中獸藥散劑的顯微鑒別技術(shù)及應用

梁小菊，李小娜

(鄭州市獸藥飼料監(jiān)察所，河南，鄭州 450052)

中獸藥是在傳統(tǒng)中獸醫(yī)藥學理論指導下，用于防治動物疾病的藥物。主要包括植物藥、動物藥、礦物藥三大類[1]。中獸藥散劑的鑒別主要包括外觀性狀鑒別、薄層色譜鑒別和顯微鑒別方法。借助顯微鏡進行觀察統(tǒng)稱為“顯微鑒別法”[1]，顯微鑒別法以操作簡單、耗時短、成本低、不需要前處理等優(yōu)點備受歡迎。本文主要對顯微鑒別的定義、制片方法、顯微鑒別技巧、難點和應用中存在的問題進行分析討論。

1 定義

中獸藥顯微鑒別法系指用顯微鏡對藥材(飲片)切片、粉末、解離組織或表面制片及含藥材粉末的制劑中飲片的組織、細胞或內(nèi)含物等特征進行鑒別的一種方法，又稱為組織粉末鑒別[2]。它是利用植物或動物細胞學、組織學、解剖學及礦物晶體學等知識和方法，在顯微鏡下發(fā)現(xiàn)重要的結(jié)構(gòu)特性、細胞或結(jié)晶形狀及各種內(nèi)含物，作為鑒別的依據(jù)。

2 制片方法

中獸藥顯微鑒別制片方法有橫切片或縱切片制片法、粉末制片法、解離組織制片法、表面制片法、花粉粒與孢子制片法、磨皮制片法、中成藥制片法。實際工作中最常用的是粉末制片法[3]。

2.1 試液

水合氯醛試液、稀甘油、乙醇、5%KOH試液、甘油醋酸、蘇丹Ⅲ試液、間苯三酚試液、碘試液等[1]。

2.2 制片步驟

中藥材需經(jīng)粉碎、過篩后制片,中藥散劑直接制片,片劑經(jīng)研細后制片,含有揮發(fā)性成分的制劑微量升華后裝片。

粉末制片方法為，取樣品粉末少許，置于潔凈的載玻片上，滴加1～2滴水合氯醛液，在酒精燈上來回加熱透化，并時時用解剖針攪拌。等水合氯醛未完全蒸干時，再滴加1～2滴，加熱，如此反復2～3次，即可除去細胞內(nèi)含物，但勿使粉末烤焦[4]，置顯微鏡下觀察。此法適用于大部分中獸藥散劑。

有的中獸藥需要用稀甘油制片，主要適用于易溶于水合氯醛的樣品。取樣品粉末少許，置于潔凈的載玻片上，滴加1～2滴稀甘油，用解剖針攪拌，置顯微鏡下觀察。如茯苓、茯苓皮。有的中藥材，在藥典中明確規(guī)定用乙醇裝片，方法同稀甘油制片法。常用于有特殊規(guī)定的中藥材，比如大承氣散中的玄明粉。

2.3 注意事項

所用的蓋玻片和載玻片必須保持潔凈。進行顯微制片時，每片粉末取用量宜少不宜多。為使觀察全面，可多制片。如取量多，顯微特征重疊輪廓不清，反而費時，不易得出準確結(jié)論。顯微鏡觀察時應先低倍再高倍。

3 觀察與技巧

一般顯微鑒別需觀察2～5個玻片標本，根據(jù)能否觀察到藥材的顯微特征來判斷藥材的真實性。為提高顯微鑒別的準確性，可與對照藥材比對。初學顯微鑒別時可以購買原藥材，粉碎過篩后制片觀察，找出典型特征后，認準并牢記，這樣在實際操作中，可快速找到目標藥材。根據(jù)藥材檢驗時的顯微特征可劃分成25類，分別有花粉粒、石細胞、淀粉粒、方晶、簇晶、針晶、柱晶、砂晶、靛藍結(jié)晶、薄壁細胞、纖維束、紋孔、木栓細胞、腺毛、非腺毛、腺鱗、油管油胞、導管、乳管、鐘乳體、硅質(zhì)塊、菊糖、氣孔、保衛(wèi)細胞 、菌絲等[5]。

