基于硼親和策略的分子印跡技術(shù)研究進(jìn)展

徐 斐 郭 猛 葉 泰 袁 敏 曹 慧 于勁松 袁 然 徐曉喆 史景灝 苑紅恩

(上海理工大學(xué)醫(yī)療器械與食品學(xué)院，上海 200093)

核苷、糖類、多聚糖和糖蛋白等一類含有順式二醇的生物分子在代謝組學(xué)、糖組學(xué)和蛋白質(zhì)組學(xué)等研究領(lǐng)域具有重要意義。但生物樣品中，含有順式二醇的生物分子含量較低，并且高濃度的干擾組分嚴(yán)重影響檢測(cè)的靈敏度和準(zhǔn)確性。因此，針對(duì)具有順式二醇的生物分子的選擇性富集顯得尤為重要。在眾多分離富集方法中，基于與順式二羥基化合物的可逆共價(jià)結(jié)合作用實(shí)現(xiàn)分離富集的硼親和策略引起研究者的廣泛關(guān)注[1]。pH值調(diào)控的可逆共價(jià)結(jié)合作用是硼親和策略實(shí)現(xiàn)選擇性富集的關(guān)鍵，硼酸鹽與順式二醇物質(zhì)的結(jié)合、解離取決于其結(jié)合特性。當(dāng)溶液pH高于硼酸配基的pKa值時(shí)，硼酸鹽可以與含有順式二醇的物質(zhì)形成五元或六元環(huán)酯；當(dāng)溶液pH為酸性時(shí)，硼酸—順式二醇復(fù)合物自動(dòng)解離。這種可逆的共價(jià)結(jié)合作用，賦予硼親和材料廣譜選擇性、pH調(diào)控結(jié)合與釋放、較快的解吸速度等特性。但是，傳統(tǒng)硼親和材料也存在一些局限性：硼酸配基較高的pKa值，導(dǎo)致只能在堿性條件下才能實(shí)現(xiàn)共價(jià)結(jié)合作用，生物兼容性較差；選擇性較差，由于硼酸配基對(duì)順式二醇結(jié)構(gòu)的廣譜性識(shí)別，無法滿足對(duì)特定目標(biāo)的選擇性富集；親和力較低，大多數(shù)硼基材料Kd值為10-5～10-7，低豐度靶標(biāo)富集時(shí)易受干擾。

分子印跡技術(shù)(molecular imprinted technology，MIT)是以特定的分子作為模板，通過與功能單體相互作用形成配合物，經(jīng)過聚合、洗脫，在聚合物表面或內(nèi)部形成具有選擇性的識(shí)別空腔[2]。分子印跡聚合物空腔的可設(shè)計(jì)性，特異性識(shí)別能力在純化和分離[3]、化學(xué)/生物傳感器[4]、抗體的生物識(shí)別[5-6]和藥物的識(shí)別與釋放[7]等領(lǐng)域受到廣泛關(guān)注。根據(jù)印跡方式，分子印跡通常分為共價(jià)[8]和非共價(jià)鍵印跡[9]，其中非共價(jià)鍵印跡可以針對(duì)模板分子進(jìn)行功能單體的選擇與設(shè)計(jì)，但預(yù)聚合中的動(dòng)態(tài)平衡會(huì)導(dǎo)致聚合過程中形成大量非均一的印跡位點(diǎn)；傳統(tǒng)的共價(jià)鍵印跡方法雖然能夠獲得均一的印跡位點(diǎn)，但模板分子不易被去除，吸附位點(diǎn)較少。

因此，將硼親和策略與分子印跡技術(shù)相結(jié)合，硼親和的可逆共價(jià)結(jié)合反應(yīng)有利于模板分子的印跡與去除[10-13]；同時(shí)，分子印跡所構(gòu)筑的選擇性空腔[14]，不僅能提高硼親和材料的選擇性能，利用納米尺寸印跡空腔的限域效應(yīng)[15-16]，還可以進(jìn)一步提高硼基材料對(duì)含有順式二醇結(jié)構(gòu)分子的親和能力，實(shí)現(xiàn)快速、穩(wěn)定、有選擇性的富集含有順式二醇的生物分子。結(jié)合最新的研究，文章總結(jié)硼親和分子印跡技術(shù)在富集核苷、糖類、多聚糖和糖蛋白等方面的研究進(jìn)展，并對(duì)該技術(shù)的發(fā)展前景進(jìn)行展望，旨在拓寬分子印跡技術(shù)的應(yīng)用范圍。

