220 nm[7]。病毒對碘脫氧尿苷（IUdR）、酸度和乙醚都比較敏感：在濃度10.4 mol/L IUdR和pH3時(shí)，病毒不能復(fù)制；pH11時(shí)，實(shí)驗(yàn)組病毒培養(yǎng)液的滴度與控制組相近；乙醚能夠影響病毒對宿主細(xì)胞的侵染能力，在乙醚存在情況下，病毒失去了對FHM細(xì)胞的感染力[1]。

1.3 基因信息

CyHV-2與同屬鯉科皰疹病毒屬的CyHV-1和CyHV-3一樣，均為雙鏈DNA病毒，其基因全長約為290 kbp，G基因和C基因所占比例為51.7%?；蚪M共編碼154個(gè)開放閱讀框（Open reading frame），其中有4個(gè)末端重復(fù)序列，整個(gè)基因組還有兩個(gè)無編碼功能的碎片基因[8]。

目前對CyHV-2的基因分型的報(bào)道較少。GenBank收錄的CyHV-2序列共有36條，包括從日本患病金魚中分離到的毒株，如DNA聚合酶基因、解旋酶基因、衣殼體間三聯(lián)蛋白基因等部分或完整基因，還有一些從美國的患病金魚分離的毒株，主要是CyHV-2 DNA聚合酶基因，亦有從我國患病鯽體內(nèi)甚至是洱海等環(huán)境中分離得到的毒株序列，如部分解旋酶基因等，其中提交的一個(gè)CyHV-2全基因序列是一種新的基因型。

李莉娟等[8]對從國內(nèi)患病鯽體內(nèi)分離的毒株（SY-C1）進(jìn)行了全基因測序，并與日本株（ST-J1）進(jìn)行了全面的比較分析。結(jié)果表明，盡管兩個(gè)毒株的序列具有98.8%的相似性，但是，SY-C1株型的單核苷酸突變、插入、缺失和重排等與ST-J1株存在明顯的變異，尤其是SY-C1株型在基因組的第32313個(gè)核苷酸位置上有一個(gè)523個(gè)核苷酸片段的缺失，這也是兩個(gè)毒株基因組的最顯著差異，TK（胸苷激酶）基因的明顯差異也可以用來區(qū)別兩種株型。因此，李莉娟等[8]認(rèn)為SY-C1明顯區(qū)別于ST-J1，是一株全新的CyHV-2基因型。目前除了這兩種株型外，世界范圍內(nèi)關(guān)于其他CyHV-2基因分型的報(bào)道還比較少，國內(nèi)目前分離的CyHV-2毒株都與SY-C1型有極高的同源性。

Davision等[9]應(yīng)用先進(jìn)的生物信息技術(shù)對三種鯉科皰疹病毒能夠編碼的蛋白進(jìn)行預(yù)測分析。結(jié)果顯示，CyHV-2基因組含有約150個(gè)編碼功能蛋白的開放閱讀框（ORFs），包含一些在三種鯉科皰疹病毒基因組內(nèi)共有的保守ORFs：如ORF33編碼DNA包裝末端酶亞基；ORF71編碼DNA解旋酶亞基；ORF72編碼病毒衣殼三聯(lián)體亞基；ORF78編碼衣殼成熟蛋白酶；ORF79編碼DNA聚合酶亞基等。其余的CyHV-2 ORFs中只有少數(shù)的功能得到確認(rèn)，如ORF25、ORF25C和ORF25D能夠編碼膜蛋白[10]；ORF104編碼類激酶蛋白[11]，該蛋白在病毒感染魚體過程中起重要的作用。其他的ORF功能還有待進(jìn)一步的研究。

2 流行病學(xué)

