藍靛果、枸杞-菊花復合壓片糖果制備工藝及抗氧化性測定

李雨婷，韓松博，岳子香，謝珂羽，宋井琪，王冬輝，王金玲

（1.吉林農(nóng)業(yè)大學，吉林 長春 130118；2.國藥一心制藥有限公司，吉林 長春 130031）

藍靛果別稱藍靛果忍冬、黑瞎子果、羊奶子、山茄子等。在植物分類學上屬忍冬科忍冬屬[1-3]，藍黑色漿果果實。藍靛果中含大量的維生素，如VB、VPP、VC等，其中VPP 含量遠超于其他水果；藍靛果含有豐富的營養(yǎng)元素，如鈣、鐵、鋅、硒；藍靛果含有豐富的氨基酸，包括7種人體必需氨基酸[4]；黃酮類成分含量也很高[5]，有很高的營養(yǎng)保健作用。枸杞是一種食藥用價值豐富的植物，含有大量胡蘿卜素、多種微量元素及黃酮物質(zhì)，大量研究證明，枸杞多糖可以保肝護肝，同時還可以明目補腎、降血糖、降血脂，是市面上最受歡迎的“神仙果”[6-7]。菊花同樣含有豐富的微量元素、氨基酸及黃酮物質(zhì)，其功效為清風散熱、平肝明目、解毒去熱[8]。

本試驗按照中藥復方學的原理[9]，在我國傳統(tǒng)中藥配方的基礎(chǔ)上[10]，使用高壓脈沖電場提取法，將藍靛果醇提物、枸杞-菊花水提物混合制備成壓片糖果，并對其抗氧化性進行檢測，旨在調(diào)配成一種抗氧化、降壓明目藍靛果菊花枸杞復合壓片糖果[11]。

1 材料和方法

1.1 材料

藍靛果，吉林省長白山采購；枸杞、菊花（藥店采購）；白砂糖、檸檬酸、檸檬酸鈉、VC、β-胡蘿卜素、VB1、?；撬?、麥芽糊精、甜菊糖苷、硬脂酸鎂均為市售品。

1.2 儀器與設(shè)備

混合機（浙江迦南科技有限公司）、壓片機（北京國藥龍立）。

1.3 工藝流程

1.3.1 藍靛果乙醇提取物（LCL）工藝流程 藍靛果→挑選清洗、搗碎→高壓脈沖電場提取→真空濃縮→真空減壓干燥→粉碎→藍靛果提取物；提取方法：首先去除碎渣與未成熟的原料，選取新鮮藍靛果為原料，用水清洗、搗碎后，按照液料比1∶10 加入65%乙醇混勻后，將樣液打入高壓脈沖電場提取裝置中，設(shè)置電場強度15 kV/cm，脈沖數(shù)8個進行提取，所得提取液過濾后減壓濃縮至相對密度為1.10～1.15，減壓真空干燥至恒重。

1.3.2 枸杞-菊花水提取物工藝流程 枸杞、菊花→挑選清洗、搗碎→高壓脈沖電場提取→真空濃縮→真空減壓干燥→粉碎→枸杞-菊花混合提取物。提取方法：選取優(yōu)質(zhì)枸杞和菊花為原料，用流水洗凈、搗碎后，按照液料比1∶8 加入超純水混勻，將待測樣品加入高壓脈沖電場提取裝置中，設(shè)置電場強度15 kV/cm，脈沖數(shù)8個進行提取，所得提取液過濾后減壓濃縮至相對密度為1.10～1.15，減壓真空干燥至恒重。

1.4 配方工藝篩選與優(yōu)化

以藍靛果乙醇提取物、枸杞-菊花水提取物為原料，以硬脂酸鎂為潤滑劑，以白砂糖、麥芽糊精為定型劑，采用粉末直接壓片工藝制得具有保健功能的藍靛果、枸杞-菊花復合壓片糖果。