1 硼親和分子印跡技術(shù)的應(yīng)用進(jìn)展

1.1 核苷酸檢測(cè)

核苷酸是DNA和RNA的重要組成部分，為生命體細(xì)胞代謝提供了信息，其在血液中的含量也可用于評(píng)估氧化應(yīng)激[17]。由于核苷酸分子量較小，而且能夠用于反應(yīng)結(jié)合的官能團(tuán)也較少，因此研究出一種能夠高效、特異性富集分離核苷酸的方法顯得尤為重要。

利用制備分子印跡聚合物時(shí)所形成的選擇性空腔，可以特異性識(shí)別模板核苷酸[18]，Longo等[19]以乙酰乙酸甲酯(MAA)為功能單體，9-乙基腺嘌呤(9-EA)為模板分子，乙二醇二甲基丙烯酸酯(EGDMA)與N,N-(1,2-亞苯基)二(2-甲基-2-甲基丙酰胺)(PDBMP)分別作為交聯(lián)劑與引發(fā)劑進(jìn)行引發(fā)聚合，制備了含有腺嘌呤識(shí)別位點(diǎn)的分子印跡聚合物(MIP)，制備的MIP雖然具有較好的吸附容量和較高的印跡因子，但達(dá)到吸附平衡的時(shí)間較長(zhǎng)(35 min)，且聚合環(huán)境中有毒試劑較多。Nesim等[20]制備了一種丙烯酰胺苯基硼酸分子印跡聚合物，用于選擇性富集核苷酸。以苯硼酸化的丙烯酸為功能單體，過硫酸銨為交聯(lián)劑，相應(yīng)的核糖核苷酸鈉鹽作為模板分子，通過電聚合方式在金電極表面形成核苷酸印跡膜，這種利用電聚合方式制備的印跡膜吸附容量可達(dá)76 mg/g，印跡因子為8.6，具有很好的選擇性。同時(shí)溶液中的腺嘌呤濃度達(dá)到納摩爾水平就可以產(chǎn)生明顯的電信號(hào)，表明該方法具有很好的靈敏度，同時(shí)聚合環(huán)境中有毒試劑較少。

為了進(jìn)一步提高印跡聚合物的熱穩(wěn)定性和對(duì)核苷的吸附效果，Hu等[21]制備了一種具備高吸附能力的MIPs(硼酸鹽親和核殼結(jié)構(gòu)分子印跡)，以胞苷、尿苷、肌苷、鳥苷為模板分子，氨基苯硼酸(APBA)改性的MAA為功能單體，二氧化硅為載體，EDGMA為交聯(lián)劑制備了印跡聚合物，結(jié)果表明MIPs在300 ℃以下具有良好的穩(wěn)定性，在600 ℃以上完全分解。通過HPLC固相萃取柱分析得出，當(dāng)使用5%三氟乙酸/乙腈(7∶3，體積比)混合溶液為洗脫液，洗脫液體積為0.4 mL時(shí)，洗脫后溶液中模板分子的峰面積最高，相對(duì)應(yīng)的峰面積達(dá)1.79×105，1.40×106，表明該條件下的洗脫環(huán)境最好。當(dāng)樣品pH為9時(shí)，吸附后通過液相方法分析，核苷峰面積最高為1.57×105，表明該條件下MIPs的吸附效果最好，同時(shí)所使用的載體二氧化硅具有特殊的中間結(jié)構(gòu)，具有較大的比表面積，在通過SPE柱時(shí)，可以吸附更多的模板分子，吸附效率進(jìn)一步提高。

1.2 糖類及其衍生物檢測(cè)

