農(nóng)林害蟲室內(nèi)生物測定方法概述

周 嫻,張恒嘉

(福建農(nóng)林大學(xué)林學(xué)院，福建 福州 350002)

1 背景

目前，我國在農(nóng)業(yè)和林業(yè)的發(fā)展上面臨著嚴重的蟲害危機。在農(nóng)業(yè)方面，農(nóng)業(yè)發(fā)展與糧食問題息息相關(guān)，早在1976年馬世駿等人就統(tǒng)計出每年全世界的糧食由于病蟲害影響損失了10%～15%[1]。而在林業(yè)方面，由于森林害蟲適應(yīng)力強、繁殖擴散速度快也給我國的森林資源造成了極大的損失。在2013年，國家林業(yè)和草原局統(tǒng)計得出全國森林蟲害面積達到了847.46萬hm2[2]。

我國對于農(nóng)林蟲害的防治手段主要方法有誘捕器誘捕[3]、化學(xué)農(nóng)藥施用[4]以及生物防治[5]等。其中，在對害蟲的化學(xué)防治和生物防治的研究中，生物測定是對藥效分析的關(guān)鍵試驗環(huán)節(jié)，而可靠的生物測定方法對于研究具有重要的意義。因此，本篇文章將對目前現(xiàn)有的一些農(nóng)林害蟲室內(nèi)生物測定體系進行總結(jié)概述，為今后農(nóng)林害蟲的防治研究提供基礎(chǔ)與參考。

2 農(nóng)林害蟲生物測定方法

2.1 觸殺式活性測定

觸殺劑是指接觸蟲體后透過害蟲體表使害蟲中毒致死的藥劑[6]。觸殺式殺蟲劑主要適用于刺吸式或舔吸式口器的害蟲，包括對同翅目、半翅目、雙翅目等在內(nèi)的昆蟲有殺蟲活性。目前較為常見的觸殺式生物測定方法包括：浸葉法、藥膜法、滴蟲法、浸蟲法、Potter噴霧法等。

2.1.1 浸葉法 浸葉法是指，將試蟲的食物浸入待測藥液后晾干，試蟲在取食過程中接觸藥液中毒，并在測定時間內(nèi)對試蟲的死亡情況進行統(tǒng)計的方法。目前，浸葉法較多應(yīng)用于煙粉虱、稻縱卷葉螟、梨小食心蟲等昆蟲的生物測定環(huán)節(jié)。

何玉仙等人在使用煙粉虱成蟲進行其對煙堿類殺蟲劑抗性的實驗中描述的浸葉生測法的主要方法為：將新鮮棉花打成小圓片，浸入稀釋成不同濃度的藥液，10S之后取出晾干，使用CO2對煙粉虱雌成蟲進行短暫的麻醉，轉(zhuǎn)移到培養(yǎng)皿中，48h后觀察記錄情況[7]。韋茂兔等人發(fā)明的1種針對煙粉虱成蟲的毒力測定方法[8]、蘇建亞等人公開發(fā)明的1種稻縱卷葉螟采集與生物測定方法[9]和庾琴等人的1種針對于梨小食心蟲的初孵幼蟲的毒力測定方法[10]中也用到了以上類似的方法。

2.1.2 藥膜法 藥膜法是將放置試蟲的容器浸泡于待測藥液中，使試蟲與容器接觸一定時間后致死的方法。中黑苜蓿盲蝽、薊馬等昆蟲可以使用藥膜法進行生物測定。

李國平等人測定殺蟲劑對中黑苜蓿盲蝽的毒力時，將丙酮溶液轉(zhuǎn)移到閃爍瓶中，熱狗機上旋轉(zhuǎn)使丙酮在室溫下?lián)]發(fā)，再將中黑苜蓿盲蝽成蟲接入瓶中，使其充分接觸，一段時間后測定死亡率[11]?？紫榱x等人對薊馬進行5種藥劑的室內(nèi)毒力測定實驗[12]和韓冬銀等人測定9種殺蟲劑對芒果薊馬的毒力實驗[13]中也均采用了藥膜法。

2.1.3 滴蟲法 滴蟲法是將待測藥液滴到試蟲的蟲體上，一定時間后統(tǒng)計死亡率的方法。滴蟲法可以在斜紋夜蛾、稻縱卷葉螟等昆蟲的生物測定中使用。

武懷恒等人采用滴蟲法測定農(nóng)藥對斜紋夜蛾幼蟲的殺蟲效果中，將供試農(nóng)藥原液使用超純水稀釋，并在斜紋夜蛾幼蟲的前胸背板滴上藥液，藥液處理之后正常飼喂新鮮棉花，48h后記錄試蟲死亡數(shù)量[14]。蘇建坤等人進行了稻縱卷葉螟抗藥性測定及抗性監(jiān)測實驗[15]時也采用了上述方法。

2.1.4 浸蟲法 浸蟲法是將試蟲直接浸入待測藥液，培養(yǎng)一定時間并記錄存活情況的方法。浸蟲法可以用于螨蟲、蚜蟲、松材線蟲、蚜蟲等昆蟲的生物測定環(huán)節(jié)。

孟和生在進行比較兩種不同生物測定方法對殺螨劑毒力測定結(jié)果的影響時，將害螨的背部固定于粘貼有雙面膠的玻片上，初步剔除死亡和不活潑的試蟲，將帶螨玻片浸入藥液中，吸干多余藥液，于生化培養(yǎng)箱中放置24h，統(tǒng)計死亡率[16]。蔡文欣等人在進行高效殺滅松材線蟲藥物配制的實驗中采用了浸蟲法：配制不同藥液，挑取供試松材線蟲到離心管中，加入藥劑后置于恒溫箱中靜置，復(fù)蘇后鏡檢，檢測線蟲的死亡數(shù)[17]。羅蘭等人在對小麥蚜蟲進行了殺蟲劑的毒力測定[18]時也采用了類似方法。

