血清TK1在非小細(xì)胞肺癌輔助診斷中的臨床意義

韓衛(wèi)衛(wèi) 朱 明 狄冬梅

1 蘇州大學(xué)附屬常州市腫瘤醫(yī)院胸心外科，江蘇省常州市 213000；2 蘇州大學(xué)附屬第三醫(yī)院胸心外科

肺癌是臨床最常見的惡性腫瘤之一，其發(fā)病率和死亡率也一直居高不下。手術(shù)治療是早期肺癌首選的治療方式，且具有良好的效果，其中Ⅰ～Ⅱ期的非小細(xì)胞肺癌患者的5年生存率可達69.9%[1-2]。但由于肺癌起病隱匿，早期缺乏典型癥狀和特異臨床表現(xiàn)，大部分患者在發(fā)現(xiàn)時已是中晚期，從而喪失了手術(shù)根治的機會，治療起來棘手且效果差[3]。因此，肺癌的早診早治顯得尤為重要，細(xì)胞質(zhì)胸苷激酶作為一種新型的細(xì)胞增殖相關(guān)性的腫瘤標(biāo)志物，在臨床得到了廣泛的應(yīng)用。

1 資料與方法

1.1 一般資料 收集2013年1月—2014年12月在蘇州大學(xué)附屬常州腫瘤醫(yī)院就診的非小細(xì)胞肺癌(NSCLC)患者共計106例作為NSCLC組，其中男69例，女37例，患者中位年齡63(43～78)歲。所有患者均行支氣管鏡活檢、穿刺活檢或手術(shù)切除以獲得病理診斷，其中腺癌64例，鱗癌36例，腺鱗癌6例。參照美國癌癥聯(lián)合會(AJCC) 2017 年第8版NSCLC TNM分期，分為Ⅰ期16例，Ⅱ期30例，Ⅲ期54例，Ⅳ期6例。收集同期36位肺部良性病變(肺炎、肺結(jié)核、炎性假瘤、血管瘤)患者血清作為良性肺疾病組，其中男22例，女14例，中位年齡58(36～75)歲。同時選取本院50例健康體檢者(無心、肝、肺、腎等重要臟器疾患，無腫瘤家族史)的樣本作為健康對照組。上述樣本均經(jīng)醫(yī)學(xué)倫理委員會批準(zhǔn)后收集。

1.2 標(biāo)本采集 健康對照組、良性肺疾病組以及NSCLC組于治療前采集樣本用于相關(guān)腫瘤標(biāo)志物的檢測。于晨起空腹采集靜脈血5ml，3h內(nèi)以3 800rpm/min離心8～10min分離血清，分裝于2個Eppendorf管中(1管用于檢測、另1管用于復(fù)檢)，-20℃冰箱保存，備用。

1.3 血清TK1檢測方法及陽性判斷標(biāo)準(zhǔn) 采用免疫印跡增強化學(xué)發(fā)光法(ECL)進行血清TK1檢測，TK1檢測試劑盒和CIS-1型化學(xué)發(fā)光數(shù)字成像分析儀由深圳市華瑞同康生物技術(shù)有限公司提供；其余常規(guī)腫瘤標(biāo)志物采用2010型RocheElesys自動電化學(xué)發(fā)光免疫法進行檢測，試劑盒均由Roche公司提供。全過程由專人嚴(yán)格按照試劑盒測定說明書進行操作。各腫瘤標(biāo)志物的陽性判斷標(biāo)準(zhǔn)分別為：TK1>2.0pM，CEA>5.0ng/ml， NSE>17.0ng/ml，CYFRA21-1>3.3ng/ml，SCC-Ag>2.5ng/ml。

2 結(jié)果

2.1 NSCLC組與良性肺疾病組、健康對照組TK1水平比較 106例NSCLC患者中有48例(45.28%)血清TK1高于參考值(2.0pM)，平均濃度為(3.074±0.236)pM，顯著高于良性肺疾病組和健康對照組(P<0.001)；而良性肺疾病組與健康對照組相比，差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P=0.078)。見表1。

表1 TK1在NSCLC組、良性肺疾病組與健康對照組之間的水平比較

注：a為NSCLC組與健康對照組比較，b為良性肺疾病組與NSCLC組比較，c為良性肺疾病組與健康對照組比較。

2.2 肺癌患者TK1水平與臨床病理參數(shù)的關(guān)系

TK1水平與患者的年齡、性別、是否吸煙以及淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移狀態(tài)之間無顯著相關(guān)性(P>0.05)；而在腫瘤病理類型、分化程度、 TNM 分期和遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移這些分組中，TK1 水平的差異具有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)。見表2。

表2 TK1水平與肺癌臨床病理參數(shù)之間的相互關(guān)系

注：*P<0.05差異具有統(tǒng)計學(xué)意義。

2.3 肺癌血清腫瘤標(biāo)志物單項與聯(lián)合檢測的比較 由對肺癌患者各項血清腫瘤標(biāo)志物單項檢測的結(jié)果來看，TK1的敏感性和特異性都不是最高的，但是當(dāng)四項聯(lián)合(除TK1)檢測時，敏感性可提高到66.3%；進一步聯(lián)合TK1后，肺癌的診斷敏感性顯著提高到了80.2%。盡管五項聯(lián)合后的診斷特異性有所下降，但是從總體看，TK1聯(lián)合CEA、NSE、CYFRA21-1和SCC-Ag可使NSCLC診斷的準(zhǔn)確性有所提高(78.8%)。見表3。

