嵌合抗原受體修飾T細(xì)胞的分子設(shè)計(jì)及發(fā)展策略

左百樂(lè),楊 如,王向鵬,楊安鋼

(1.新鄉(xiāng)醫(yī)學(xué)院醫(yī)學(xué)檢驗(yàn)學(xué)院 河南省分子診斷與醫(yī)學(xué)檢驗(yàn)技術(shù)協(xié)同創(chuàng)新中心，河南 新鄉(xiāng) 453003；2.新鄉(xiāng)醫(yī)學(xué)院第一附屬醫(yī)院神經(jīng)修復(fù)重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，河南 衛(wèi)輝 453100；3.空軍軍醫(yī)大學(xué)基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)院免疫學(xué)教研室，陜西 西安 710032)

惡性腫瘤因其高發(fā)病率和病死率而威脅著人類(lèi)健康[1]。近年來(lái)，利用機(jī)體免疫系統(tǒng)攻擊腫瘤細(xì)胞的免疫療法成為惡性腫瘤治療的突破點(diǎn)，2013年被《Science》雜志評(píng)選為“年度十大科技突破”之首。2018年，2位免疫學(xué)家因發(fā)現(xiàn)惡性腫瘤免疫檢查點(diǎn)抑制療法而獲得諾貝爾生理學(xué)或醫(yī)學(xué)獎(jiǎng)。嵌合抗原受體修飾T細(xì)胞(chimeric antigen receptor modified T cell，CAR-T)療法自1989年被GROSS等[2]提出后顯示出了巨大的潛力，推動(dòng)了惡性腫瘤免疫療法的迅速發(fā)展。嵌合抗原受體(chimeric antigenreceptor,CAR)的基本結(jié)構(gòu)包括以單鏈可變片段(single chain variable fragment,scFv)為代表的胞外抗原識(shí)別結(jié)構(gòu)域和與之連接的CD3ζ鏈的胞內(nèi)信號(hào)段。近年來(lái)，CAR-T療法在臨床上尤其是在靶向CD19治療B細(xì)胞惡性腫瘤方面取得了令人驚喜的臨床應(yīng)用效果。2017年有2種CAR-T療法(Kymriah、Yescarta)被美國(guó)食品藥品管理局批準(zhǔn)應(yīng)用于臨床。盡管如此，CAR-T在實(shí)體腫瘤中的治療效果不太理想，同時(shí)伴隨著細(xì)胞因子風(fēng)暴、脫靶效應(yīng)等風(fēng)險(xiǎn)。本文從CAR結(jié)構(gòu)設(shè)計(jì)及CAR-T療法的安全性、有效性改良策略方面展開(kāi)綜述，為CAR-T療法的進(jìn)一步研究和臨床應(yīng)用提供參考。

1 CAR分子的結(jié)構(gòu)設(shè)計(jì)

CAR由胞外抗原識(shí)別結(jié)合域、鉸鏈區(qū)與跨膜結(jié)構(gòu)域、胞內(nèi)信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)結(jié)構(gòu)域3個(gè)部分組成。不同于生理性的T細(xì)胞抗原受體(T-cell receptor,TCR)，CAR與相應(yīng)抗原的識(shí)別結(jié)合不依賴(lài)于主要組織相容性復(fù)合體(major histocompatibility complex,MHC)的遞呈，有效避免了腫瘤細(xì)胞MHC表達(dá)下調(diào)這一免疫逃逸機(jī)制[3]；同時(shí)，CAR可以識(shí)別結(jié)合多種細(xì)胞表面分子，如蛋白質(zhì)、糖類(lèi)、蛋白多糖、神經(jīng)節(jié)苷脂、高度糖基化蛋白等[4]。

1.1胞外抗原識(shí)別結(jié)合域胞外區(qū)負(fù)責(zé)識(shí)別抗原，其中最典型的是靶向腫瘤相關(guān)抗原(tumor-associated antigen,TAA)的scFv，它是由抗原特異性單克隆抗體的輕鏈及重鏈可變區(qū)通過(guò)短肽連接而成的1條多肽鏈，scFv的特異性及親和力決定了CAR-T的腫瘤靶向性[5]。為了進(jìn)一步提高CAR-T的靶向性，有研究者提出雙靶CAR，即通過(guò)設(shè)計(jì)連接2個(gè)相對(duì)獨(dú)立的抗原識(shí)別序列，以保證2個(gè)抗原同時(shí)被識(shí)別結(jié)合才能完全激活T細(xì)胞，進(jìn)而發(fā)揮特異性殺傷功能[6]。