2.1 歷史和全球分布

1992年秋季和1993年春季日本愛知縣和奈良縣養(yǎng)殖的金魚連續(xù)爆發(fā)以CyHV-2為病原的病毒性疾病，死亡率近100%[1]。之后，CyHV-2迅速蔓延至全球多個(gè)國家和地區(qū)，遍布亞洲、北美、歐洲、大洋洲。據(jù)不完全統(tǒng)計(jì)，已有超過十一個(gè)國家和地區(qū)爆發(fā)該疾?。ū?）。自2012年CyHV-2在我國江蘇北部鯽主養(yǎng)區(qū)發(fā)現(xiàn)后，一直呈現(xiàn)蔓延趨勢，目前，江蘇、北京、武漢、廣州等地養(yǎng)殖異育銀鯽體內(nèi)均檢出CyHV-2[23,24]。除養(yǎng)殖鯽外，湖北洪湖、安徽巢湖的野生鯽也不同程度攜帶CyHV-2[25]，說明該病在我國已廣泛存在。

表1 CyHV-2全球的流行情況（不完全統(tǒng)計(jì)）Tab.1 The global prevalence of CyHV-2（incomplete statistics）

2.2 病毒宿主

2011年以前報(bào)道的CyHV-2感染病例均發(fā)生在金魚體內(nèi)，而Andor等[17]在匈牙利患病鯽體內(nèi)檢測到了CyHV-2，這是CyHV-2感染鯽的首次報(bào)道。隨后，中國、捷克等國[3,18,19]的患病鯽相繼檢測到了CyHV-2。迄今，已報(bào)道的CyHV-2的致病宿主包括金魚、鯽及其普通變種，尚無其他魚類及物種感染CyHV-2發(fā)病的報(bào)道。

Jung等[1]用腹腔注射研究錦鯉Cyprinus carpio感染CyHV-2的情況。結(jié)果表明，被注射的錦鯉既沒有死亡發(fā)生，也沒有病理變化，即CyHV-2不會(huì)感染錦鯉。Jeffrey等[16]將與金魚種系相近的魚類如鯉Cyprinus carpio、雅羅魚Leuciscus、丁鯛Tincatinca等和發(fā)病金魚在同一養(yǎng)殖系統(tǒng)里長期共養(yǎng)，結(jié)果這些魚均未被感染發(fā)病，即使在適宜溫度下也未發(fā)生感染。王璐[26]用CyHV-2感染羅非魚Oreochromis spp、團(tuán)頭魴 Megalobrama amblycephala、建鯉 Cyprinus carpiovar Jian、金魚、江都銀鯽（父本）和日本白鯽Carassius auratus cuvieri Temminck et Schlegel（母本）雜交一代、鯉（父本）和異育銀鯽（母本）雜交一代，研究CyHV-2感染宿主的范圍，結(jié)果發(fā)現(xiàn)，江都銀鯽（父本）和日本白鯽（母本）雜交一代、鯉（父本）和異育銀鯽（母本）雜交一代均對CyHV-2敏感，而羅非魚、團(tuán)頭魴、建鯉則無發(fā)病死亡現(xiàn)象。Ito等[27]的研究則證實(shí)，日本鯉亞科的魚類對CyHV-2的敏感性低于金魚，CyHV-2在各種鯽體內(nèi)的繁殖能力可能不同。徐跑等[28]研究表明，鯽鰓出血病主要危害池塘養(yǎng)殖中的異育銀鯽，而同池混養(yǎng)的鰱Hypophthalmichthys molitrix、鳙 Aristichthys nobilis、草魚Ctenopharyngodonidellus、鳊Parabramispekinensis等均未發(fā)病，在鰓出血病癥嚴(yán)重發(fā)生的池塘中，混養(yǎng)的鰱、鳙、草魚、鳊均未感染CyHV-2，而在患病的異育銀鯽中檢測到了CyHV-2。這些研究表明，雖然CyHV-2具有較高的傳染性，但感染譜較小，僅感染金魚、鯽及其普通變種。

2.3 流行季節(jié)和傳播方式

CyHV-2是一種高度感染、高致死率的病毒，感染魚出現(xiàn)癥狀后24～48h即死亡。其感染的異育銀鯽鰓出血病主要發(fā)生在春秋兩季，流行溫度范圍廣，從10～33℃均可發(fā)生，以15～27℃最為嚴(yán)重。水溫27℃以上時(shí)，發(fā)病死亡逐步減少，超過32℃時(shí)，沒有鯽死亡，然而夏季過后，水溫降低至25℃以下時(shí)，該病害又開始發(fā)生，直到水溫降到15℃以下時(shí)，病害才逐漸停止[18,24,28,29]。