表3 肺癌血清腫瘤標(biāo)志物單一與聯(lián)合檢測的敏感性、特異性、準(zhǔn)確性比較

3 討論

肺癌是目前中國乃至全球范圍內(nèi)最常見的惡性腫瘤之一，其發(fā)病率和死亡率均居首位[4]，手術(shù)依然是治療NSCLC最有效的方法之一，但由于NSCLC起病隱匿，大部分患者在發(fā)現(xiàn)時已是中晚期，從而喪失了手術(shù)根治的機會。盡管隨著新型化療藥物、免疫治療及分子靶向治療等綜合治療模式的出現(xiàn)，肺癌的治療手段不斷增多，然而肺癌患者5年生存率仍僅有15%左右，總體療效仍不理想[5-6]。因此，肺癌的早期診斷和正確的預(yù)后評估，對肺癌個體化治療方案的制定、肺癌療效和整體生存率的提高具有重要意義。

近年來，血清學(xué)腫瘤標(biāo)志物(TM)作為一種非侵入性診斷腫瘤的手段，相比影像學(xué)和病理學(xué)檢查，具有操作簡便、成本低、創(chuàng)傷小的優(yōu)勢，目前被廣泛應(yīng)用于腫瘤的早期篩查、診斷、預(yù)測療效及患者預(yù)后隨訪[7]。TK1是一種新型的細(xì)胞增殖特異性標(biāo)志物，它是細(xì)胞周期合成期(S期)的關(guān)鍵酶之一，參與DNA合成的嘧啶補救途徑。在正常細(xì)胞中，TK1在細(xì)胞分裂前已被降解，所以正常人血清中的TK1濃度極低或幾乎檢測不到。然而在腫瘤患者體內(nèi)，由于惡性腫瘤細(xì)胞的異常增殖，腫瘤細(xì)胞中DNA合成也隨之劇增，大量TK1被釋放入血，研究表明腫瘤患者血清中的TK1水平含量可達正常人的2～100倍[8]。

本研究檢測發(fā)現(xiàn)NSCLC組患者TK1水平明顯高于良性肺疾病組及健康對照組(P<0.05)，這表明TK1升高與非小細(xì)胞肺癌具有一定的相關(guān)性，提示TK1可作為肺癌篩查的一個重要指標(biāo)。而良性肺疾病組TK1水平雖然高于健康對照組，但差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)，部分良性肺疾病患者TK1水平升高可能與增生性疾病相關(guān)[9]。TK1水平與患者的年齡、性別、是否吸煙以及淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移狀態(tài)之間無顯著相關(guān)性；而與腫瘤病理類型、分化程度、TNM分期、遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移情況顯著相關(guān)(P<0.05)，在肺腺癌、腫瘤低分化、 TNM 分期較晚、存在遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移的患者中，TK1水平明顯升高。這些結(jié)果與現(xiàn)有的研究基本一致，然而在腫瘤病理類型、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移狀態(tài)、TNM分期等因素上還存在一定的爭議。比如，Li等[10]的研究顯示，TK1水平與NSCLC的分期、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移狀態(tài)和腫瘤大小密切相關(guān)。但是Brockenbrough等[11]研究了110名NSCLC患者，發(fā)現(xiàn)TK1濃度與腫瘤細(xì)胞增殖及血管增生程度呈正相關(guān)，而與腫塊大小無關(guān)。 Li等[12]通過研究250名NSCLC患者的TK1，發(fā)現(xiàn)NSCLC患者的TK1水平遠(yuǎn)高于健康人群，出現(xiàn)遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移的患者TK1明顯高于未轉(zhuǎn)移者，而在無遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移的患者中，臨床Ⅲ期TK1水平明顯高于Ⅰ期、Ⅱ期，但與病理類型無關(guān)。不同研究中存在差異的原因可能是由于樣本量的差異所導(dǎo)致的誤差，也有可能是處理血清樣本的方法不同或使用的檢測抗體不同，這些都有可能會影響分析結(jié)果。雖然TK1的表達情況與NSCLC臨床病理特征的關(guān)系還有待進一步探討，但總體來看，TK1的表達水平與NSCLC的惡性程度呈正相關(guān)。

TK1作為一種新的腫瘤標(biāo)志物，因其反映的是體內(nèi)異常增殖細(xì)胞的存在，故在多種腫瘤的臨床診治中，起到越來越重要的作用。劉京生等[13]對TK1在中國人群中對多種腫瘤的診斷性meta分析結(jié)果顯示，血清TK1對正常人群的特異性較高，對肺癌、乳腺癌、胃癌、結(jié)腸癌、食管癌、婦科惡性腫瘤等的診斷僅有中度敏感性，但在實際臨床應(yīng)用中，TK1結(jié)合傳統(tǒng)腫瘤標(biāo)記物聯(lián)合檢測可顯著提高綜合診斷的敏感性與準(zhǔn)確性[14-15]。在本次研究中，由對肺癌患者各項血清腫瘤標(biāo)志物單項檢測的結(jié)果來看，TK1的敏感性和特異性都不是最高的，但是當(dāng)四項聯(lián)合(除TK1)檢測時，敏感性可提高到66.3%；進一步聯(lián)合TK1后，肺癌的診斷敏感性顯著提高到了80.2%。盡管五項聯(lián)合后的診斷特異性有所下降，但是從總體看，TK1聯(lián)合CEA、NSE、CYFRA21-1和SCC-Ag可使NSCLC診斷的準(zhǔn)確性有所提高(78.8%)。

綜上所述，TK1水平與NSCLC的惡性程度密切相關(guān)，但單獨檢測 TK1 無法作為主要的肺癌篩查手段，而將TK1與傳統(tǒng)腫瘤標(biāo)志物進行聯(lián)合檢測，則可以明顯提高NSCLC篩查的敏感性及準(zhǔn)確性，具有一定的輔助診斷作用。