除scFv之外，天然配體與受體擁有最為合適的親和力和最小的免疫原性，也可以用來(lái)作為CAR的胞外區(qū)。設(shè)計(jì)包含有天然配體heregulin的CAR-T能夠靶向殺傷人表皮生長(zhǎng)因子受體3/4陽(yáng)性乳腺癌細(xì)胞[7-8]。包含F(xiàn)c受體CD16的CAR-T通過(guò)與抗體藥物聯(lián)用，以抗體依賴(lài)性細(xì)胞介導(dǎo)的細(xì)胞毒性作用方式靶向殺傷腫瘤細(xì)胞[9]。另外，基于自然殺傷細(xì)胞活化性受體NKG2D的CAR-T的殺傷活性在多種腫瘤類(lèi)型中得到驗(yàn)證，NKG2D-CAR-T不僅能夠靶向殺傷其配體NKG2DL高表達(dá)的腫瘤細(xì)胞，還能靶向腫瘤微環(huán)境中的免疫抑制細(xì)胞[10]。

1.2鉸鏈區(qū)與跨膜結(jié)構(gòu)域常用的鉸鏈區(qū)序列來(lái)源于免疫球蛋白(immunoglobulin，Ig)G1、IgG4、IgD 和CD8結(jié)構(gòu)域，其中IgG1結(jié)構(gòu)域最常用。鉸鏈區(qū)的大小會(huì)影響scFv的靈活性，抗原表位的位置及鉸鏈區(qū)的長(zhǎng)度影響T細(xì)胞與腫瘤細(xì)胞之間的距離，進(jìn)而影響腫瘤識(shí)別、細(xì)胞因子產(chǎn)生、T細(xì)胞活化增殖。因此，針對(duì)不同TAA應(yīng)調(diào)整鉸鏈區(qū)長(zhǎng)度，以便更好地發(fā)揮 CAR 靶向性識(shí)別結(jié)合腫瘤抗原的功能[11]。

跨膜結(jié)構(gòu)域連接胞外抗原識(shí)別結(jié)合域和胞內(nèi)信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)結(jié)構(gòu)域，源于T細(xì)胞的CD3ζ、CD4、CD8、CD28 的跨膜區(qū)常用來(lái)構(gòu)建CAR，跨膜區(qū)在CAR結(jié)構(gòu)二聚化及 T 細(xì)胞活化中發(fā)揮著重要作用。研究發(fā)現(xiàn)，含有CD3跨膜區(qū)的CAR-T激活作用更強(qiáng)，含有CD28跨膜區(qū)的CAR-T能更高效地表達(dá)CAR基因[12]。

1.3胞內(nèi)信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)結(jié)構(gòu)域CAR的胞內(nèi)信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)結(jié)構(gòu)域是激活T細(xì)胞所必需的。第1代CAR結(jié)構(gòu)通常為含有3個(gè)免疫受體酪氨酸活化序列的CD3ζ胞內(nèi)段，當(dāng)胞外區(qū)識(shí)別并結(jié)合抗原，就會(huì)向胞內(nèi)傳導(dǎo)信號(hào)，激活T細(xì)胞[13]。由于第1代CAR只傳遞第1信號(hào)，無(wú)共刺激分子，不能提供長(zhǎng)時(shí)間的 T 細(xì)胞活化擴(kuò)增信號(hào)，細(xì)胞因子分泌水平較低，只能引起短暫的 T 細(xì)胞增殖，因此，抗腫瘤效果甚微。第2代CAR結(jié)構(gòu)增加了共刺激分子如CD28、4-1BB(CD137)、ICOS、CD27、DAP10、OX40(CD134)等，以此來(lái)增強(qiáng)增殖信號(hào)，其中CD28、4-1BB最為常用。研究表明，CD28-CAR-T的殺傷功能更強(qiáng)；4-1BB-CAR-T 表現(xiàn)出較低耗竭率，殺傷作用更持久[14]。為了進(jìn)一步提高T細(xì)胞的腫瘤殺傷活性，第3代CAR結(jié)構(gòu)包含了2個(gè)共刺激分子，第1個(gè)分子為CD28或4-1BB，第2個(gè)選用其他分子如OX40、CD28或4-1BB，結(jié)果顯示，第3代CAR-T細(xì)胞因子分泌水平更高，腫瘤殺傷作用更顯著[15]。最新研究設(shè)計(jì)的第4代CAR在結(jié)構(gòu)上增加了促炎性細(xì)胞因子如白細(xì)胞介素(interleukin,IL)-12或者共刺激分子配體如4-1BBL、CD40L，促炎性細(xì)胞因子可以招募免疫系統(tǒng)的其他組分進(jìn)而放大腫瘤免疫效應(yīng)，表達(dá)共刺激分子配體的CAR-T能夠抵抗免疫抑制性腫瘤局部微環(huán)境，這對(duì)實(shí)體腫瘤的免疫治療意義重大[5]。

