CPEB4在透明細胞性腎細胞癌中的表達及其對細胞株增殖、凋亡和侵襲力的影響

王 靜 周 梅 王書芹 畢 超 呂 輝 禤瑞霞 汪 蕓 包貴賢

廣東省中山市中醫(yī)院病理科，廣東中山 528400

腎細胞癌（RCC）是腎小管上皮細胞中的惡性腫瘤，較為常見的病理類型是透明細胞性腎細胞癌（CCRCC），屬于泌尿系統(tǒng)中較為常見的惡性腫瘤，每年發(fā)病逐年出現(xiàn)遞增趨勢，對人類健康造成了一定威脅[1]。但其對傳統(tǒng)放化療并不敏感，大多患者在確診時已經(jīng)發(fā)生了遠處轉移，目前首選治療方式為手術切除，但這類患者錯過了最佳手術時機，傳統(tǒng)靶向藥物價格較高，因此需要選擇新型的靶向藥物治療，在臨床中具有重要意義[2]。而腫瘤的出現(xiàn)時多基因參與的過程，包括原癌基因的激活、凋亡與侵襲，是正常細胞惡性轉變的過程，在基因的表達中具有重要意義，與癌變存在重要關系[3]。目前多項研究證實CPEB4在腫瘤細胞中存在異常表達，在基因轉錄中存在重要的作用[4]。本文通過將CPEB4納入其中，現(xiàn)報道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料

將80例我院2016年3月～2018年3月收治的80例透明細胞性腎細胞癌患者作為研究組，選取同期我院診治的腫瘤周圍正常腎組織50例為對照組。納入標準：（1）所有患者均經(jīng)過經(jīng)驗病理醫(yī)師確診；（2）均為首次治療，研究前未進行化放療；（3）知情本文研究且愿意參加。排除標準：（1）病檢組織過少，影響檢測結果；（2）合并其他惡性腫瘤者；（3）難以積極溝通交流；（4）臨床資料不完善者。其中研究組：女41例，男39例，年齡38～70歲，平均（45.6±5.5）歲；淋巴結轉移者45例。其中Ⅰ期20例：女10例，男10例，年齡38～70歲，平均（45.2±5.2）歲。Ⅱ期18例：女9例，男9例，年齡38～70歲，平均（45.5±5.4）歲。Ⅲ期20例：女11例，男9例，年齡38～70歲，平均（46.6±5.7）歲。Ⅳ期22例：女12例，男10例，年齡38～70歲，平均（45.1±5.5）歲。對照組：女24例，男26例，年齡38～70歲，平均（45.2±5.3）歲。上述患者一般資料之間比較，差異無統(tǒng)計學意義（P＞0.05），具有可比性。

1.2 方法

用免疫組化的方法，在廣州地區(qū)腎細胞癌石蠟組織中，檢測CPEB4蛋白的表達。使用石蠟切片脫蠟、水化后用PBS沖洗3次，用高壓鍋對組織抗原進行修復，加入3%過氧化氫，以阻斷內(nèi)源性過氧化物酶的活性，并PBS沖洗3次，滴加CPEB4蛋白第一抗體，4℃過夜。磷酸緩沖鹽溶液（PBS）沖洗3次，滴加第二抗體，室溫孵育，PBS沖洗3次，滴加鏈霉素生物素-過氧化物酶，室溫孵育，PBS沖洗3次，滴加DAB溶液，自來水沖洗，蘇木素復染，0.1%氯化氫（HCL）分化，PBS沖洗返藍[5]。

1.3 觀察指標

觀察兩組患者CPEB4表達、細胞存活與遷移距離，及CPEB4在所有患者中的陽性率；并記錄研究組不同患者的CPEB4表達情況[6]。

1.4 統(tǒng)計學處理

采用SPSS19.0統(tǒng)計軟件對本研究數(shù)據(jù)進行分析，計量資料以（）表示，采用t檢驗，計數(shù)資料以[n（%）]表示，采用χ2檢驗，P＜0.05為差異有統(tǒng)計學意義。

2 結果

2.1 兩組間CPEB4表達、細胞存活與遷移距離比較

研究組CPEB4表達高于對照組，且對照組細胞存活率高于研究組，遷移距離低于對照組，差異有統(tǒng)計學意義（P＜0.05），見表1。

表1 兩組間CPEB4表達、細胞存活、遷移距離比較

表1 兩組間CPEB4表達、細胞存活、遷移距離比較

組別 n CPEB4 細胞存活率 遷移距離（cm）對照組 50 0.069±0.011 1.05±0.06 0.68±0.10研究組 80 0.658±0.125 0.52±0.12 0.35±0.05 t-33.191 29.016 24.977 P 0.000 0.000 0.000