1.4.1 藍靛果、枸杞、菊花最佳混合比例的確定 在單因素試驗的基礎(chǔ)上對藍靛果、枸杞、菊花用量進行了多因素正交試驗，確定3種原料的最佳混合配方，具體因素水平見表1?；旌咸崛∥镉?0 名來自全國各地大學生依據(jù)色澤（20%）、氣味（30%）、口感（30%）、組織狀態(tài)（20%）等感官綜合評定，評分標準（按百分制）見表2。

表1 藍靛果、枸杞、菊花配方優(yōu)化L9（33）正交試驗因素水平

表2 混合物感官評價標準

1.4.2 輔料配方篩選與優(yōu)化 粉末直接壓片，對輔料的要求很高，應(yīng)選擇黏合性和可壓性較好的輔料，這樣有利于生產(chǎn)操作和成品的質(zhì)量穩(wěn)定。通過查閱文獻白砂糖有很好的可壓性，而糊精具有較好的黏合性，且成本低廉。本試驗以優(yōu)化得到的藍靛果、枸杞-菊花混粉為原料，以白砂糖和麥芽糊精為輔料，以壓片糖果的組織形態(tài)、口感、片重差異為考察指標，采用正交試驗設(shè)計，優(yōu)化篩選出最佳的配方比例，因素水平見表3，感官評價同表2。

表3 輔料配方優(yōu)化L9（33）正交試驗因素水平

1.4.3 食品添加劑用量的選擇 在最佳原輔料配比的基礎(chǔ)上，設(shè)計不同的添加比例（表4）。以口感、色澤為評價指標，對藍靛果枸杞壓片糖果片中食品添加劑的用量進行篩選。

表4 食品添加劑用量篩選%

1.4.4 混合時間的篩選 采用優(yōu)化得到的最佳配方，按配方量0.2%加入硬脂酸鎂，以混粉顏色的均勻性為考察指標，設(shè)定混合機轉(zhuǎn)速為12 r/min，分別于混合5，10，15 min 上、中、下3 層進行取樣，考察不同混合時間對混粉顏色均勻度的影響。上、中、下3 層顏色均一無色差即確定為最佳混合時間。同時采用最佳混合工藝，連續(xù)混合3 批，并對混粉進行壓片。

1.5 藍靛果、枸杞-菊花壓片抗氧化性測定

1.5.1 還原能力測定 取LCL 醇提取物、（壓片糖果）LCL 醇+枸杞菊花水提取物、VC 粉末備用，分別稱取0.001，0.002，0.004，0.006，0.008，0.010 g 上述3個樣品，3 份重復，溶于10 mL的二甲基亞砜。得樣品濃度梯度為0.1，0.2，0.4，0.6，1.0mg/mL。取1 mL待測樣液，加入pH值為6.6的磷酸緩沖液和1%鐵氰化鉀溶液各1 mL 混勻，50℃水浴20 min，反應(yīng)完成后加入10%三氯乙酸1 mL 混勻，靜止后精密吸取上清液2 mL，精密加入超純水2 mL[12]與200 μL 0.1%三氯化鐵后靜置10 min，于700 nm 測OD值，以二甲基亞砜為空白，去離子水為對照，重復3次，取均值[13]。

1.5.2 DPPH 自由基清除能力測定 用DMSO將LCL 醇提取物、（壓片糖果）LCL 醇+枸杞菊花水提取物、VC 粉末分別配成濃度為0.1，0.2，0.4，0.6，0.8，1.0mg/mL的待測樣液，取2 mL 樣液于試管中，加入0.2 mmol/L DPPH-無水乙醇溶液1 mL[14]，混勻，室溫暗處放10 min ，517 nm處測其吸光值，每樣重復3次，取均值。并按下列公式計算DPPH 自由基去除率。

式中：AS為2 mL 樣液+1 mL DPPH-無水乙醇溶液的樣品OD值；ASB為2 mL 樣液+1 mL 無水乙醇溶液的樣品對照組OD值；AC為2 mL DMSO+1 mL DPPH-無水乙醇溶液的空白組OD值；ACB為2 mL DMSO+1 mL 無水乙醇溶液的空白對照組OD值。

