甘肅酒泉發(fā)現(xiàn)坎諾單孢菌引起的甜瓜倒秧

何蘇琴 白濱 文朝慧 荊卓瓊 孟選寧 徐生軍

摘要 ：2018年7月中旬在甘肅省酒泉市金塔縣，甜瓜成熟前10～20 d，一些田塊出現(xiàn)了嚴(yán)重的倒秧，從罹病植株的褐腐根上分離到坎諾單孢菌Monosporascus cannonballus，病株分出率達(dá)76.9%。致病性測(cè)定結(jié)果顯示：在試驗(yàn)條件下（25℃±3℃），菌株TG?84對(duì)甜瓜（品種：‘86?1）的致病性強(qiáng)，出苗后13 d，倒苗率達(dá)80%。

關(guān)鍵詞 ：甜瓜;?坎諾單孢菌

中圖分類號(hào)：

S 436.5

文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼：?B

DOI：?10.16688/j.zwbh.2018534

Emergence of melon collapse caused by Monosporascus cannonballus

in Jiuquan region， Gansu province

HE Suqin1，2，?BAI Bin3，4，?WEN Zhaohui5，?JING Zhuoqiong1，2，?MENG Xuanning6，?XU Shengjun1，2

（1. Institute of Plant Protection， Gansu Academy of Agricultural Sciences， Lanzhou?730070， China; 2. Scientific

Observing and Experimental Station of Crop Pests in Tianshui， Ministry of Agriculture， Tianshui?741200， China;

3. Institute of Agricultural Quality Standards and Testing Technology， Gansu Academy of Agricultural Sciences，

Lanzhou?730070， China; 4. Laboratory of Quality & Safety Risk Assessment for Agro?Products， Ministry

of Agriculture， Lanzhou?730070， China; 5. Comprehensive Technical Center of Gansu Entry?Exit Inspection and

Quarantine Bureau， Lanzhou?730020， China; 6. Jiuquan Institute of Agricultural Sciences in Gansu， Jiuquan?735000， China）

Abstract

In mid?July of 2018， severe melon root rot and vine decline broke out in some plots 10-20 days before melon maturity in Jinta county， Jiuquan city， Gansu province. Monosporascus cannonballus was isolated from diseased roots with an isolation rate of 76.9%. The pathogenicity test showed that the strain TG?84 had aggressive virulence to melon （variety： ‘86?1）， with a seedling collapse rate of 80% 13 days after emergence under the test conditions （25℃±3℃）.

Key words

melon;?Monosporascus cannonballus

由坎諾單孢菌Monosporascus cannonballus引起的甜瓜黑點(diǎn)根腐病亦被稱作倒秧（melon collapse）、突然枯萎（sudden wilt）、根腐（root rot）、敗藤（vine decline）及根腐和敗藤（root rot and vine decline），是全球范圍內(nèi)干旱、半干旱甜瓜種植區(qū)的毀滅性病害[12]。病害的癥狀特點(diǎn)主要是甜瓜植株在收獲前10～14 d突然凋萎，病株的根部可見褐色壞疽斑或褐腐根，有時(shí)可見生于病根上的凸起的黑色子囊殼;病害造成的損失率約為10%～25%，個(gè)別田塊可達(dá)100%[1]。

繼2005年7月中旬在蘭州市[3]和2009年8月上旬在武威市（未報(bào)道）從罹病的甜瓜根上分離到坎諾單孢菌之后，2018年7月下旬從甘肅省酒泉市金塔縣的甜瓜倒秧株病根上再次分離到該菌，病株分出率達(dá)76.9%。

1?材料與方法

1.1?病害標(biāo)樣采集

2018年7月25日，從甘肅省酒泉市金塔縣采集地上部表現(xiàn)不同程度凋萎癥狀的甜瓜病株13株，將病株的根帶回實(shí)驗(yàn)室（蘭州），用于病原菌分離（圖1）。

