鹽度和漂白粉對(duì)東方新糠蝦的急性脅迫影響

張濤，史會(huì)來，平洪領(lǐng)，余方平，盧斌

（浙江省海洋水產(chǎn)研究所，浙江省海水增養(yǎng)殖重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，浙江 舟山 316021）

東方新糠蝦（Neomysis orientalis）隸屬于糠蝦目（Mysidacea），糠蝦科（Mysidae），新糠蝦屬（Neomysis）。廣泛分布于我國(guó)沿海，特別是沿海咸淡水海域尤為常見。東方新糠蝦具有廣溫、廣鹽性；屬雜食性類型，既可濾食單細(xì)胞藻類和有機(jī)碎屑，也可攝食輪蟲、鹵蟲、橈足類、枝角類和箭蟲等，是自然海區(qū)中許多魚蝦的天然餌料[1]，同時(shí)也是多種經(jīng)濟(jì)海產(chǎn)魚類（大黃魚、石斑魚、大菱鲆、牙鲆、東方鲀、真鯛等）育苗的活餌料[3-6]。

浙江省海洋水產(chǎn)研究所試驗(yàn)場(chǎng)每年利用養(yǎng)殖三疣梭子蟹的土池進(jìn)行東方新糠蝦規(guī)?；囵B(yǎng)，效果顯著。但是，采用室外土池培育東方新糠蝦的方法易受外界條件的影響，尤其是降雨后鹽度的改變和消毒海水后漂白粉的殘留是重要的影響因素?，F(xiàn)有的研究報(bào)道中，雖已有學(xué)者就部分環(huán)境因子針對(duì)糠蝦種類進(jìn)行了研究，如鄭嚴(yán)等[7-8]報(bào)道了季節(jié)和水溫條件下黑褐新糠蝦的種群和生殖特點(diǎn)及生活史等生物學(xué)特性研究；顏天等[9]研究了三苯基氯化錫（TPTC）的急性毒性效應(yīng)及其對(duì)糠蝦繁殖、生殖周期和種群的慢性毒性影響；Fockedey等[10]研究了普通新糠蝦（Neomysis integer）的存活和孵化率與鹽度條件的相關(guān)性；王金鋒等[11-12]研究了水體中組織胺對(duì)黑褐新糠蝦和日本新糠蝦的生長(zhǎng)、發(fā)育的影響；楊海萍等[13-14]研究了溫度和鹽度對(duì)黑褐新糠蝦（Neomysis awatschensis）成活的影響；但尚未見有關(guān)鹽度和漂白粉對(duì)東方新糠蝦影響的研究報(bào)道。因此，該研究以東方新糠蝦為試驗(yàn)對(duì)象，探討了不同鹽度和不同漂白粉濃度對(duì)東方新糠蝦的急性毒性作用，旨在探究?jī)烧吲c東方新糠蝦存活率的關(guān)系，為制定東方新糠蝦土池規(guī)?；囵B(yǎng)技術(shù)方案提供基礎(chǔ)數(shù)據(jù)。

1 材料與方法

1.1 試驗(yàn)材料

試驗(yàn)在浙江省海洋水產(chǎn)研究所西閃試驗(yàn)場(chǎng)完成。東方新糠蝦取自試驗(yàn)場(chǎng)三疣梭子蟹和糠蝦混養(yǎng)池塘，系人為接種后自行繁殖苗種。采集時(shí)海水溫度26℃，用80目網(wǎng)兜將東方新糠蝦撈至室內(nèi)7 m3的水泥池中暫養(yǎng)，每天投喂少量濃縮藻及豐年蟲，每天吸污1次并換部分新水。暫養(yǎng)3 d后，隨機(jī)挑選個(gè)體健康、大小相近的糠蝦作為試驗(yàn)個(gè)體。經(jīng)測(cè)量試驗(yàn)糠蝦的體長(zhǎng)為（0.66±0.07）cm。

1.2 試驗(yàn)設(shè)計(jì)

鹽度試驗(yàn)：試驗(yàn)在2 000 mL的塑料杯中進(jìn)行，以經(jīng)暗沉淀和沙濾后的自然海水為基礎(chǔ)，加入自來水或者海水精配置成不同鹽度（S），該試驗(yàn)共設(shè)置9個(gè)鹽度梯度，分別為 0、5、10、15、20、25、30、35、40，其中0為純淡水組，25為對(duì)照組，將S＜25稱為低鹽度組，S＞25稱為高鹽度組。每組設(shè)置3個(gè)平行組，每個(gè)平行組中東方新糠蝦的數(shù)量為20尾。

漂白粉試驗(yàn)：試驗(yàn)在2 000 mL的塑料杯中進(jìn)行，使用經(jīng)暗沉淀和沙濾后的自然海水，利用常用水體消毒劑漂白粉配置6個(gè)濃度梯度（經(jīng)預(yù)試驗(yàn)后選定），分別為 0、0.5、1.0、2.0、4.0、8.0 mg/L，其中 0為自然海水組。每組設(shè)置3個(gè)平行組，每個(gè)平行組中東方新糠蝦的數(shù)量為20尾。