糖類是一類重要的生物分子，在實(shí)際應(yīng)用中具有重要的作用。大多數(shù)糖類只有一種具有不同立體化學(xué)性質(zhì)的官能團(tuán)(羥基)，使得其對(duì)不同糖類的識(shí)別極為困難。苯硼酸對(duì)于含有順式二羥基的物質(zhì)具有很好的親和力，能夠快速與糖類物質(zhì)結(jié)合，分子印跡技術(shù)可以賦予這個(gè)過程以選擇性[22]。Tan等[23]以D-果糖與D-木糖為模板分子，硼酸改性的3-異氰酸根合丙基三乙氧基硅烷作為功能單體，利用硼親和表面分子印跡策略制備了一種表面熒光分子印跡傳感器，用于選擇性分離糖類。試驗(yàn)中利用四乙氧基硅烷(TEOS)在堿性條件下縮合形成的SiO2為載體，結(jié)合硼親和分子印跡技術(shù)，制備得到了一種雙模板分子印跡聚合物。與以往的果糖—木糖分子印跡聚合物(吸附容量18.7 mg/g)相比，制備出的表面分子印跡聚合物的吸附容量達(dá)32 mg/g，由于表面分子印跡聚合物的表面具有更多的吸附位點(diǎn)與印跡空腔，同時(shí)在引入3-異氰酸根合丙基三乙氧基硅烷后，可以通過熒光的變化更方便地判斷模板分子是否被洗脫下來，為判斷模板分子是否洗脫完全提供了有利條件。

為了進(jìn)一步提高印跡聚合物對(duì)模板分子的選擇性和靈敏度，Bhavana等[24]以果糖為模板分子，先將果糖與三氨基苯硼酸(APBA)預(yù)結(jié)合，在氟化物存在的情況下，采用電聚合方式使APBA在電極表面自聚得到果糖分子印跡聚合物，相比以往制備的印跡聚合物，這種利用電聚合方式制備得到的印跡聚合物對(duì)D-果糖的選擇性提高了25%，由于印跡膜附著在電極表面，提高了對(duì)D-果糖的檢測(cè)靈敏度。

葡萄糖是生物進(jìn)行生命活動(dòng)的能量來源，同時(shí)也是糖尿病的檢測(cè)目標(biāo)。多數(shù)單糖除了立體結(jié)構(gòu)的差異外并沒有其他結(jié)構(gòu)區(qū)別，因此很難將葡萄糖與其他單糖區(qū)分開來。Chen等[25]制備了一種光引發(fā)的硼酸親和分子印跡生物相容性探針，用于葡萄糖的特異性檢測(cè)，以4-乙烯基苯硼酸(VPBA)為功能單體，葡萄糖為模板分子，聚乙二醇為致孔劑，聚乙二醇二丙烯酸酯為交聯(lián)劑，Irgacure 184為紫外線引發(fā)劑，自聚方式制備了親水性MIP。在紫外引發(fā)聚合前將預(yù)聚物置于毛細(xì)管中，聚合結(jié)束后可以得到涂覆有MIP印跡層的毛細(xì)管探針。制備得到的MIP具有很好的親水性，MIP與葡萄糖的結(jié)合常數(shù)比其他簡(jiǎn)單苯基硼酸與葡萄糖的結(jié)合常數(shù)高3個(gè)數(shù)量級(jí)，吸附容量達(dá)380 μg/g，GC-MS檢測(cè)葡萄糖的檢測(cè)限為0.7 μmol/L，遠(yuǎn)遠(yuǎn)優(yōu)于以往的檢測(cè)器，因此在分析實(shí)際樣品時(shí)可以充分稀釋，降低復(fù)雜基質(zhì)干擾。制備過程簡(jiǎn)單，同時(shí)可以準(zhǔn)確控制探針表面的印跡層厚度，可以快速檢測(cè)生物流體和半固體生物組織中的葡萄糖。Muhammad等[26]制備了一種基于硼親和的微萃取探針，將印跡層印跡涂覆在有拉曼活性銀納米粒子的鍍金探針表面，再將探針插入待檢測(cè)的植物組織內(nèi)，在葡萄糖或果糖與硼酸反應(yīng)形成環(huán)酯后，再對(duì)探針表面進(jìn)行分析。制備得到的探針具有較低的檢測(cè)限(1 μg/mL)，檢測(cè)時(shí)間為20 min，探針表面的MIP對(duì)葡萄糖與果糖的印跡因子高達(dá)12.9，相互作用強(qiáng)度達(dá)6.5×104mol/L，探針在緩沖液中存儲(chǔ)2個(gè)月后仍具有較高的穩(wěn)定性，其信號(hào)強(qiáng)度僅降低了14%，該探針可以快速檢測(cè)一些藥用植物以及草藥植物組織中的一些功能性物質(zhì)(含有順式二醇結(jié)構(gòu))，并不僅僅局限于單糖類化合物。