1.2?培養(yǎng)基及配方

PDA：馬鈴薯200 g，葡萄糖20 g，瓊脂粉12 g，自來水1 000 mL。

1.3?病原菌分離

以病株為單位，采用組織分離法進(jìn)行病原菌的分離。依據(jù)病株的受害情況，每病株取明顯變色的病組織5～15塊（長(zhǎng)度約5～10 mm），經(jīng)75%乙醇表面消毒5～10 s，滅菌水沖洗4次，置PDA平板上25℃黑暗培養(yǎng)，及時(shí)挑取菌落尖端菌絲進(jìn)行純化，純化后的菌株接種于PDA平板23～25℃黑暗培養(yǎng)至60 d，觀察產(chǎn)孢情況。選其中的TG?84為代表菌株用于后續(xù)的試驗(yàn)。

1.4?致病性測(cè)定

菌株TG?84預(yù)先在PDA平板上，23～25℃培養(yǎng)20 d，取甜瓜（品種：‘86?1）種子100粒，55℃溫湯浸種后，置于30℃溫箱內(nèi)催芽，約24 h后，挑選胚根長(zhǎng)10 mm左右的發(fā)芽種子播種于盛有滅菌營養(yǎng)土的小花盆中（直徑11.5 cm，高7 cm）;

將直徑5 mm的菌絲塊，貼接于發(fā)芽種子的胚根上，每粒發(fā)芽種子接種1枚菌絲塊，接菌后覆土（覆土厚度約2 cm），以接種直徑5 mm的無菌PDA培養(yǎng)基塊為對(duì)照。共處理4盆，每盆5粒種子;常規(guī)管理，試驗(yàn)期間溫度（25±3）℃。20 d后挖出所有試驗(yàn)處理植株，洗根、調(diào)查發(fā)病率，并取10株發(fā)病植株進(jìn)行病原菌的重分離。

2?結(jié)果與分析

2.1?病原菌形態(tài)特征

菌株TG?84在PDA平板上于23～25℃條件下黑暗培養(yǎng)。菌落初無色，漸呈淡褐或灰褐色;氣生菌絲稀疏或在菌落邊緣稍豐茂;培養(yǎng)20 d左右開始產(chǎn)生子囊殼;培養(yǎng)60 d左右子囊殼成熟;子囊殼均勻散生，菌落邊緣稍密集;子囊殼初白色，成熟時(shí)黑色，球形，408.0～588.0 μm;每個(gè)子囊中僅產(chǎn)生一個(gè)子囊孢子，子囊壁易消解;子囊孢子球形或近球形，初無色或淡褐色，成熟時(shí)深褐色至黑色，32.8～47.2 μm（圖2a～h）。

菌株TG?84的形態(tài)特征與文獻(xiàn)描述[4]基本一致，故將其鑒定為坎諾單孢菌M.cannonballus Pollack & Uecker。

2.2?病原菌分離結(jié)果

從13個(gè)病株樣品中共分離得到24株具有M.cannonballus典型形態(tài)特征的菌株。13個(gè)病株中有10個(gè)病株的罹病根組織上分離到M.cannonballus，病株分出率達(dá)76.9%。

2.3?分離菌株的致病性

菌株TG?84對(duì)供試的甜瓜品種具有強(qiáng)的致病性。接種后14 d（出苗后7 d）開始出現(xiàn)倒苗株;接種后20 d（出苗后13 d），倒苗株數(shù)增加至16株，倒苗率達(dá)80%，洗根檢查發(fā)現(xiàn)，甜瓜根被侵染率達(dá)100%，受害根呈黃褐色至深褐色。對(duì)照未發(fā)病。發(fā)病株原接種菌的分出率達(dá)100%（圖2i～n）。

3?討論

在我們的數(shù)次調(diào)查中，并沒有在罹病甜瓜的病根上看到M.cannonballus的黑點(diǎn)狀子囊殼和子囊孢子，這可能是不同地域的自然條件和栽培模式不同所造成的癥狀差異。