推測CyHV-2的傳播途徑主要有垂直傳播和水平傳播兩種。1995年，臺灣金魚幼魚爆發(fā)造血器官壞死病，Chang等[12]根據(jù)發(fā)病史推測，病原來自引進(jìn)的金魚親本上。這是CyHV-2垂直傳播的首次報(bào)道。Goodwin等[30]在感染CyHV-2的親魚卵和幼苗中檢測到了該病毒，進(jìn)一步為病毒的垂直傳播提供了證據(jù)。Ding等[31]根據(jù)組織病理學(xué)推測，CyHV-2經(jīng)鰓進(jìn)入魚體，在鰓組織內(nèi)繁殖，誘導(dǎo)鰓組織的上皮細(xì)胞脫落和壞死，將病毒釋放到水體中而傳染。Minamoto等[32]應(yīng)用實(shí)時(shí)熒光定量PCR技術(shù)在中國云南洱海和滇池兩個(gè)自然湖泊水域檢測到了Cy-HV-2，最大濃度達(dá)1.3×105copies/L，證實(shí)了Cy-HV-2水傳播的可能性。

2.4 臨床癥狀和病理特征

感染CyHV-2的金魚和鯽主要臨床癥狀為行動(dòng)遲緩，停留于養(yǎng)殖池底部[2]，厭食、呼吸頻率增加[7]，眼球突出、腹部膨大[16]，肛門紅腫、偶見體表和鰭基部出血[20]。解剖發(fā)現(xiàn)，病魚鰓和肝胰臟蒼白，有腹水，脾腫大，脾腎表面伴有白色斑塊或結(jié)節(jié)，腸道無食[2]，腎和鰾點(diǎn)狀出血[33]。

組織病理觀察顯示，患病金魚的主要病理變化發(fā)生鰓、脾、腎：初級和次級鰓小片融合，前腎和后腎呈彌漫性壞死，脾臟多病灶部位壞死，在壞死區(qū)域可見明顯的核固縮和染色質(zhì)邊緣的核增大[33]。

林秀秀等[34]對患病異育銀鯽不同組織的病理觀察發(fā)現(xiàn)，頭腎和脾臟細(xì)胞溶解、免疫系統(tǒng)和造血系統(tǒng)受到嚴(yán)重破壞；中腎小球萎縮、腎小管上皮細(xì)胞脫落、腎間質(zhì)出現(xiàn)空泡、免疫細(xì)胞侵潤；腸道絨毛增生、絨毛和微絨毛長度顯著減少、粘膜下層顯著增厚；肝胰臟中肝細(xì)胞溶解、中央靜脈受損；鰓中毛細(xì)血管破壞、血管破裂或擴(kuò)大、紅細(xì)胞溢出、鰓小片基部細(xì)胞顯著減少。

方進(jìn)等[35]用PCR、光鏡和透射電鏡分析了患病鯽的組織病變及病毒分布。對已知鯉科皰疹病毒主要衣殼蛋白（MCP）基因的PCR擴(kuò)增可確定，CyHV-2存在于被感染魚的肝胰臟、脾、腎和頭腎組織中。對不同時(shí)序組織病理變化的比較表明，CyHV-2感染引起鯽不同程度病變，而鰓和頭腎的病理變化有顯著的時(shí)序相關(guān)性。在頭腎細(xì)胞中還觀察到大量Cy-HV-2顆粒，預(yù)示鯽頭腎是CyHV-2侵染和復(fù)制的主要靶器官。