2個(gè)試驗(yàn)均在開始后12 h內(nèi)每隔2 h觀察一次糠蝦的死亡情況，12 h后每隔12 h觀察一次糠蝦的死亡情況，采用肉眼觀察以及用解剖針輕輕觸碰觀察的方法，以糠蝦個(gè)體的逃避反應(yīng)表示活力，挑出死亡個(gè)體，做好記錄。試驗(yàn)水溫為26～27℃，無充氣。

1.3 相關(guān)系數(shù)及計(jì)算方法

1.3.1 成活率μ 成活率μ計(jì)算參照公式：μ=N1/N。式中，N為試驗(yàn)開始時(shí)東方新糠蝦存活尾數(shù)，N1為試驗(yàn)結(jié)束時(shí)東方新糠蝦存活尾數(shù)。

1.3.2 半致死濃度（LC50）和安全濃度（SC） 根據(jù)不同漂白粉濃度下東方新糠蝦的累積病死率，利用寇式法[15]計(jì)算漂白粉溶液對(duì)東方新糠蝦的半致死濃度LC50和安全濃度SC。

式中：LC50及各漂白粉濃度均以mg/L來表示；XK為最高濃度的對(duì)數(shù)；∑P為各濃度組死亡東方新糠蝦百分比之和；d為相鄰兩組濃度的對(duì)數(shù)之差。

1.4 數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)與分析

所得試驗(yàn)數(shù)據(jù)均采用Excel 2010和SPSS 17.0軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)處理和統(tǒng)計(jì)分析，組間差異采用Duncan's多重比較，描述性統(tǒng)計(jì)值均采用平均值±標(biāo)準(zhǔn)差的形式表示，顯著性水平設(shè)在P=0.05。

2 結(jié)果與分析

2.1 鹽度對(duì)東方新糠蝦成活率的影響

試驗(yàn)過程中，東方新糠蝦在純淡水中2 h內(nèi)即已死亡過半，通體發(fā)白，側(cè)臥，觸碰無反應(yīng)。其余糠蝦也已表現(xiàn)出明顯的死亡癥狀，體色變淡，觸碰雖可輕微活動(dòng)，但活力較弱，遂即在3 h左右全部死亡。東方新糠蝦在鹽度高于5的低鹽范圍內(nèi)表現(xiàn)出較強(qiáng)的耐受性，但對(duì)外界刺激較為敏感，試驗(yàn)進(jìn)行3 d后，成活率均在80%以上。而高鹽度組糠蝦則表現(xiàn)不佳，絕大多數(shù)個(gè)體已死亡，其余大部分個(gè)體也聚集在燒杯底部，活力明顯減弱（表1）。

表1 不同鹽度條件下東方新糠蝦存活數(shù)（尾）

鹽度 編號(hào) 2 h 6 h 12 h 24 h 36 h 48 h 72 h 存活率/% 平均存活率/%30 3 20 20 19 17 15 14 12 60 63.33 1 11 7 0 0 0 0 0 0 352 12 6 0 0 0 0 0 0 3 10 7 0 0 0 0 0 0 0 1 6 2 0 0 0 0 0 0 402 4 2 0 0 0 0 0 0 3 4 0 0 0 0 0 0 0 0

不同鹽度試驗(yàn)條件下，東方新糠蝦存活率隨時(shí)間變化趨勢(shì)見圖1所示。結(jié)果顯示，隨著試驗(yàn)的進(jìn)行，東方新糠蝦死亡數(shù)量逐漸增加，存活率隨時(shí)間變化呈現(xiàn)不同程度的下降趨勢(shì)。比較各鹽度組存活率變化趨勢(shì)可以看出，鹽度15～25各組存活率均很高，72 h存活率均在95%以上，3條變化趨勢(shì)線幾乎重合（P＞0.05）；35、40兩組糠蝦個(gè)體均在 12 h內(nèi)全部死亡，存活率與其余鹽度組差異均極具統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.01）；5、10兩組存活率顯著低于 15～25各組（P＜0.05），并顯著高于 30～40 各組；而鹽度為 0的純淡水組，糠蝦個(gè)體實(shí)際在3 h左右即已全部死亡。試驗(yàn)結(jié)果表明，鹽度因子對(duì)東方新糠蝦的存活有著顯著影響，東方新糠蝦對(duì)低鹽的耐受能力要顯著強(qiáng)于對(duì)高鹽的耐受能力。

2.2 漂白粉對(duì)東方新糠蝦病死率的影響

圖1 不同鹽度條件下東方新糠蝦存活率隨時(shí)間變化趨勢(shì)

根據(jù)預(yù)試驗(yàn)結(jié)果，設(shè)定5種不同漂白粉濃度（0.5、1、2、4、8 mg/L）對(duì)東方新糠蝦進(jìn)行急性毒性試驗(yàn)，試驗(yàn)結(jié)果見表2，濃度0 mg/L為自然海水對(duì)照組。