M.cannonballus所具有的獨(dú)特的形態(tài)特征易于識(shí)別和準(zhǔn)確鑒定：我們2005年分離鑒定的2個(gè)菌株[3]，其rDNA?ITS序列（菌株TG?1

：GenBank登錄號(hào)KY072940;菌株TG?2：GenBank登錄號(hào)KY072941，）與Genbank 中M.cannonballus（

菌株CBS 58693：

GenBank登錄號(hào)JQ771930，）的序列同源性達(dá)100%，與形態(tài)學(xué)鑒定結(jié)果一致。但傳統(tǒng)的組織分離和形態(tài)學(xué)鑒定需要的時(shí)間較長(zhǎng)（2個(gè)月或更長(zhǎng)）。1995年Lovic等和2008年P(guān)ico等設(shè)計(jì)和改進(jìn)的特異性引物對(duì)“Forward：5′?CTT ACC TAT GTT GCC TCG GCG?3′;Reverse：5′?AAG AGT TTA GAT GGT CCA CCG G?3′”能在M.cannonballus的純培養(yǎng)物和被M.cannonballus侵染的病根的DNA模板中擴(kuò)增出112 bp的特異性條帶[57]，可大大縮短病菌鑒定及田間病害檢測(cè)所需要的時(shí)間。

M.cannonballus 被認(rèn)為是土壤中固有的土著菌，瓜類作物，特別是易感病甜瓜的連續(xù)種植使得病菌種群數(shù)量得以快速增加，引起嚴(yán)重病害。在巴西，從種植不同作物和未墾植的荒地共10塊地采集的土壤樣本中都檢出了M.cannonballus的子囊孢子，種植洋香瓜的土壤樣本中子囊孢子平均密度明顯高于其他樣本[8]。每克土壤含有2個(gè)子囊孢子便有可能給甜瓜生產(chǎn)造成威脅[9]。

以色列的Pivonia等2006年-2008年的研究結(jié)果顯示：嘧菌酯azoxystrobin，咪鮮胺prochloraz，吡唑醚菌酯pyraclostrobin+啶酰菌胺boscalid對(duì)M.cannonballus引起的甜瓜突然枯萎顯示出較好的田間防效;咯菌腈fludioxonil高劑量使用時(shí)也有防效，但對(duì)甜瓜有藥害;氟啶胺fluazinam（這是發(fā)現(xiàn)的第一種能夠抑制黑點(diǎn)根腐病的殺菌劑，自2000年以來一直在以色列使用）防效不佳[10]。

意大利的Aleandri等研究發(fā)現(xiàn)：利用茉莉酸甲酯（MeJA）誘導(dǎo)甜瓜對(duì)Monosporascus根腐和倒秧的抗性（浸泡種子和葉面施用），可降低病害的嚴(yán)重度[11]。

突尼斯的Rhouma等的研究結(jié)果顯示：綠色木霉Trichoderma viride 和哈茨木霉T.harzianum對(duì)M.cannonballus菌絲生長(zhǎng)的抑制率超過90%;盆栽試驗(yàn)中可明顯降低發(fā)病率和病情指數(shù)，具有病害防治的潛能[12]。

西北地區(qū)是我國甜瓜優(yōu)勢(shì)主產(chǎn)區(qū)之一，2011年播種面積為8.38萬 hm2，產(chǎn)量約為265.9萬 t，分別占全國甜瓜總播種面積和產(chǎn)量的21.1%和208%[13]。在栽培方式改變、品種更迭以及全球變暖等因素的影響下，甜瓜病害也發(fā)生了重要變化[14]。

在西北甜瓜產(chǎn)區(qū)中，有部分區(qū)域是甜瓜黑點(diǎn)根腐病的適生區(qū)，建議相關(guān)部門盡早組織展開病害發(fā)生情況調(diào)查，并針對(duì)病害發(fā)生區(qū)的自然條件和栽培模式開展病害綜合防治技術(shù)研究，以保障和促進(jìn)西北地區(qū)甜瓜產(chǎn)業(yè)的健康發(fā)展。

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（責(zé)任編輯：楊明麗）