在實際工作中常常遇到一類藥材的結(jié)構(gòu)很相似，只有多觀察多比較，找到其獨特的結(jié)構(gòu)，才能鑒別出相應的中藥。一般的中藥材,如仙茅、知母和山藥都是針晶，均在10倍下觀察，但他們的長短不一樣；白術(shù)和蒼術(shù)同樣也是針晶，都需要在40倍下觀察，但顏色不一樣；同樣有簇晶形態(tài)的大黃、白芍、何首烏、馬齒莧、辣蓼、牡丹皮，可以通過簇晶的大小、排列順序、薄壁組織的顏色來判斷和區(qū)分；金銀花、洋金花、紅花、菊花都有花粉粒，可以通過觀察其形態(tài)、大小、萌發(fā)孔或萌發(fā)溝狀況、外壁構(gòu)造及雕紋來區(qū)分[6]；屬于腺毛、非腺毛、腺鱗類的艾葉、白頭翁、藿香、益母草、茵陳、淫羊藿、枇杷葉，可以通過腺毛的形態(tài)、顏色、大小、有單細胞還是幾個細胞組成以及分泌物等來判斷；屬于淀粉粒類的浙貝母、炮 姜(干姜)可以觀察類型、形態(tài)、大小、臍點、層紋、是否糊化等來判斷[7]。

4 難點

對中獸藥散劑進行顯微鑒別時，一般需根據(jù)處方，對各組成生藥粉末特征分析比較，排除某些類似的細胞組織及后含物等的干擾和影響，選取各藥在該成藥中具專屬性的顯微特征作為鑒別依據(jù)。

2015年版《中國獸藥典》二部中，成方散劑顯微鑒別項下只描述各種藥材粉末的顯微特征，并沒有標明描述的是哪一種藥的特征,所以在檢驗工作中往往要花時間查閱和核對資料才能確定所描述的特征是哪一種藥材[8]。建議判斷不清的時候，參照《中華人民共和國藥典》2010版一部，每個成方制劑項下每一味藥都有對應的很詳盡的描述，如《四君子丸》[9]鑒別項下：不規(guī)則分枝狀團塊無色，遇水合氯醛溶化；菌絲無色或淡棕色，直徑4～6μm(茯苓)，標注清楚了是哪味藥。

不同成方散劑的同一種藥材，如甘草、陳皮、當歸等，一般采用相同的鑒別特征，統(tǒng)一描述。但在有些散劑中，由于受其他藥味的干擾，難以統(tǒng)一者，也可選用另一特征。如黨參，在四君子散、傷力散中，選用聯(lián)結(jié)乳管特征，而在小柴胡散、白術(shù)散、健雞散中，則選用石細胞的特征描述。

有的中藥同時有淀粉粒、纖維束、導管、方晶等結(jié)構(gòu)，比如板藍根，容易誤認為是其他藥材，這就需要經(jīng)驗和專業(yè)的知識來判斷。荊防敗毒散[2]里面同時有油管、油細胞類的柴胡、防風，《中國善藥典》上是這樣描述防風的：油管含金黃色分泌物，直徑17～60μm；而柴胡的描述為：油管含淡黃色或黃棕色條狀分泌物，直徑8～25μm。這就需要結(jié)合油管的形狀及油管的顏色和長度來進行判斷，因為金黃色和淡黃色在視野里不是太好區(qū)分，油管分泌物的直徑有重合的部分，給鑒別工作增加了難度，這種情況下只有多制片多觀察，確定其典型結(jié)構(gòu)。另外白術(shù)和蒼術(shù)也是工作中較難鑒別的，需要先在10倍鏡下觀察，在40倍鏡下面確認，有時看的快，或者取樣量小都會找不到,這需要耐心細致的工作。

5 存在問題

隨著有關(guān)部門對中獸藥顯微鑒別工作的日益重視，目前各省轄市質(zhì)檢中心基本都能開展此項工作，只是熟練程度有一定的差別，熟練掌握該技術(shù)的專業(yè)人員相對較少。部分獸藥企業(yè)也開展了此項目，但存在容易的藥材會識別，但難度高的藥材看不準的現(xiàn)象。中藥顯微鑒別技術(shù)看著步驟很簡單，但在實際操作和觀察中也有很多小細節(jié)，且只能定性，不能定量。有的企業(yè)也是按照藥典要求添加，但是實際添加多少，無法定量[10]；還有的情況是為了提高藥效，加入該處方外的中藥和化藥，這些在顯微鑒別時也能發(fā)現(xiàn)；還有未嚴格按照處方的配比添加。本項工作對人員的業(yè)務素質(zhì)要求也是比較高的，在進行顯微鑒別時，須認真觀察各類組織的結(jié)構(gòu)特點和細胞、內(nèi)含物的形狀特征以及礦物晶體、碎片的特征，測量其大小。細胞和內(nèi)含物的直徑、長短，也是顯微鑒別中藥的重要依據(jù)之一。需要從更多的實踐中來積累經(jīng)驗，多觀察中獸藥散劑的成方制劑，從易到難，逐步積累，從而達到一定的熟練程度。