2 CAR-T療法的安全性對(duì)策

CAR-T療法在發(fā)揮顯著抗腫瘤作用的同時(shí)也存在嚴(yán)重的毒性反應(yīng)風(fēng)險(xiǎn)，比如脫靶效應(yīng)、細(xì)胞因子風(fēng)暴、神經(jīng)毒性等。全身應(yīng)用類(lèi)固醇是關(guān)閉T細(xì)胞功能的傳統(tǒng)方法，其可以在數(shù)小時(shí)內(nèi)減輕炎癥反應(yīng)和T細(xì)胞活化。然而，單靠類(lèi)固醇不足以逆轉(zhuǎn)損傷，需要新的、能夠立即關(guān)閉CAR-T活性或者直接破壞CAR-T的對(duì)策。

2.1自殺基因系統(tǒng)通過(guò)引入自殺基因系統(tǒng)，必要時(shí)通過(guò)條件性消除CAR-T來(lái)避免潛在毒性風(fēng)險(xiǎn)，如：(1)單純皰疹病毒-胸苷激酶(herpes simplex virus-derived enzyme thymidine kinase,HSV-TK)基因。HSV-TK是一種高度免疫原性的病毒衍生蛋白，能將前體藥物更昔洛韋(ganciclovir,GCV)轉(zhuǎn)化為GCV-三磷酸，通過(guò)阻斷DNA合成導(dǎo)致細(xì)胞死亡。將HSV-TK基因插入至CAR-T，使其對(duì)抗病毒藥物GCV敏感，以此控制CAR-T的存活[16]。(2)誘導(dǎo)型半胱氨酸蛋白酶9(inducible caspase 9,iCasp9)系統(tǒng)。將缺失內(nèi)源激活域的iCasp9序列與FK506結(jié)合蛋白融合，并且通過(guò)暴露于特定藥物(如FK506)而選擇性誘導(dǎo)二聚化，iCasp9二聚化后誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡[17]。DI STASI等[18]首先在單倍體相合造血干細(xì)胞移植受者中測(cè)試了iCasp9系統(tǒng)，結(jié)果顯示，發(fā)生移植物抗宿主反應(yīng)(graft-versus-host disease,GVHD)的4例患者在使用單一劑量的二聚化劑AP1903后30 min內(nèi)，超過(guò)90%的CAR-T被消耗。(3)截短的表皮生長(zhǎng)因子受體(truncated epidermal growth factor receptor,tEGFR)。tEGFR分子只包含EGFR分子的胞外區(qū)，并且存在西妥昔單抗識(shí)別表位，可作為靶抗原，輸注相關(guān)抗體(西妥昔單抗)后靶向消除CAR-T[19]。

