牛的人工授精操作和妊娠鑒定

趙高峰

（周口市動(dòng)物疫病控制中心，河南 周口 466000）

1 精液的收集和處理

可使用假陰道或電刺激射精法（即電刺激精囊和壺腹部）來(lái)采集公牛的精液。只要樣本的質(zhì)量較高，精子耐凍性和受胎率都應(yīng)當(dāng)正常。但對(duì)由于基因問(wèn)題不能通過(guò)自然交配使母牛受孕的公牛，不應(yīng)采用這種技術(shù)。

目前牛的人工授精大多數(shù)采用冷凍精液。冷凍精液可保質(zhì)數(shù)年。單次采集精液后使用精液稀釋液可以增加輸精劑量、延長(zhǎng)精液受胎率的保持時(shí)間、保護(hù)精子細(xì)胞使之免受溫度或pH突然改變?cè)斐傻挠绊?，并延長(zhǎng)精子的存活時(shí)間。精液的稀釋一般都采用在檸檬酸鹽緩沖卵黃稀釋液或經(jīng)熱處理的脫脂乳中，加入甘油、糖、酶和抗生素。在冷凍時(shí)，最終將精液稀釋、分裝為每管0.5 mL，內(nèi)含有2 000～3 000萬(wàn)個(gè)精子。精液稀釋液一般都包含有A液和B液。

精液稀釋的第一步是在相同溫度下，如30℃，使用A液進(jìn)行稀釋。然后將稀釋后的精液在40～50 min或更長(zhǎng)時(shí)間內(nèi)冷卻至5℃。將稀釋后的精液在該溫度下保持3～4 h，以保證A液中的抗生素在被冷凍保護(hù)劑甘油抑制之前能夠完全發(fā)揮作用。B液中含有甘油（如14%），在5℃下按同等體積加入至稀釋后的精液中。每個(gè)人工授精中心有其標(biāo)準(zhǔn)稀釋液和操作程序。在以牛乳為基礎(chǔ)的稀釋液中可加入甘油（11%～13%）。在冷凍之前應(yīng)當(dāng)將精液置于5℃下保持4～18 h。

為進(jìn)行冷凍，通常將公牛精液分裝在有適當(dāng)標(biāo)識(shí)的塑料管中（0.25或0.5 mL）。許多類型的細(xì)胞都已知有最佳凍存速率，而精子細(xì)胞可耐受的凍存速率比較寬泛。在生產(chǎn)實(shí)踐中，首先將稀釋后的精液置于液氮蒸汽進(jìn)行冷凍，然后再放入液氮中（-196℃）。精液可以在液氮罐中安全貯存＞20年，在運(yùn)輸時(shí)也要將精液置于液氮罐中。必須對(duì)液氮罐中液氮量加以注意，以免在液氮罐損壞或液氮逐漸蒸發(fā)時(shí)出現(xiàn)精子死亡。由于精子細(xì)胞在解凍后存活時(shí)間較短，因此最好精液解凍后應(yīng)立即使用。精液解凍應(yīng)盡快進(jìn)行以避免因過(guò)熱而造成精液損失。在生產(chǎn)實(shí)際中，可以將凍精管放在溫水中（35～36.5℃）≥30 s，進(jìn)行解凍，然后立刻將精液輸入母牛生殖道內(nèi)。應(yīng)遵循處理精液的人工授精中心提供的操作規(guī)范。

2 人工輸精技術(shù)

用一次性毛巾徹底清洗外生殖器，然后一只手戴上手套后插入直腸內(nèi)，握住子宮頸。將裝有精液的輸精管通過(guò)外陰和陰道直接插入子宮頸外口。通過(guò)子宮頸上的操作，隨著輕輕按壓輸精管尖端，即可將輸精管穿過(guò)子宮頸皺襞進(jìn)入宮頸口與子宮的交界處。應(yīng)當(dāng)緩慢輸注精液（5 s），以避免造成精子死亡。最佳授精時(shí)間是發(fā)情期的后半期到隨后的6 h之內(nèi)。