試驗(yàn)結(jié)果顯示，東方新糠蝦對(duì)漂白粉的急性毒性非常敏感。在不同漂白粉濃度下，漂白粉濃度越大，對(duì)東方新糠蝦產(chǎn)生的毒性影響也越大，東方新糠蝦半數(shù)致死的時(shí)間也越短。而漂白粉濃度為0.5時(shí)，72 h時(shí)東方新糠蝦病死率為28.33%，雖有部分東方新糠蝦個(gè)體出現(xiàn)體色變淡、側(cè)臥現(xiàn)象，但輕輕觸碰后仍可快速躲開。漂白粉濃度為8時(shí)，2 h內(nèi)東方新糠蝦病死率即達(dá)到12%，更是在12 h時(shí)全部死亡，通體發(fā)白，觸碰無任何反應(yīng)。經(jīng)計(jì)算，漂白粉對(duì)東方新糠蝦24、48、72 h的半致死濃度分別為2.639、1.149、0.812 mg/L，安全濃度為 0.065 mg/L（表3）。

表2 不同濃度漂白粉對(duì)東方新糠蝦死亡數(shù)的影響 尾

表3 漂白粉對(duì)東方新糠蝦的半致死濃度和安全濃度

3 討論

3.1 鹽度對(duì)東方新糠蝦的急性毒性影響

鹽度是水生生物生存的重要環(huán)境因子，鹽度對(duì)不同水生動(dòng)物的影響不同，對(duì)糠蝦的影響也依不同品種而有差異。陳迪虎等[16]在鹽度變化對(duì)糠蝦成活率的影響研究中，表明鹽度25為安全濃度，鹽度30則會(huì)對(duì)糠蝦成活率有著顯著的負(fù)面影響，鹽度逐步淡化到0.1會(huì)顯著提高成活率；而楊海萍等[14]在鹽度對(duì)黑褐新糠蝦成活的影響研究中表明，黑褐新糠蝦的病死率和鹽度呈正相關(guān)關(guān)系，鹽度5～30時(shí)病死率較低，鹽度35以上病死率較高，45以上黑褐新糠蝦基本全部死亡，整體表現(xiàn)對(duì)低鹽具有較好的耐受性。該試驗(yàn)中，在鹽度高于35的高鹽度環(huán)境下，東方新糠蝦在6 h內(nèi)病死率即可達(dá)100%，而楊海萍等[14]的報(bào)道黑褐新糠蝦在鹽度35時(shí)48 h仍保持70%左右的成活率，鹽度45時(shí)才會(huì)全部死亡，兩者結(jié)果存在明顯不同，表明東方新糠蝦對(duì)高鹽的耐受能力要顯著弱于黑褐新糠蝦。該試驗(yàn)結(jié)果表明東方新糠蝦對(duì)低鹽具有較好的耐受性，這一結(jié)果也與陳迪虎等[16]、楊海萍等[14]的報(bào)道結(jié)果相似。

3.2 漂白粉對(duì)東方新糠蝦的急性毒性影響

漂白粉作為一種最常用的水體消毒劑，其對(duì)于殺滅水體中有害生物、病原菌等有著極其有效的作用。漂白粉在水中形成的次氯酸能夠透過細(xì)胞膜，破壞病原菌包內(nèi)蛋白質(zhì)的活性，殺菌效率高，殺菌譜廣。濃度使用不當(dāng)，不僅可以殺滅病原菌等有害生物，對(duì)水體內(nèi)的養(yǎng)殖生物亦會(huì)造成不同程度的影響[17-19]，生產(chǎn)上推薦使用的質(zhì)量濃度一般為1 mg/L[17]。東方新糠蝦的高密度培養(yǎng)是在三疣梭子蟹和日本對(duì)蝦混養(yǎng)土池的基礎(chǔ)上進(jìn)行，主養(yǎng)品種梭子蟹和日本對(duì)蝦一旦發(fā)生纖毛蟲或者其他等病害，往往采用一定濃度的漂白粉進(jìn)行消毒殺菌。當(dāng)需要潑灑漂白粉來進(jìn)行水體消毒時(shí)，該試驗(yàn)結(jié)果可以作為一定的參考，來指導(dǎo)潑灑漂白粉的濃度，配合著適當(dāng)增換新水，做到既能殺滅病原菌的作用，又不至于對(duì)東方新糠蝦產(chǎn)生毀滅性的毒害，進(jìn)而影響高密度培養(yǎng)的效果。

該試驗(yàn)結(jié)果表明，東方新糠蝦對(duì)低鹽度具有較好的耐受性，這與其廣泛分布于河口、岸邊等咸淡水海域的生活習(xí)性相吻合，進(jìn)一步證明其是一種河口性糠蝦品種。該試驗(yàn)研究結(jié)果對(duì)于制定東方新糠蝦土池規(guī)模化培養(yǎng)技術(shù)方案具有一定的指導(dǎo)意義。