2.2CAR-T激活信號(hào)控制通過(guò)對(duì)CAR結(jié)構(gòu)合理設(shè)計(jì)，可以保證CAR基因在特定時(shí)間和空間表達(dá)，進(jìn)而選擇性激活T細(xì)胞，發(fā)揮抗腫瘤功能。主要實(shí)施策略包括：(1)設(shè)計(jì)靶向腫瘤抗原CAR的同時(shí)引入抑制性CAR(inhibitory CAR,iCAR)[20]，其包含有識(shí)別正?？乖陌鈪^(qū)和抑制性受體如程序性細(xì)胞死亡受體-1(programmed cell death-1,PD-1)和細(xì)胞毒T淋巴細(xì)胞相關(guān)抗原4(cytotoxic T lymphocyte-associated antigen-4,CTLA-4)的胞內(nèi)信號(hào)區(qū)。當(dāng)iCAR-T與正常組織接觸時(shí)，iCAR與在正常組織上特異性表達(dá)的抗原結(jié)合，激活CTLA-4或PD-1抑制信號(hào)，防止T細(xì)胞活化。以這種方式CAR-T能夠被腫瘤細(xì)胞活化，并降低對(duì)正常組織的毒性。(2)為了增加CAR-T的特異性，設(shè)計(jì)靶向腫瘤抗原CAR的同時(shí)引入嵌合共刺激分子受體(chimeric costimulatory receptor，CCR)[20]，CAR和CCR二者胞內(nèi)區(qū)分別為CD3和共刺激分子，分別傳遞T細(xì)胞活化第1、第2信號(hào)。在腫瘤細(xì)胞上表達(dá)的2種靶抗原必須參與傳遞第1、第2信號(hào)才能完全激活 CAR-T，僅表達(dá)一種抗原的正常細(xì)胞不足以完全激活T細(xì)胞信號(hào)。(3)近來(lái)發(fā)展的一種logic-gated CAR能夠通過(guò)一種合成型Notch受體對(duì)CAR-T高度定制化[21]。在該技術(shù)中，該合成型Notch受體的胞外識(shí)別結(jié)構(gòu)域能夠識(shí)別各種不同的細(xì)胞表面蛋白，包括腫瘤特異性抗原。識(shí)別結(jié)合后，胞內(nèi)轉(zhuǎn)錄結(jié)構(gòu)域?qū)橄掠位蛉鏑AR基因提供轉(zhuǎn)錄信號(hào)，CAR表達(dá)于細(xì)胞表面識(shí)別另一種靶向抗原，此時(shí)T細(xì)胞完全激活發(fā)揮功能。通過(guò)此方法能夠高度控制細(xì)胞的感應(yīng)和應(yīng)答行為，通過(guò)雙靶點(diǎn)特異性識(shí)別來(lái)提高安全性，同時(shí)可局部選擇性輸送多種治療成分，如細(xì)胞因子、抗體、小分子等，提高抗腫瘤效應(yīng)。(4)CAR可以被設(shè)計(jì)為具有“開(kāi)關(guān)”功能，即On-Switch CAR[22]。其中受體的抗原結(jié)合結(jié)構(gòu)域和胞內(nèi)信號(hào)結(jié)構(gòu)域被分成不同的模塊，通過(guò)施用小分子二聚化因子誘導(dǎo)這些模塊的異源二聚化，只有關(guān)聯(lián)抗原和小分子都存在時(shí)才能誘導(dǎo)T細(xì)胞活化，因此可以控制CAR-T的持續(xù)時(shí)間和強(qiáng)度。(5)CAR可以用“masked”受體修飾，即Masked CAR。一種可被蛋白酶切割的masked短肽受體結(jié)構(gòu)封閉CAR抗原結(jié)合結(jié)構(gòu)域，當(dāng)CAR-T進(jìn)入富集蛋白酶(例如腫瘤微環(huán)境)的組織中，masked短肽被蛋白酶切割并暴露CAR的抗原結(jié)合結(jié)構(gòu)域[23]。

2.3其他控制治療的持續(xù)時(shí)間也是限制CAR潛在毒性的一種方法。有研究通過(guò)RNA電穿孔法將靶向間皮素的CAR轉(zhuǎn)染至T細(xì)胞，用于治療胰腺癌、卵巢癌和間皮瘤等實(shí)體瘤患者[24]。另外，可以通過(guò)局部注射CAR-T來(lái)減小毒性，比如在多形性膠質(zhì)母細(xì)胞瘤中的應(yīng)用[25]。調(diào)整治療劑量及輸注次數(shù)也是一種應(yīng)對(duì)方案，美國(guó)重組DNA咨詢(xún)委員會(huì)提出CAR-T的間接劑量上升方案[26]，即CAR-T的I期試驗(yàn)通常以較低的細(xì)胞劑量開(kāi)始，然后逐漸升高，起始劑量應(yīng)根據(jù)CAR-T的類(lèi)型進(jìn)行調(diào)整，即第2代或第3代CAR-T應(yīng)以低于第1代CAR-T的劑量開(kāi)始。