雖然高受孕率與除精液之外的許多因素相關(guān)，但如果在人工授精時(shí)出現(xiàn)受孕問(wèn)題，就應(yīng)當(dāng)對(duì)精液進(jìn)行檢查。解凍后精子的運(yùn)動(dòng)力是一個(gè)重要指標(biāo)。在人工授精時(shí)注入足夠數(shù)量的活精子細(xì)胞是至關(guān)重要的。檢查精子細(xì)胞的形態(tài)也有助于評(píng)估不孕癥中精子的作用。在牛群內(nèi)，對(duì)使用可疑精液和使用其他公牛精液的妊娠鑒定情況進(jìn)行比較是十分有用的。發(fā)情鑒定仍然是影響人工授精效率的最重要因素。最先檢查的應(yīng)當(dāng)是發(fā)情鑒定，其他的檢查包括解凍溫度、實(shí)際輸精時(shí)的解凍時(shí)間、從解凍到輸精的溫度變化、輸精的部位和速度，以及衛(wèi)生消毒程序。如果采購(gòu)的精液來(lái)源于信譽(yù)良好的供應(yīng)商，不孕通常不會(huì)是由于精液質(zhì)量問(wèn)題造成的。

3 妊娠鑒定

要實(shí)現(xiàn)繁殖效率的最大化，建議進(jìn)行妊娠鑒定。以肉牛為例，肉牛群的理想繁殖期（無(wú)論采用自然交配，還是人工授精）應(yīng)固定在60～70 d。在此期間，一般母牛都會(huì)有2～3次配種妊娠的機(jī)會(huì)。應(yīng)當(dāng)鑒別出未妊娠或仍然需要配種的母牛；如果將這些牛仍然飼養(yǎng)在牛群中，以后還可能會(huì)產(chǎn)犢。這些母牛的維持成本很高但很重要，且不同牛場(chǎng)和不同年份差異很大。

肉牛的妊娠鑒定應(yīng)當(dāng)在配種期結(jié)束后立即（如45～60 d）進(jìn)行。如果配種期是在6月1初開(kāi)始、8月初結(jié)束，那么就應(yīng)在9月下旬開(kāi)始進(jìn)行妊娠鑒定，此時(shí)牛群還在繼續(xù)享用豐盛的夏季牧草。然后，可能會(huì)在昂貴的冬季飼養(yǎng)開(kāi)始前出售未妊娠的母牛。先對(duì)奶牛進(jìn)行檢查以確定其妊娠狀態(tài)，以及是否要使用前列腺素F2α對(duì)未妊娠母牛進(jìn)行同期發(fā)情，或定時(shí)進(jìn)行人工授精。對(duì)未妊娠母牛或尚未進(jìn)行發(fā)情檢查的母牛，則通過(guò)評(píng)估卵巢中的黃體、卵泡和卵巢囊腫來(lái)決定使用哪種激素來(lái)誘導(dǎo)發(fā)情。妊娠鑒定和卵巢檢查最常用的方法是直腸觸診。而最近應(yīng)用更為普遍的一種替代方法是超聲檢查法。超聲檢查法具有以下優(yōu)點(diǎn)：可以較早檢查出非妊娠母牛（配種后28～32 d），也可以獲得卵巢和子宮狀態(tài)的診斷信息?？梢栽u(píng)估胚胎或胎兒的活力?？梢愿菀讬z查到雙胞胎?？梢源_定胎兒的性別。可以更準(zhǔn)確地確定胎兒月齡。可以顯示妊娠牛的孕體。

在對(duì)母牛進(jìn)行妊娠鑒定時(shí)，可考慮同時(shí)進(jìn)行牛群的其他健康檢查。這些檢查項(xiàng)目包括評(píng)估體況、生殖道、乳頭和乳房、腿部和蹄部、口腔的早期病變。此時(shí)還可以進(jìn)行疫苗免疫接種、體內(nèi)和體外寄生蟲(chóng)的控制以及肉用牛犢的處理。