2.2 CPEB4在所有患者中的陽性率

其中對照組CPEB4陽性率為10.00%，Ⅳ組患者陽性率最高為100.00%，隨著級別升高患者陽性率隨之升高，差異有統(tǒng)計學意義（P＜0.05），見表2。

表2 CPEB4在所有患者中的陽性率

2.3 研究組不同級別之間的CPEB4表達

Ⅲ～Ⅳ期CPEB4表達高于Ⅰ～Ⅱ期，差異有統(tǒng)計學意義（P＜0.05），見表3。

表3 研究組不同級別之間的CPEB4表達

表3 研究組不同級別之間的CPEB4表達

組別 n CPEB4Ⅰ～Ⅱ期 38 0.423±0.025Ⅲ～Ⅳ期 42 0.746±0.112 t-17.380 P 0.000

2.4 研究組不同性別之間的CPEB4表達

研究組男女性別之間CPEB4表達差異無統(tǒng)計學意義（P＞0.05），見表4。

表4 研究組不同性別之間的CPEB4表達

表4 研究組不同性別之間的CPEB4表達

性別 n CPEB4女性 41 0.725±0.116男性 39 0.726±0.114 t-0.039 P 0.969

2.5 研究組淋巴結轉移者的CPEB4表達

淋巴結轉移者CPEB4表達高于未轉移，差異有統(tǒng)計學意義（P＜0.05），見表5。

表5 研究組淋巴結轉移者CPEB4表達

表5 研究組淋巴結轉移者CPEB4表達

組別 n CPEB4淋巴結轉移者 45 0.711±0.114未轉移 35 0.224±0.111 t 19.173 P 0.000

3 討論

透明細胞性腎細胞癌對于傳統(tǒng)的治療難以達到理想的狀態(tài)，首選的治療方式僅為手術治療，但大多出現(xiàn)錯過了手術時機，使得治療效果并不理想[7-8]。在腫瘤發(fā)展期間，基因的異常表達與細胞的發(fā)展之間存在一定聯(lián)系，是正常細胞惡性轉變的基礎，可正式轉錄后水平的調(diào)控，對基因具有重要的作用，與癌變也存在重要關系[9]。CPEB4對基因轉錄后調(diào)節(jié)起到關鍵作用，可介導干細胞發(fā)育、細胞分化、衰老過程，目前已經(jīng)不斷有研究證實，其在腫瘤細胞中較為異常，但關于其在腫瘤中的作用機制研究較少[10-11]。

本文通過將CPEB4表達納入研究，結果顯示研究組CPEB4表達高于對照組，且對照組細胞存活率高于研究組，遷移距離低于對照組，差異有統(tǒng)計學意義（P＜0.05）。對照組CPEB4陽性率為10.00%，Ⅳ組患者陽性率最高為100.00%，隨著級別升高患者陽性率隨之升高，淋巴結轉移者CPEB4表達高于未轉移，Ⅲ～Ⅳ期CPEB4表達高于Ⅰ～Ⅱ期。研究組男女性別之間CPEB4表達差異無統(tǒng)計學意義（P＞0.05）。CPEB4屬于神經(jīng)細胞存活蛋白，在腫瘤發(fā)展期間中，對基因轉錄后調(diào)節(jié)具有重要作用，可促進腫瘤細胞的生長與血管的生成侵襲[12]。目前已經(jīng)有多項研究證實CPEB4基因可引起基因組變化，誘導基因組的不穩(wěn)定發(fā)生，表明CPEB4蛋白在癌癥發(fā)生期間出現(xiàn)一定作用，可能成為新的治療靶點[13]。目前關于CPEB的研究開始轉向促腫瘤發(fā)生，而CPEB在多個組織與腫瘤中出現(xiàn)高度表達，且部分會出現(xiàn)重疊。CPEB蛋白家族生物功能不止在于調(diào)節(jié)減數(shù)分裂和早期胚胎發(fā)育，在腫瘤的發(fā)展與血管生成中起到重要作用[14]。但臨床仍需要不斷研究CPEBs的靶向基因問題，而隨著研究的不斷深入，CPEB4蛋白可稱為腫瘤領域新的發(fā)展?jié)摿Φ脑\斷治療工具[15]。但由于本研究樣本容量有限，未及時進行后期隨訪調(diào)查，難以進一步證實該研究的準確性；后續(xù)可擴大樣本容量，使得研究更加準確，明確患者治療診斷基礎。而對照組細胞存活率高于研究組，遷移距離低于對照組，能夠說明CPEB的出現(xiàn)對細胞存在一定的侵襲力，加快了患者細胞凋亡情況。

綜上所述，CPEB4在透明透明細胞性腎細胞癌中表達較高，且級別越高患者CPEB4表達越高，為后期臨床治療奠定了基礎，值得應用。