有報(bào)道也顯示，感染CyHV-2的銀鯽其他部位有明顯的炎癥反應(yīng)，并伴隨有溶血、細(xì)胞核增大、核碎裂、上皮細(xì)胞脫落、空泡變性、病灶壞死等病理特征[18,31]，最顯著的病理變化在鰓、脾和腎組織中。Ding等[31]對組織壞死程度進(jìn)行了半定量的評估。結(jié)果顯示，感染的腎、脾、肝、鰓與健康的相比，有顯著的變化，尤以腎組織的病理變化最為明顯。

2.5 潛伏感染

皰疹病毒的特點(diǎn)之一是在初次感染后具有潛伏宿主的能力，即病毒在宿主內(nèi)存留遺傳物質(zhì)但不復(fù)制病毒顆粒，基因不表達(dá)或僅有少數(shù)潛伏相關(guān)基因表達(dá)；在一定的應(yīng)激條件下，如改變溫度等，潛伏的病毒可被誘導(dǎo)復(fù)制，釋放病毒粒子，導(dǎo)致宿主出現(xiàn)疾病的臨床癥狀。

鯉皰疹病毒2型也存在潛伏感染。對18個(gè)漁場中的健康金魚、懷卵魚、魚卵、魚苗和病魚等進(jìn)行了定量PCR檢測，在14個(gè)場的健康魚中檢出Cy-HV-2陽性；118個(gè)養(yǎng)殖池的懷卵魚樣品中有42個(gè)檢出陽性，許多魚苗中也檢出CyHV-2[30]。而對這些攜帶病毒的健康魚進(jìn)行10～22℃的溫度刺激時(shí)，病毒的DNA拷貝數(shù)明顯的增長，即當(dāng)水溫合適時(shí)，攜帶病毒的健康魚將伴隨病毒的大量增殖而發(fā)病。

3 診斷與檢測

3.1 細(xì)胞培養(yǎng)分離

細(xì)胞分離培養(yǎng)技術(shù)是魚類病毒病最準(zhǔn)確的診斷方法之一，關(guān)鍵是已建立的細(xì)胞系。目前可用于分離CyHV-2的敏感細(xì)胞系有：錦鯉鰭細(xì)胞系（koi-fin cell lines,KF-1）[1]、金魚鰭細(xì)胞系（goldfish fin cell lines，GFF）[36]等。但是，這兩種細(xì)胞系在分離CyHV-2的過程中還存在一些問題，如錦鯉鰭細(xì)胞系只能傳代5次，超過5次的傳代，CyHV-2就不敏感；金魚鰭細(xì)胞系雖然不存在隨傳代次數(shù)的增多，敏感性降低的問題，但是其獲得的病毒滴度始終較低（102.0TCID50/mL）。其他常見的細(xì)胞系如草魚性腺細(xì)胞系（ovary cells of grass carp，CO）、鯉上皮瘤細(xì)胞系（epithelioma papulosum cyprinid，EPC） 和胖頭Pimephales promelas肌肉細(xì)胞系（muscle cells of fathead minnow，F(xiàn)HM）均對CyHV-2不敏感，不能有效分離該病毒。近來，建立一種新的細(xì)胞系（鯽腦細(xì)胞系，GiCB）[37]，可用于該病毒的分離、傳代，可有效傳代達(dá)50次以上，病毒滴度可達(dá)107.5±0.37TCID50/mL。當(dāng)然，細(xì)胞一次傳代通常需要一周，影響疾病診斷的時(shí)效性，對于病原的快速確診，細(xì)胞分離培養(yǎng)還不是最好的選擇。

3.2 分子生物學(xué)檢測技術(shù)

