HPLC法同時(shí)測(cè)定降脂活血片中的有效成分含量分析

河南省許昌市食品藥品檢驗(yàn)檢測(cè)中心（461000）劉俊波 常曉平

河南省食品藥品檢驗(yàn)所（450000）徐金玲

現(xiàn)代藥理研究顯示，降脂活血片不僅可擴(kuò)張血管，降低心肌耗氧量，調(diào)節(jié)血脂，改善血液循環(huán)，還可補(bǔ)益肝腎，扶正固本，標(biāo)本兼治，適用于脂肪肝、高脂血癥、高粘血癥及冠心病等[1]。本文探討研究了HPLC法同時(shí)測(cè)定降脂活血片中的有效成分含量的應(yīng)用價(jià)值，現(xiàn)匯報(bào)如下。

1 材料與儀器

1.1 材料 降脂活血片，恩施自治州中心醫(yī)院制劑室，批號(hào)2015090，包含十二味中藥，如葛根、丹參、黃芪、枸杞子及何首烏等。對(duì)照品丹酚酸B，中國(guó)食品藥品檢定研究院，批號(hào)111562-201313。對(duì)照品葛根素，成都曼恩特生物科技有限公司，批號(hào)MUST-16011207。對(duì)照品二苯乙烯苷，成都曼恩特生物科技有限公司，批號(hào)MUST-15072915。

1.2 儀器與試劑 儀器：①UItimate3000高效液相色譜儀，UV檢測(cè)器、四梯度混合泵以及Chromleon工作站。②德國(guó)生產(chǎn)的Eppendorf Centrifuge 5427R低溫高速離心機(jī)。③日本島津AUW-120D電子分析天平。④北京普析通用GWA-UN超純水機(jī)。⑤廣州科盟KM-36C超聲波清洗機(jī)。試劑：①甲醇，色譜純，德國(guó)默克公司提供。②乙腈，色譜純，德國(guó)默克公司提供。③磷酸，分析純，武漢市中天化工有限責(zé)任公司提供。④水，自制超純水。

2 方法與結(jié)果

2.1 色譜條件 色譜柱：Diamonsil C18（250mm×4.6mm，5um）；柱溫：35℃；流速：1.0ml/min；進(jìn)樣體積：10ul；檢測(cè)波長(zhǎng)：286nm。其中，流動(dòng)相A為0.1%磷酸水，流動(dòng)相B為乙腈。

2.2 制備對(duì)照品溶液 精密稱(chēng)取適量葛根素、二苯乙烯苷及丹酚酸B對(duì)照品，添加甲醇，制作為每1ml含有1.027mg二苯乙烯苷、1.048mg丹酚酸B、1.097mg葛根素的溶液。精密吸取上述3種溶液，添加甲醇稀釋?zhuān)谱鞒擅?ml含有0.3424mg二苯乙烯苷、0.3657mg葛根素及0.3493mg丹酚酸B的混合溶液。

2.3 制備供試品溶液 取20片降脂活血片，研細(xì)，經(jīng)4號(hào)篩，取5g降脂活血片，精密稱(chēng)定，放置于帶塞錐形瓶?jī)?nèi)，精密添加50ml 50%甲醇，稱(chēng)量，持續(xù)30min超聲處理（功率設(shè)定為250W，頻率為40KHz），放冷，并用50%甲醇補(bǔ)充減失重量，混合均勻，精密吸取2ml供試品，按照15000r/min，予以離心處理，持續(xù)10min，取上清液，用有機(jī)微孔濾膜濾過(guò)，取續(xù)濾液作為供試品溶液[2]。

2.4 制備陰性對(duì)照溶液 取缺少何首烏、丹參、葛根的三副處方，稀釋40倍，放在燒杯中，添加10倍水，煎煮2h，放冷，吸取2ml，按照15000r/min，離心處理，持續(xù)10min，取上清液，用有機(jī)微孔濾膜濾過(guò)，取續(xù)濾液作為陰性對(duì)照溶液。

2.5 陰性對(duì)照實(shí)驗(yàn) 取陰性對(duì)照溶液，在標(biāo)準(zhǔn)色譜條件下，進(jìn)樣測(cè)定。結(jié)果顯示，陰性樣品色譜圖中，丹酚酸B、葛根素及二苯乙烯苷相對(duì)保留時(shí)間處，未見(jiàn)色譜峰干擾，表示該方法專(zhuān)屬性好。

2.6 考察線性關(guān)系 分別取200ul二苯乙烯苷、葛根素、丹酚酸B對(duì)照品溶液，稀釋成2倍、4倍、8倍、16倍、32倍、64倍及128倍甲醇溶液，在色譜條件下，進(jìn)樣測(cè)定，根據(jù)色譜峰面積，對(duì)質(zhì)量濃度進(jìn)行線性回歸分析。結(jié)果顯示，二苯乙烯苷質(zhì)量濃度為2.673～342.9ug/ml，丹酚酸B質(zhì)量濃度為2.784～348.5ug/ml，葛根素質(zhì)量濃度為2.859～364.1ug/ml。

2.7 考察精密度 取供試品溶液，在色譜條件下，連續(xù)6次進(jìn)樣測(cè)定，測(cè)定樣品中待測(cè)成分峰面積，計(jì)算出峰面積的RSD。結(jié)果顯示，二苯乙烯苷RSD為3.45%，丹酚酸B RSD為0.58%，葛根素RSD為0.53%，由此表示儀器的精密度高。

2.8 考察重復(fù)性 取5g同一批號(hào)樣品，共6份，制備供試品溶液，在色譜條件下，測(cè)定3種待測(cè)成分含量RSD值。結(jié)果顯示，葛根素RSD值為4.89%，丹酚酸B RSD為3.00%，二苯乙烯苷RSD為3.41%，由此分析，該方法重復(fù)性好，與含量測(cè)定要求相符。

2.9 測(cè)定樣品含量 取降脂活血片，制備供試品溶液，在色譜條件下，測(cè)定3種待測(cè)成分含量，計(jì)算樣品中有效成分含量。結(jié)果顯示，每片降脂活血片包括0.1377mg二苯乙烯苷、0.7820mg丹酚酸B、0.3281mg葛根素。