1.3 糖蛋白分離富集與檢測(cè)

蛋白質(zhì)分子印跡一直以來都是研究的熱點(diǎn)[27]，由于較大的尺寸導(dǎo)致蛋白質(zhì)難以從高度交聯(lián)的聚合物網(wǎng)絡(luò)中去除，蛋白質(zhì)空間結(jié)構(gòu)對(duì)環(huán)境的敏感性和大量潛在相互作用位點(diǎn)可能影響印跡聚合物的交叉反應(yīng)性和非特異性吸附[28]。為了克服這些缺陷，研究提出了多種印跡方法，如表面印跡[29]、表位印跡[30]、皮克林乳液聚合[31]、分級(jí)印跡[32]等印跡策略。其中表面/表位印跡是一種將印跡結(jié)合位點(diǎn)錨定在載體表面的方法，可以改善模板蛋白難以被去除的問題。但蛋白質(zhì)結(jié)構(gòu)對(duì)環(huán)境的敏感性、印跡過程中可能出現(xiàn)的交叉反應(yīng)性及非特異性吸附仍未得到解決。將硼親和策略引入蛋白分子印跡中，能夠在保證蛋白結(jié)構(gòu)的同時(shí)有效提高印跡的選擇性。硼酸與糖蛋白的共價(jià)結(jié)合屬于可逆反應(yīng)，當(dāng)溶液pH高于硼酸單體的pKa時(shí)，硼酸與糖蛋白形成共價(jià)復(fù)合物；當(dāng)溶液pH低于硼酸的pKa值時(shí)，復(fù)合物自動(dòng)解離，因此只需挑選合適的硼酸作為功能單體，制備出的分子印跡聚合物可以很好地選擇性分離富集糖蛋白，同時(shí)苯硼酸自身的親水性以及生物相容性也是其適用于生物分子印跡的一個(gè)重要因素[10,33-34]。

Li等[35]報(bào)道了基于硼酸鹽的糖蛋白表面印跡方法，以苯胺、3-氨基苯硼酸(APBA)和丙烯酸連續(xù)改性的磁性Fe3O4@Au納米顆粒(NPs)作為芯材料，引入硼酸和可聚合雙鍵，以辣根過氧化物酶(HRP)為模板，通過單體在多功能NPs表面上的自由基誘導(dǎo)接枝共聚制備蛋白印跡薄膜。該條件下制備的分子印跡聚合物具有較高的印跡因子(7.80)，較高的吸附容量(38 mg/g)。MIP在90 min內(nèi)達(dá)到0.3 mg/mL的飽和吸附，而非印跡聚合物則需要220 min。將制備的MIP涂覆在電極表面可用于電化學(xué)檢測(cè)辣根過氧化物酶(HRP)，在0.01～0.30 mg/mL 的濃度范圍內(nèi)具有良好的線性關(guān)系，該方法的檢出限為0.005 mg/mL。