目前診斷CyHV-2病原的最有效和普遍采用的方法是PCR擴(kuò)增技術(shù)，包括普通PCR技術(shù)、雙重PCR檢測技術(shù)、巢式PCR檢測技術(shù)、實(shí)時(shí)熒光定量PCR檢測技術(shù)和LAMP檢測技術(shù)等。Waltzek等[4]基于CyHV-2的解旋酶基因建立了常規(guī)PCR。該方法具有較高的特異性和敏感性，對CyHV-1、CyHV-3和IcHV-1基因組DNA無擴(kuò)增。針對構(gòu)建的質(zhì)粒和患病金魚腎脾組織DNA抽提液的分析靈敏度分別78copies和84 copies/μg DNA，能有效檢測不同地區(qū)（日本、加州、俄亥俄州和賓夕法尼亞州）的Cy-HV-2分離株。徐進(jìn)等[24]亦針對CyHV-2的解旋酶基因建立了巢式PCR檢測方法，并成功鑒定了一株CyHV-2病毒，命名為鯉皰疹病毒2型武漢株（Cy-HV-2-WH）。以鯉科皰疹病毒2型的DNA聚合酶基因?yàn)槟康幕蚪⒌钠胀≒CR可以有效檢出病原[16,18]，從病魚的鰓、腎、脾等組織提取的核酸可被PCR擴(kuò)增出362bp特異性產(chǎn)物。羅丹等[38]利用Cy-HV-2三聯(lián)體蛋白基因的兩段保守序列設(shè)計(jì)特異性引物，通過多次的PCR體系優(yōu)化，建立了穩(wěn)定的CyHV-2雙重PCR檢測技術(shù)，為檢測鯽體內(nèi)的Cy-HV-2提供了新的檢測手段。

隨著檢測要求的不斷提高，PCR檢測技術(shù)不斷優(yōu)化以提高靈敏度和特異性等。其中，Goodwin等[39]基于該病毒的聚合酶基因設(shè)計(jì)引物和探針，建立了實(shí)時(shí)定量Taqman PCR方法。該方法能夠更為靈敏地檢測到CyHV-2，靈敏度達(dá)到了1個(gè)病毒基因拷貝數(shù)。該方法不僅能從具臨床癥狀的魚中檢出Cy-HV-2，還能檢測診斷看似健康的1齡魚種，甚至3～5齡的親魚。近年來CyHV-2導(dǎo)致的疫情頻頻發(fā)生，對養(yǎng)殖業(yè)造成嚴(yán)重經(jīng)濟(jì)損失，日韓等國家也要求我國出口的金魚、鯽出具CyHV-2的檢疫證書，因此國內(nèi)一些檢驗(yàn)檢疫機(jī)構(gòu)也紛紛建立快速敏感的實(shí)時(shí)熒光PCR方法。如徐曄等[40]設(shè)計(jì)的熒光定量檢測方法的靈敏度為5copies/μL，遠(yuǎn)高于普通PCR的 5×102copies/μL；于力[41]選取 CyHV-2 序列基因的保守區(qū)域MCP基因ORF92設(shè)計(jì)引物，亦建立了靈敏度高、特異性和重復(fù)性好的熒光定量PCR檢測方法。該方法不僅應(yīng)用于魚體病原的檢測，Minamoto等[32]還利用該檢測方法在中國云南的洱海和滇池自然湖泊成功檢測到了CyHV-2。

環(huán)介導(dǎo)等溫?cái)U(kuò)增技術(shù)（loop-mediated isothermal amplification，LAMP）是一種近年來廣泛應(yīng)用于細(xì)菌、病毒等病原體的新式恒溫核酸擴(kuò)增技術(shù)，比傳統(tǒng)的PCR技術(shù)時(shí)間較短，適合現(xiàn)場診斷；特異性強(qiáng)，靈敏度高，不需要特殊的儀器設(shè)備，具有良好的應(yīng)用前景。He等[42]基于CyHV-2末端酶基因設(shè)計(jì)引物，首次建立了可以快速檢測CyHV-2的LAMP方法，整個(gè)擴(kuò)增過程只需30min，結(jié)果更加直觀；與28個(gè)其他常見魚類病毒病或細(xì)菌病的檢測無交叉污染。隨后又相繼有針對不同的目的基因（衣殼體三聯(lián)蛋白[43]、解旋酶基因[44,45]）的快速檢測CyHV-2的LAMP方法。結(jié)果均證明，LAMP檢測的靈敏度明顯高于常規(guī)PCR方法，達(dá)到了熒光定量PCR檢測的靈敏度，在產(chǎn)物中加入SYBR Green I，根據(jù)其顏色變化來判定結(jié)果，使得結(jié)果更加直觀，所需時(shí)間更短，具有應(yīng)用空間。