1.5.3 ABTS自由基清除能力測定 ABTS 儲備液：精密吸取等體積的濃度為7.00，2.45 mmol/L的ABTS 溶液、過硫酸鉀溶液，混合避光靜置過夜。ABTS 儲備液現(xiàn)用現(xiàn)稀釋47 倍，即OD734為（0.70±0.02）[15]。用DMSO將LCL 醇提取物、（壓片糖果）LCL 醇+枸杞菊花水提取物、VC 粉末配制成濃度梯度為0.05，0.10，0.15，0.20，0.25，0.30mg/mL的待測樣液，將1 mL ABTS 工作液與500 μL 樣品振蕩混合后避光放置5 min。測定OD734[16]，每樣重復3次，取均值，并按下列公式計算ABTS自由基清除率：

式中：AS為1 mL 樣品液+2 mL ABTS 工作液的樣品OD值；ASB為1mL 樣品+2 mL 無水乙醇溶液的樣品對照組OD值；AC為1 mL DMSO+2 mL ABTS工作液的空白組OD值；ACB為1 mL DMSO+2 mL無水乙醇溶液的空白對照組OD值。

1.5.4 羥自由基清除率測定 用DMSO將LCL 醇提取物、（壓片糖果）LCL 醇+枸杞菊花水提取物、VC 粉末配制成濃度梯度為0.1，0.2，0.4，0.6，0.8，1.0mg/mL的樣液，分別加入濃度為9 mmol/L FeSO4、9 mmol/L水楊酸-乙醇溶液和1.2 mmol/L H2O2各1 mL，水浴鍋37℃反應(yīng)30 min，以去離子水為空白，在510 nm測吸光度A1[17-18]；去離子水代替H2O2重復上述操作，測藍靛果水提樣品本身的吸光度A2，同時以水代藍靛果樣液[19]，測定吸光度A0。

2 結(jié)果與分析

2.1 藍靛果、枸杞、菊花最佳混合比例正交試驗結(jié)果分析

采用SPSS 19.0軟件對數(shù)據(jù)進行方差分析，結(jié)果表明：3個原料中以藍靛果影響最大，其次是菊花，枸杞影響最?。ū?）。本試驗得到的最優(yōu)組合為藍靛果為30%、枸杞20%、菊花10%，其混粉的色澤、氣味及口感均為最佳（圖1）。

表5 藍靛果、枸杞、菊花混合優(yōu)化L9（34）正交試驗結(jié)果

圖1 藍靛果、枸杞-菊花混合比例優(yōu)化方差分析

2.2 壓片糖果輔料配方篩選與優(yōu)化正交試驗結(jié)果分析

由表6可知，3個因素中以藍靛果枸杞菊花混粉影響最大，其次是麥芽糊精，白砂糖影響最小。本試驗得到的最優(yōu)組合為藍靛果、枸杞、菊花混粉50%、白砂糖35%、麥芽糊精15%，其壓片糖果的組織形態(tài)、口感、片重差異均為最佳（圖2）。

表6 壓片糖果輔料配方優(yōu)化L9（34）正交試驗結(jié)果

2.3 食品添加劑用量選擇結(jié)果分析

由表7可知，食品添加劑最佳用量為配方4，即甜菊糖苷2.00%、檸檬酸1.00%、檸檬酸鈉0.40%、VC 1.00%、?；撬?.50%、β-胡蘿卜素0.05%、VB10.05%。

2.4 最佳混合時間的確定

由表8可知，混合機轉(zhuǎn)速為12 r/min、混合時間為10，15 min時，混粉上中下3 層顏色均一，顏色均勻度均符合要求?？紤]時間及成本情況，最佳混合工藝為當轉(zhuǎn)速為12 r/min時，混合10 min。采用最佳混合時間，連續(xù)混合3 批，并進行壓片，壓片糖果外觀及片重差異均符合要求。