為了進(jìn)一步提高印跡聚合物對(duì)蛋白質(zhì)的選擇性，Li等[36]利用光引發(fā)硼酸鹽親和分子印跡用于分離富集糖蛋白，將模板蛋白與乙烯基苯硼酸在pH≥8.0的適當(dāng)致孔劑溶液中混合形成預(yù)聚物，將預(yù)聚物與交聯(lián)劑(PEGDA)和適當(dāng)?shù)腢V引發(fā)劑混合，然后通過UV引發(fā)的自由基聚合方式，使預(yù)聚物快速聚合成聚合物，再使用適當(dāng)?shù)乃嵝匀芤合疵撃０宸肿?，留下與模板相對(duì)應(yīng)的三維印跡空腔，制備好的印跡聚合物特異選擇性強(qiáng)，印跡因子為9.2。通常基于硼親和的分子印跡需在堿性環(huán)境下才能實(shí)現(xiàn)對(duì)含有順式二醇結(jié)構(gòu)分子的識(shí)別，但通過UV引發(fā)制備出的MIP可以在pH為6的環(huán)境中對(duì)模板分子有明顯的親和力，可檢測(cè)到模板蛋白的存在，拓寬了MIP的pH范圍，無需對(duì)樣品進(jìn)行預(yù)處理。

同時(shí)，糖蛋白在多種生命活動(dòng)中起著至關(guān)重要的作用，是疾病診斷和治療靶標(biāo)的重要生物標(biāo)志物。但糖蛋白在體內(nèi)的豐度很低，且干擾物質(zhì)濃度較高。因此，開發(fā)出一種快速、準(zhǔn)確識(shí)別目標(biāo)糖蛋白，具有高度靈敏度的方法顯得尤為重要。Sun等[37]將分子印跡技術(shù)與硼親和相結(jié)合，制備了一種紙基電化學(xué)生物傳感器，用于檢測(cè)卵清蛋白(OVA)。先對(duì)載體二氧化硅進(jìn)行一系列的修飾得到SiO2@An/dsDNA/CeO2作為電化學(xué)檢測(cè)時(shí)的信號(hào)標(biāo)簽，然后以4-巰基苯硼酸為功能單體制備糖蛋白印跡膜，最后將印跡膜附在電極表面進(jìn)行電化學(xué)分析。制備出的電化學(xué)傳感器可以用于檢測(cè)1 pg/mL～1 000 ng/mL線性范圍內(nèi)的OVA，檢測(cè)限較低(0.87 pg/mL)，對(duì)于臨床診斷以及其他相關(guān)領(lǐng)域具有良好的應(yīng)用前景。Zhu等[38]制備了一種硼親和分子印跡聚合物，以更好的特異性分離富集卵清蛋白。首先通過蒸餾—沉淀聚合法制備四氧化三鐵@甲基丙烯酸縮水甘油酯納米粒子作為分子印跡載體，然后將氨基苯硼酸與乙二胺通過形成的B-N配位絡(luò)合物固定在四氧化三鐵@甲基丙烯酸縮水甘油酯納米粒子表面作為功能單體，最后加入模板蛋白，通過自聚合形成印跡層。制備的印跡聚合物不僅可以利用自身硼親和作用吸附/解吸模板蛋白，同時(shí)其磁性特征可以在外加磁場(chǎng)時(shí)分離，重復(fù)利用性較好，制備的印跡聚合物對(duì)OVA的吸附容量達(dá)230.8 mg/g，印跡因子為7.51，同時(shí)印跡聚合物在弱酸至弱堿性溶液中表現(xiàn)出較好的吸附性能，說明制備的印跡聚合物在生理?xiàng)l件下的復(fù)雜實(shí)際樣品具有很好的應(yīng)用前景。

1.4 細(xì)菌檢測(cè)