2.1.5 Potter噴霧法 Potter噴霧法是將試蟲先接到合適的帶有食物的容器中，使用Potter噴霧塔噴施一定時間藥劑，再培養(yǎng)一定時間并統(tǒng)計試蟲死亡率的方法。目前，該方法可用于煙粉虱成蟲的生物測定環(huán)節(jié)。

王澤華等人公開發(fā)明了一種煙粉虱成蟲的室內(nèi)測定方法。其步驟為：將塑料養(yǎng)蟲盒的底部鋪上一層1%瓊脂，并將黃瓜葉片背面置于其上，接入煙粉虱成蟲，保鮮膜封口并用解剖針扎數(shù)孔，之后置于-18℃冰箱內(nèi)使試蟲凍僵2～3min，并迅速將其置于Potter噴霧塔下，噴施藥劑后重新封口，置于27℃恒溫箱中飼養(yǎng)48h，觀察并統(tǒng)計存活情況[19]。

2.2 胃毒式活性測定

胃毒劑是指藥劑進入害蟲體內(nèi)，經(jīng)胃腸道吸收使害蟲中毒致死的藥劑[6]。胃毒式殺蟲劑適用于咀嚼式口器害蟲，具有該口器的害蟲較多是鞘翅目、鱗翅目、直翅目和膜翅目害蟲。該生物測定方法中又以培養(yǎng)基混藥法、葉片夾毒法為常見方法。

2.2.1 培養(yǎng)基混藥法 培養(yǎng)基混藥法是一種配制對應(yīng)害蟲的人工飼料，按照一定比例在飼料中添加毒素，并將帶毒飼料直接飼喂試蟲，達到生物測定目的的方法。其可用于甜菜夜蛾、綠盲蝽若蟲等昆蟲。

曾曉慧等人進行的蘇云金芽孢桿菌對甜菜夜蛾幼蟲的毒力測定中提及一種培養(yǎng)基混藥法。其方法為：將稀釋好的藥液均勻混入人工飼料中，倒入24孔板，接入甜菜夜蛾初孵幼蟲，一段時間后統(tǒng)計其死亡率[20]。梁革梅等人在發(fā)明專利中提及了有毒物質(zhì)對綠盲蝽若蟲的毒力測定方法：將待測藥劑與人工飼料混合，并將其制成膠囊狀，接入試蟲，一定時間后統(tǒng)計并得到生物測定數(shù)據(jù)[21]。

2.2.2 葉片夾毒法 葉片夾毒法是將待測藥劑加在一片葉片上，再用另一葉片覆蓋，提供給試蟲當(dāng)食物，一定時間后統(tǒng)計其存活情況的方法。美國白蛾幼蟲可以采用該方法進行生物測定。

范立鵬等人在進行紫莖澤蘭乙醇提取物對美國白蛾幼蟲的毒力測定中提及一種夾毒葉片法：使用打孔器將桑葉打成小圓葉片，將待測液使用微量點滴儀滴在葉片中央，待揮發(fā)，再將涂有漿糊的葉片覆蓋于藥面上制成夾毒的葉片，置于保濕培養(yǎng)皿中并接入試蟲，喂食2h后，換成新鮮無毒桑葉，48h后統(tǒng)計試蟲死亡情況并計算[22]。

2.3 內(nèi)吸式活性測定

內(nèi)吸劑指的是能夠被植物的葉、莖、根或種子吸收，并輸導(dǎo)至植物各部分組織內(nèi)，植物汁液被害蟲取食后，害蟲中毒死亡的藥劑。內(nèi)吸式殺蟲劑適用于防治具有刺吸式口器的害蟲[6]，而刺吸式口器一般為同翅目、半翅目、蚤目、虱目和部分雙翅目昆蟲所有。目前較為常見的有葉片吸收法等。

葉片吸收法指的是將葉柄于藥液中浸泡一定時間后取出，待葉柄吸收藥液之后，取下相同大小的葉片并接入試蟲進行的生物測定方法。煙粉虱成蟲可以使用上述方法進行生物測定。何玉仙等人在使用煙粉虱成蟲進行其對煙堿類殺蟲劑抗性的實驗中采用的內(nèi)吸生測法的主要方法為：從棉花苗上摘下新鮮供試葉片，將葉柄浸入系列濃度藥液，再用打孔器打下小圓片，正面朝下置于平鋪有瓊脂的培養(yǎng)皿中，使用CO2將煙粉虱的雌成蟲進行短暫的麻醉，轉(zhuǎn)移到培養(yǎng)皿中，置于培養(yǎng)箱中培養(yǎng)，48h后觀察記錄情況[7]。

3 展望

目前，農(nóng)林害蟲給我國的農(nóng)業(yè)、林業(yè)已造成極大的經(jīng)濟損失，并且嚴重破壞了生態(tài)環(huán)境的穩(wěn)定性，因此農(nóng)林害蟲的防治工作刻不容緩。當(dāng)前，對于蟲害的防治研究中需要同時考慮對蟲害的抑制以及環(huán)境保護2個方面，即在穩(wěn)定害蟲數(shù)量的同時確保投放的藥物不造成對其他生物和環(huán)境的危害，保證生態(tài)環(huán)境的可持續(xù)發(fā)展。因此，可靠有效的生物測定對于農(nóng)林蟲害的防治的研究具有重要的意義，而對于不同類型的農(nóng)林蟲害采取針對性的生物測定方法進行試驗對于后續(xù)的田間應(yīng)用具有現(xiàn)實意義。