3.3 其他檢測技術(shù)

除了以上常用檢測技術(shù)外，研究人員還在嘗試其他一些更快速，更準(zhǔn)確檢測CyHV-2的手段。郝中香等[46]根據(jù)CyHV-2ORF6基因序列設(shè)計(jì)并合成ORF6基因特異性引物及TaqMan探針，建立了檢測Cy-HV-2的微滴式數(shù)字PCR（ddPCR）方法。其檢測靈敏度甚至比QPCR還要高5倍，更靈敏，特異性更強(qiáng)，能快速檢測極低含量的病毒，可精確、可靠檢測Cy-HV-2，以滿足CyHV-2特性研究和感染診斷的需要。

免疫學(xué)診斷技術(shù)是一種穩(wěn)定性極強(qiáng)的診斷方法，廣泛應(yīng)用于各類病毒檢測?？咨圃频萚47,48]應(yīng)用CyHV-2編碼的ORF72基因所編碼的衣殼蛋白作為捕獲抗原，通過識別感染病毒魚體中的相應(yīng)抗體，首次建立了針對CyHV-2的免疫學(xué)診斷方法。該方法用純化的衣殼72蛋白為檢測抗原，鯽血清作一抗，免抗鯽IgM多克隆抗體作為二抗，酶表羊抗兔作為三抗鑒定鯽是否存在CyHV-2特異性抗體，可有效確診鯽是否感染CyHV-2，為商品化免疫學(xué)檢測技術(shù)奠定了基礎(chǔ)。

其他檢測技術(shù)也廣泛應(yīng)用于CyHV-2的檢測，如電鏡觀察[18]、原位雜交技術(shù)[31]等。檢測方法的多樣性為有效開展疾病防控提供了廣闊的思路。

4 防控措施

4.1 苗種檢疫

苗種檢疫可以有效預(yù)防各類水生動(dòng)物疾病。鯉皰疹病毒2型存在潛伏感染，成魚、魚苗、魚卵均可感染[30]，及時(shí)對引進(jìn)的苗種進(jìn)行病毒檢測，可有效預(yù)防苗種帶毒，從源頭控制病毒的感染與傳播。

4.2 免疫增強(qiáng)劑

目前還缺乏有效治療魚類病毒病的藥物，在飼料中添加免疫增強(qiáng)劑以提高魚體免疫力，不失為一種有效的預(yù)防措施。陳昌福等[49,50]在飼料中拌入酵母多糖，在疾病流行高峰前連續(xù)投喂28d，刺激了異育銀鯽的幾種免疫相關(guān)物質(zhì)的活性，降低了魚的感染率，顯著提高了成活率。

4.3 改善養(yǎng)殖模式

疾病的發(fā)生與發(fā)展往往與養(yǎng)殖模式密切相關(guān)。長期的單一品種養(yǎng)殖模式的優(yōu)點(diǎn)是比較適合生產(chǎn)管理、種苗的選購、飼料的使用、成魚的銷售等日常管理都方便，易形成產(chǎn)業(yè)服務(wù)鏈，但長期單養(yǎng)破壞了養(yǎng)殖水域的生物多樣性，病原間的制約關(guān)系較為薄弱，易使病原微生物擴(kuò)散轉(zhuǎn)播，造成疾病的爆發(fā)流行。改單養(yǎng)異育銀鯽為多品種混養(yǎng)，改善養(yǎng)殖環(huán)境，減少疾病風(fēng)險(xiǎn)有可能避免疾病造成的經(jīng)濟(jì)損失，也能在一定程度上提高養(yǎng)殖經(jīng)濟(jì)效益。