2.5 抗氧化結(jié)果

2.5.1 還原性測定 由圖3可知，壓片糖果與藍靛果醇提物的還原性隨濃度升高而升高。壓片糖果還原性低于藍靛果醇提物，且在樣品濃度為0.6mg/mL時，藍靛果醇提物還原性高于VC；在濃度為1.0mg/mL時，藍靛果、枸杞-菊花壓片糖果的還原性為0.357%。

2.5.2 DPPH 自由基清除率 由圖4可知，壓片糖果與藍靛果醇提物的DPPH 自由基清除率與濃度呈正相關(guān)，兩者DPPH 自由基清除率在不同濃度下均相近，但都略低于VC 清除率。在濃度為1.0mg/mL時，壓片糖果DPPH 自由基清除率為49.13%，藍靛果醇提物DPPH 自由基清除率為64.49%，VC的DPPH 自由基清除率為88.86%。

表7 食品添加劑用量篩選結(jié)果

表8 最佳混合時間篩選結(jié)果

圖2 壓片糖果輔料配方優(yōu)化方差分析

圖3 還原性測定

圖4 DPPH 自由基清除率

2.5.3 ABTS自由基清除率 由圖5可知，壓片糖果與藍靛果醇提物的ABTS自由基清除率與濃度呈正相關(guān)性，且兩者ABTS自由基清除率顯著高于VC，在濃度為1.0mg/mL時，壓片糖果ABTS自由基清除率為99.09%，藍靛果醇提物ABTS自由基清除率為99.48%。

圖5 ABTS自由基清除率

2.5.4 羥自由基清除率 由圖6可知，壓片糖果與藍靛果醇提物的羥自由基清除率隨濃度升高而升高，在濃度為1.0mg/mL時，兩者羥自由基清除率皆高于VC，此濃度時壓片糖果羥自由基清除率為87.42%，藍靛果醇提物羥自由基清除率為90.07%。

3 討論

藍靛果醇提物具有良好的抗氧化活性，藍靛果中含有大量的VC及大量黃酮類成分，同時還具有花色苷和大量酚酸，可以很好地吸收氧自由基，提高過氧離子清除率。王振宇等[20]研究發(fā)現(xiàn)，藍靛果提取液中含有鞣花酸、樨皮素3-糖苷、槲皮素3-鼠李糖苷、4，5，7-三羥基酮醇3-糖苷、4，5，7-三羥基酮醇衍生物、花青素3-糖苷、花葵素3-糖苷、花青素3-木糖苷、花青素3-糖苷衍生物、二羧酸?；ㄇ嗨?-糖苷衍生物，這些物質(zhì)都具有抗氧化活性。但考慮到味道及口感，本試驗中將枸杞及菊花水提物與藍靛果醇提物混合，提升了壓片糖果的口感，并依舊保持了良好的抗氧化能力。

4 結(jié)論

試驗結(jié)果表明，藍靛果、枸杞-菊花壓片糖果最佳制備工藝為：藍靛果、枸杞、菊花提取物混合比例為3∶2∶1，處方中添加量為50%、白砂糖為35%、麥芽糊精為15%、甜菊糖苷2.0%、檸檬酸1.0%、檸檬酸鈉0.4%、VC 1.0%、?；撬?.5%、β-胡蘿卜素0.05%、VB10.05%、硬脂酸鎂0.2%，12 r/min，混合10 min。以此條件得到的壓片糖果口感好，成品質(zhì)量穩(wěn)定，具有良好氣味，壓片光澤均勻。壓片糖果具有良好的還原能力、DPPH 自由基清除能力、ABTS自由基清除能力及羥自由基清除能力，可以作為一種較有益的壓片糖果使用。本試驗為藍靛果更多的壓片糖果試驗提供了理論依據(jù)與試驗基礎(chǔ)。