堿提法提取地鱉蟲多糖正交試驗(yàn)研究

羅志文，楊舒涵，張躍華，繆天琳， 周清波，趙永勛*

( 1. 佳木斯大學(xué)生命科學(xué)學(xué)院，黑龍江佳木斯154007；2. 佳木斯大學(xué)應(yīng)用昆蟲研究所，黑龍江佳木斯154007)

地鱉蟲(EupolyphagasinensisWalker)又名土鱉蟲、土元[1]，是活血化瘀類動(dòng)物藥[2]，消腫止痛，主治跌打損傷，并癌癥有一定療效[3]。作者采用堿提法進(jìn)行多糖提取試驗(yàn)，采用苯酚-硫酸法測定多糖的含量，對比不同提取條件多糖的提取率，為地鱉蟲、開發(fā)提供可靠的科學(xué)依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 試驗(yàn)材料

地鱉蟲經(jīng)佳木斯大學(xué)許龍教授鑒定為鱉蠊科地鱉蟲，經(jīng)低溫干燥后粉碎成粉末，提取前經(jīng)預(yù)處理放于干燥箱備用。

1.2 粉末制備與預(yù)處理

地鱉蟲粉碎后過40目篩，用石油醚除去脂溶性雜質(zhì)，室溫下浸泡8h，經(jīng)過濾，旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)回收石油醚。

1.3 試驗(yàn)方法

堿提法即堿液提取法，是利用昆蟲多糖溶于水或酸、堿溶液而不溶于醇、醚、丙酮等有機(jī)溶劑的特點(diǎn)來提取昆蟲多糖，其特點(diǎn)是具有提取多糖得率高、條件溫和可控、操作簡單等特點(diǎn)。

方法是：稱取預(yù)處理的的地鱉蟲粉末，按照提取時(shí)間、料液比、提取溫度、提取次數(shù)于恒溫水浴鍋內(nèi)進(jìn)行提取試驗(yàn)。將濾液用1mol/L的鹽酸或1mol/L的NaOH調(diào)至pH=7.0，濃縮，加入3倍量的95%乙醇，醇沉24h，經(jīng)離心無水乙醇洗滌、脫水，低溫干燥得到地鱉蟲多糖.

1.3.1 單因素試驗(yàn)。地鱉蟲多糖提取工藝優(yōu)化試驗(yàn)的3個(gè)因素：堿液濃度、提取溫度、提取時(shí)間。各試驗(yàn)因素不平范圍分別為：堿液濃度(A)：0.01～0.06mol/L、提取溫度(B)：30～80℃、提取時(shí)間(C):0.5～1.5h，設(shè)5個(gè)重復(fù)試驗(yàn)，選用平均值作為試驗(yàn)參數(shù)，確定各因素的影響。

1.3.2 堿提法提取地鱉蟲多糖正交試驗(yàn)。根據(jù)單因素試驗(yàn)結(jié)果，選擇以堿液濃度(A)、提取溫度(B)、提取時(shí)間(C)等三個(gè)因素三水平進(jìn)行正交試驗(yàn)，采用L9(33)正交表試驗(yàn)。

表1 正交試驗(yàn)因素水平表

2 結(jié)果與分析

2.1 單因素試驗(yàn)

不同單因索對地鱉蟲多糖含量提取含量的影響如圖1～3。

圖1 堿液濃度對地鱉蟲多糖含量的影響

圖2 提取溫度對地鱉蟲多糖含量的影響

圖3 提取時(shí)間對地鱉蟲多糖含量的影響

2.2 正交試驗(yàn)

試驗(yàn)結(jié)果與極差分析如表2，實(shí)驗(yàn)因素對地鱉蟲多糖含量影響的順序?yàn)椋築﹥A﹥C，即堿液濃度對地鱉蟲多糖含量影響最大，其次為提取溫度，提取時(shí)間和料液比影響較小。確定最佳的提取工藝條件為A3B2C1，即堿液濃度為0.03mol/L，提取時(shí)間1h，提取溫度為60℃。

表2 正交試驗(yàn)結(jié)果與極差分析

3 結(jié)論與討論

通過采用堿提法對地鱉蟲多糖提取優(yōu)化，可以使我們獲得優(yōu)質(zhì)的地鱉蟲多糖，為我們進(jìn)行地鱉蟲多糖分離純化、成分分析和對荷瘤小鼠抗腫瘤活性等試驗(yàn)積累試驗(yàn)數(shù)據(jù)。