4.4 疫苗

疫苗能增強(qiáng)動(dòng)物的免疫力，預(yù)防相關(guān)疾病的發(fā)生，減少各類藥物的使用，降低養(yǎng)殖成本，解決各種藥物殘留帶來的食品安全和環(huán)境污染等問題，廣泛應(yīng)用于水產(chǎn)病毒疾病防治。各類水生動(dòng)物疾病的疫苗研究也普遍開展，如草魚出血病相關(guān)疫苗[51]、嗜水氣單胞菌疫苗[52]、鰻弧菌減毒活疫苗[53]、溶藻弧菌疫苗[54]、羅非魚海豚鏈球菌疫苗[55]、創(chuàng)傷弧菌疫苗[56]等。目前已有草魚出血病細(xì)胞滅活疫苗和嗜水氣單胞菌病滅活疫苗獲得國家新獸藥證書的批準(zhǔn)。

鯽皰疹病毒病的病原最先在金魚體內(nèi)發(fā)現(xiàn)，日本學(xué)者[57]嘗試用金魚鰭細(xì)胞系富集病毒，收集病毒懸液，用福爾馬林制成滅活疫苗進(jìn)行防治研究。結(jié)果表明，該方法對金魚造血器官壞死病具有明顯的防治效果。Ito和Maeno[58]收集在金魚鰭細(xì)胞系中擴(kuò)增的CyHV-2病毒上清液制備疫苗，腹腔注射，進(jìn)一步研究了腹腔注射疫苗的有效期及免疫效果。結(jié)果表明，注射疫苗感染CyHV-2金魚的存活率顯著高于未注射疫苗的病魚，免疫有效期可持續(xù)8周以上，而在首次注射疫苗4周后，再注射一次疫苗，可進(jìn)一步提升免疫效果，延長免疫有效期。

自2012年我國爆發(fā)鯽皰疹病毒病以來，我國廣泛開展相關(guān)疫苗研究工作。Zhou等[10]選取三種Cy-HV-2膜蛋白基因（ORF25、ORF25C、ORF25D）重組到畢氏酵母中，表達(dá)出三種重組蛋白（tORF25、tORF-25C、tORF25D）。將這三種蛋白純化后，肌肉注射到鯽體內(nèi)，其免疫保護(hù)率最高可達(dá)75%，證明該重組蛋白具備預(yù)防鯽皰疹病毒病的潛力。Zhang等[59]應(yīng)用β—丙內(nèi)酯制備滅活CyHV-2疫苗對鯽進(jìn)行免疫試驗(yàn)。結(jié)果表明，受免鯽體內(nèi)各項(xiàng)免疫活性物質(zhì)含量顯著上升，感染CyHV-2后的存活率達(dá)到了71.4%，具有較好的應(yīng)用前景。廖紅等[60]用不同濃度原核表達(dá)的CyHV-2 ORF5重組蛋白免疫異育銀鯽，免疫保護(hù)率最高可達(dá)35%。

目前疫苗研究還停留在實(shí)驗(yàn)室階段，離實(shí)際應(yīng)用還有較遠(yuǎn)的距離。但是，疫苗作為控制病毒病的最有效手段，具有廣闊的應(yīng)用前景，未來有望通過滅活疫苗、減毒重組疫苗、基因工程疫苗等來達(dá)到防控CyHV-2的目的。

5 展望

由CyHV-2引起的鯽和金魚造血器官壞死病在世界范圍內(nèi)不斷的流行和蔓延，嚴(yán)重危害全球多個(gè)國家的金魚及鯽養(yǎng)殖業(yè)。盡管全世界已從臨床診斷、流行病學(xué)、基因組學(xué)、防控手段等對該病展開了一定程度的研究，但關(guān)于防控方面的研究還不夠深入，CyHV-2仍未能得到有效控制。隨著國際貿(mào)易的頻繁往來，加劇了CyHV-2在世界范圍內(nèi)的傳播，還需加強(qiáng)CyHV-2的致病機(jī)理、傳播機(jī)制、病毒基因組、病毒宿主相互作用等基礎(chǔ)研究，為防控Cy-HV-2提供有效的防控技術(shù)手段，遏制疾病的傳播擴(kuò)散；同時(shí)還需加強(qiáng)國際交流與合作，互相借鑒有效的防治措施，最終有效控制該疾病。