3 CAR-T療法有效性的改進(jìn)策略

3.1增強(qiáng)歸巢能力CAR-T歸巢到達(dá)腫瘤部位是發(fā)揮有效殺傷的先決條件，也是實(shí)體腫瘤治療的主要障礙。通過(guò)基因修飾技術(shù)共表達(dá)特定的趨化因子受體，能夠促使CAR-T定向遷移至腫瘤部位。CCL2是許多腫瘤(包括神經(jīng)母細(xì)胞瘤)產(chǎn)生的趨化因子細(xì)胞，而趨化因子受體CCR2b導(dǎo)向CCL2遷移。CRADDOCK等[27]通過(guò)共表達(dá)趨化因子受體CCR2b來(lái)增強(qiáng)靶向神經(jīng)節(jié)苷脂2的CAR-T的歸巢能力；結(jié)果顯示，神經(jīng)母細(xì)胞瘤細(xì)胞系和6例患者的原發(fā)腫瘤細(xì)胞均分泌高水平的CCL2，反轉(zhuǎn)錄病毒轉(zhuǎn)導(dǎo)共表達(dá)高水平CCR2b(>60%)的CAR-T體外遷移良好，歸巢能力得到改善(>10倍)，殺傷腫瘤能力得到增強(qiáng)。DI STASI等[28]設(shè)計(jì)CAR-T共表達(dá)CCR4，結(jié)果顯示，它們能靶向遷移到CD30陽(yáng)性的霍奇金淋巴瘤部位，發(fā)揮更強(qiáng)的抗腫瘤作用。CHINNAMY等[29]設(shè)計(jì)了共表達(dá)IL-12及靶向腫瘤血管內(nèi)皮細(xì)胞生長(zhǎng)因子受體2的CAR-T，結(jié)果顯示，CAR-T可歸巢至腫瘤部位，并釋放大量IL-12至腫瘤微環(huán)境。CARUANA等[30]研究發(fā)現(xiàn)，CAR-T共表達(dá)類(lèi)肝素酶不會(huì)影響CAR-T的存活、擴(kuò)增及靶向殺傷功能，并可提高其降解細(xì)胞外基質(zhì)的能力，進(jìn)而增強(qiáng)T細(xì)胞浸潤(rùn)和抗腫瘤效應(yīng)。

3.2增強(qiáng)CAR-T的增殖存活能力CAR-T只有持續(xù)存活、保持增殖能力，才能有效清除病灶及預(yù)防復(fù)發(fā)。研究顯示，應(yīng)用抗CD3/CD28免疫磁珠刺激活化能夠?qū)崿F(xiàn)自體T細(xì)胞的1 000倍擴(kuò)增[31]。CHEUNG等[32]開(kāi)發(fā)了一種用生物材料制成的抗原呈遞細(xì)胞模擬支架(antigen-presenting cells-mimetic scaffolds,APC-ms)，與商業(yè)化磁珠相比，原代小鼠和人源T細(xì)胞的擴(kuò)增效率提高了2～10倍，并且不影響CD19-CAR-T的腫瘤殺傷能力。細(xì)胞因子在T細(xì)胞體外培養(yǎng)制備中發(fā)揮著重要作用，其中IL-2最為常用，對(duì)T細(xì)胞增殖至關(guān)重要；然而，大劑量使用 IL-2 會(huì)對(duì)機(jī)體靶器官和細(xì)胞產(chǎn)生明顯毒性。SOCKOLOSKY等[33]利用突變IL-2以及相應(yīng)的IL-2突變受體β導(dǎo)入T細(xì)胞，使其能夠在體外和體內(nèi)選擇性靶向改造T細(xì)胞，以降低其脫靶效應(yīng)和機(jī)體免疫反應(yīng)，并能夠有效抑制荷瘤鼠腫瘤生長(zhǎng)，延長(zhǎng)其生存期。