細(xì)菌感染會(huì)造成嚴(yán)重的健康威脅，因此實(shí)現(xiàn)細(xì)菌病原體的早期檢測(cè)和鑒定顯得尤為重要。目前大多數(shù)檢測(cè)方法是將抗體和親和肽作為識(shí)別原件，但是抗體和親和肽制備成本高、步驟繁多且貯存穩(wěn)定性較差，同時(shí)還需配備精密的檢測(cè)儀器和專業(yè)的試驗(yàn)人員。分子印跡聚合物由于制備過程相對(duì)簡(jiǎn)單，良好的穩(wěn)定性已被用于細(xì)菌的選擇性檢測(cè)[39]，且細(xì)菌表面存在大量富含順式二醇的物質(zhì)如磷壁酸、肽聚糖和細(xì)菌外壁上的脂多糖，易于通過硼親和策略實(shí)現(xiàn)對(duì)細(xì)菌的識(shí)別。Mohsen等[40]以間氨基苯硼酸(3-PBA)為功能單體，葡萄糖球菌為模板細(xì)菌，采用電化學(xué)聚合的方法在電極表面制備出細(xì)菌印跡聚合物(CIP)，采用果糖的競(jìng)爭(zhēng)性置換去除模板細(xì)菌。結(jié)果表明，CIP生物傳感器在檢測(cè)葡萄糖球菌時(shí)，在103～107CFU/mL 的濃度范圍內(nèi)表現(xiàn)出良好的線性關(guān)系?；贑IP的分子印跡傳感器在濃度為10 CFU/mL情況下對(duì)檢測(cè)模板細(xì)菌仍有響應(yīng)，而NIP基本無響應(yīng)，說明CIP在制備過程中形成了對(duì)模板細(xì)菌識(shí)別的印跡空腔，同時(shí)采用競(jìng)爭(zhēng)性方法去除模板細(xì)菌，不會(huì)對(duì)細(xì)菌活性結(jié)構(gòu)產(chǎn)生影響。

1.5 細(xì)胞檢測(cè)

癌癥是目前致死率最高的一類疾病，由癌癥導(dǎo)致死亡的90%都是因?yàn)榘┘?xì)胞發(fā)生了轉(zhuǎn)移，因此，在人體血液中對(duì)癌細(xì)胞進(jìn)行檢測(cè)和隔離對(duì)于早期的診斷和治療具有重要意義。用于分離細(xì)胞的技術(shù)大都基于細(xì)胞的物理或化學(xué)性質(zhì)[41]，常規(guī)的方法有密度梯度離心[42]、介電電泳[43]，或是基于細(xì)胞大小、密度、電荷或遷移性質(zhì)[44]，這些方法缺乏特異性，而用于特異性檢測(cè)某種癌細(xì)胞的方法大都依賴于生物識(shí)別分子，尤其是抗體，但生物識(shí)別分子難以制備以及保存穩(wěn)定性差(易失活)。癌變時(shí)，細(xì)胞表面通常會(huì)發(fā)生糖基化現(xiàn)象，可以利用硼酸對(duì)于這種含有順式二醇的糖類化合物具有的親和力將硼親和與分子印跡結(jié)合起來，用于分離和檢測(cè)癌細(xì)胞[45]。Wang等[46]制備了一種單糖熒光分子印跡聚合物用于靶向識(shí)別癌細(xì)胞，以硼酸修飾的二氧化硅熒光納米粒子為載體，分別以唾液酸、巖藻糖和甘露糖為模板分子，四乙氧基硅烷為交聯(lián)劑，利用硼親和分子印跡技術(shù)制備了不同模板印跡的二氧化硅熒光納米粒子(MIP)，用于癌細(xì)胞的靶向識(shí)別與熒光成像，試驗(yàn)中未加入模板分子制備得到NIP。結(jié)果表明，在干擾細(xì)胞與癌細(xì)胞同時(shí)存在的情況下，MIP與癌細(xì)胞結(jié)合后呈現(xiàn)強(qiáng)熒光，而干擾細(xì)胞則無熒光，使用NIP作用兩種細(xì)胞時(shí)，在熒光成像下均無熒光，這種方法有利于癌細(xì)胞檢測(cè)，在對(duì)MIP與NIP染色后，印跡聚合物同樣可以作為癌細(xì)胞成像的工具。相比常規(guī)的細(xì)胞檢測(cè)手段，印跡聚合物易制備，具有良好的保存穩(wěn)定性，尤其是在引入熒光色素后，為檢測(cè)癌細(xì)胞的靶向識(shí)別與成像提供了有利條件。