采用基因修飾技術(shù)使CAR-T同時(shí)表達(dá)細(xì)胞因子如IL-12、IL-15等，也是提高T細(xì)胞存活的一種手段。另外，可以選擇存活能力更強(qiáng)的特殊表型的細(xì)胞，如天然和中樞記憶性T細(xì)胞、干細(xì)胞樣記憶T細(xì)胞等回輸治療，還有研究者應(yīng)用轉(zhuǎn)錄激活因子樣效應(yīng)核酸酶基因編輯技術(shù)永久敲除TCRα和TCRβ表達(dá)，抑制GVHD，從而保證CAR-T的持久存活[34]。EYQUEM等[35]通過(guò)CRISPR/Cas9技術(shù)將CAR基因定位于TCR的α鏈的恒定區(qū)(T-cell receptor α constant,TRAC)，相比傳統(tǒng)CAR-T，TRAC-CAR-T的記憶細(xì)胞比例高，耗竭水平低，能夠延緩接受抗原刺激后向效應(yīng)細(xì)胞分化的過(guò)程，發(fā)揮更好的體內(nèi)抗腫瘤效應(yīng)。

3.3突破腫瘤微環(huán)境的免疫抑制實(shí)體腫瘤除了腫瘤細(xì)胞，還有成纖維細(xì)胞、內(nèi)皮細(xì)胞、炎癥反應(yīng)細(xì)胞、細(xì)胞外基質(zhì)及免疫抑制分子等，形成了免疫抑制性腫瘤微環(huán)境。CAR-T治療實(shí)體腫瘤時(shí)，如何克服腫瘤微環(huán)境中多種免疫抑制分子的干擾，是必須面臨和解決的問(wèn)題。研究者們進(jìn)行了多種嘗試，如通過(guò)共表達(dá)顯性失活的轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子-β(transforming growth factor-β,TGF-β)受體克服TGF-β信號(hào)通路抑制作用[36]；靶向自然殺傷細(xì)胞活性受體NKG2D以識(shí)別免疫抑制性細(xì)胞如骨髓來(lái)源的抑制性細(xì)胞(myeloid-derived suppressor cells，MDSC)上表達(dá)的NKG2D配體，以降低腫瘤微環(huán)境內(nèi)骨髓來(lái)源的抑制性細(xì)胞以及調(diào)節(jié)性T細(xì)胞的比例，增加T細(xì)胞浸潤(rùn)[37]；共表達(dá)共刺激分子配體CD40L和4-1BBL能夠降低T細(xì)胞耗竭水平來(lái)應(yīng)對(duì)抑制性腫瘤微環(huán)境[38]；共表達(dá)促炎性因子IL-12能夠更好地影響局部抑制性細(xì)胞如調(diào)節(jié)性T細(xì)胞或MDSC募集，或者通過(guò)招募激活固有免疫細(xì)胞如巨噬細(xì)胞的促炎反應(yīng)，到達(dá)腫瘤抗原缺失部位，發(fā)揮殺傷效應(yīng)[39]。更換IL-4胞內(nèi)區(qū)為IL-7胞內(nèi)區(qū)，將腫瘤細(xì)胞產(chǎn)生的抑制性信號(hào)轉(zhuǎn)換成激活性信號(hào)，由此逆轉(zhuǎn)腫瘤來(lái)源的IL-4的作用，增強(qiáng)腫瘤微環(huán)境中腫瘤定向的細(xì)胞毒性T細(xì)胞的增殖和活化[40]；PD-1-CD28嵌合受體通過(guò)結(jié)合腫瘤細(xì)胞表面的PD-L1，激活CD8+T細(xì)胞共刺激信號(hào)，增加細(xì)胞外凋節(jié)蛋白激酶磷酸化水平，增強(qiáng)細(xì)胞因子和顆粒酶B分泌，進(jìn)而增強(qiáng)其抗腫瘤活性[41]。此外，聯(lián)合使用單克隆抗體阻斷免疫檢查點(diǎn)分子PD-1或CTLA-4，能進(jìn)一步增強(qiáng)CAR-T療法的功效[42]。

4 結(jié)語(yǔ)

CAR-T療法以其強(qiáng)大的治療潛能逐漸被認(rèn)可接受，成為可能的腫瘤治療方案之一，并在血液類(lèi)腫瘤的臨床應(yīng)用中取得了令人欣喜的成績(jī)。當(dāng)然，CAR-T療法還有許多方面需要進(jìn)一步研究，如CAR信號(hào)優(yōu)化、最佳靶抗原選擇、細(xì)胞制備方案、治療安全性、聯(lián)合治療策略、CAR-T的活性成分鑒定等[3]。相信隨著研究的不斷深入，技術(shù)的不斷改進(jìn)，臨床數(shù)據(jù)的完善，CAR-T療法將開(kāi)啟腫瘤治療的新時(shí)代。