將硼親和分子印跡與表面增強(qiáng)拉曼散射技術(shù)(SERS)相結(jié)合，Yin等[47]以唾液酸(SA)為模板分子，以具有表面增強(qiáng)拉曼效應(yīng)的銀納米粒子(AgNPs)為載體，通過TEOS(交聯(lián)劑)在含有氨水的乙醇溶液中縮聚反應(yīng)得到表面分子印跡聚合物，用于識(shí)別表面含有唾液酸殘基的癌細(xì)胞，從而針對(duì)正常細(xì)胞、癌細(xì)胞和組織進(jìn)行選擇性成像。將SA印跡的銀納米粒子與癌細(xì)胞和正常細(xì)胞分別作用一段時(shí)間后，癌細(xì)胞出現(xiàn)很強(qiáng)的SERS信號(hào)，而正常細(xì)胞基本無信號(hào)?；谂鹩H和分子印跡制備的SERS探針克服了使用傳統(tǒng)抗體探針難于制備、易于降解的缺點(diǎn)，改變SERS探針中的印跡模板可以擴(kuò)展到其他癌癥標(biāo)記物的識(shí)別與成像。為更靈敏地檢測(cè)癌變細(xì)胞表面的唾液酸，Shinde等[48]制備了一種熒光核殼結(jié)構(gòu)的分子印跡聚合物，以SA為模板分子，乙烯基苯硼酸為功能單體，EDGNA為交聯(lián)劑，硝基苯并惡二唑?yàn)闊晒鈽?biāo)記基團(tuán)，采用自由基聚合方式制備得到MIP，結(jié)果表明，MIP與SA的相互作用強(qiáng)度達(dá)6.6×105mol/L，而葡萄糖醛酸及其他單糖與MIP的相互作用強(qiáng)度最高為1.8×105mol/L，在細(xì)胞成像試驗(yàn)中，表面有唾液酸表達(dá)形成聚糖的細(xì)胞會(huì)被染色聚集，而正常細(xì)胞沒有這種現(xiàn)象，該方法可應(yīng)用于低濃度的唾液酸檢測(cè)，具有較好的臨床應(yīng)用價(jià)值。

2 硼親和分子印跡技術(shù)的發(fā)展方向

目前關(guān)于核苷酸、細(xì)菌、細(xì)胞等物質(zhì)的分子印跡技術(shù)雖然已經(jīng)有了較為長(zhǎng)遠(yuǎn)的發(fā)展，但是由于此類物質(zhì)本身并未含有較多可以印跡的官能團(tuán)，因此印跡效果不理想，硼親和策略的引入使得分子印跡技術(shù)在方法學(xué)上被推向了新的高度，高效、準(zhǔn)確、可控的優(yōu)點(diǎn)，使得硼親和分子印跡成為了研究熱點(diǎn)。藥物分析、疾病診斷、癌細(xì)胞的成像與靶向治療等方面的應(yīng)用，使得硼親和分子印跡技術(shù)的發(fā)展方向不再局限于某一類化學(xué)物質(zhì)的檢測(cè)，同樣可以應(yīng)用于臨床等方面(抗體的高效、選擇性萃取、酶活性分析等)。

3 總結(jié)

基于硼親和分子印跡技術(shù)的迅速發(fā)展，尤其是對(duì)核苷酸、糖、糖蛋白、細(xì)胞和細(xì)菌識(shí)別及富集中具有顯著的優(yōu)勢(shì)。但硼親和分子印跡技術(shù)仍存在不足，主要體現(xiàn)在：① 在制備硼親和分子印跡過程中仍需加入氟化鈉、過硫酸銨等有毒有害試劑，試驗(yàn)大都在有機(jī)相中進(jìn)行，而用于水相印跡的體系較少，同時(shí)如何實(shí)現(xiàn)印跡層的可控制備和定向印跡仍需進(jìn)一步研究。② 硼親和分子印跡技術(shù)目前僅限于含有順式二醇結(jié)構(gòu)的物質(zhì)，如何拓展到其他分子或離子印跡中仍有待研究。③ 進(jìn)一步拓展硼親和分子印跡聚合物在不同光電傳質(zhì)界面上的應(yīng)用。